Generering og samdyrkning af primære mikroglia og kortikale neuroner hos murine

Mikroglia er vævsresidente makrofager i centralnervesystemet (CNS), der udfører adskillige funktioner, der understøtter neuronal sundhed og CNS-homeostase. De er en stor population af immunceller forbundet med CNS-sygdomsaktivitet, der anvender reaktive fænotyper, der potentielt bidrager til neuronal skade under kroniske neurodegenerative sygdomme såsom multipel sklerose (MS). De forskellige mekanismer, hvormed mikroglia regulerer neuronal funktion og overlevelse under sundhed og sygdom, forbliver begrænsede på grund af udfordringer med at løse de komplekse in vivo-interaktioner mellem mikroglia, neuroner og andre CNS-miljøfaktorer. Således er in vitro-tilgangen med co-dyrkning af mikroglia og neuroner fortsat et værdifuldt værktøj til at studere mikroglia-neuronale interaktioner. Her præsenterer vi en protokol til at generere og samdyrke primære mikroglia og neuroner fra mus. Specifikt blev mikroglia isoleret efter 9-10 dage in vitro fra en blandet glia-kultur etableret fra hjernehomogenater afledt af neonatale mus mellem postnatale dage 0-2. Neuronale celler blev isoleret fra hjernebarken hos museembryoner mellem embryonale dage 16-18. Efter 4-5 dage in vitro blev neuronale celler sået i 96-brønds plader, efterfulgt af tilsætning af mikroglia for at danne co-kulturen. Omhyggelig timing er afgørende for denne protokol, da begge celletyper skal nå eksperimentel modenhed for at etablere co-kulturen. Samlet set kan denne co-kultur være nyttig til at studere mikroglia-neuron-interaktioner og kan give flere udlæsninger, herunder immunfluorescensmikroskopi, levende billeddannelse samt RNA- og proteinassays.