マウス初代ミクログリアと皮質ニューロンの作製と共培養

ミクログリアは、中枢神経系(CNS)の組織に常在するマクロファージであり、ニューロンの健康とCNSの恒常性をサポートする多くの機能を果たしています。彼らは、CNS疾患の活動性に関連する免疫細胞の主要な集団であり、多発性硬化症(MS)などの慢性神経変性疾患における神経損傷に寄与する可能性のある反応性表現型を採用しています。ミクログリアが健康および疾患中のニューロン機能と生存を制御する明確なメカニズムは、ミクログリア、ニューロン、およびその他のCNS環境因子との間の複雑な in vivo 相互作用を解決する上での課題のために、依然として限られています。したがって、ミクログリアとニューロンを共培養する in vitro アプローチは、ミクログリアとニューロンの相互作用を研究するための貴重なツールであり続けています。ここでは、マウスから初代ミクログリアとニューロンを作製し、共培養するためのプロトコールを紹介します。具体的には、ミクログリアは、出生後0〜2日の間に新生児マウス由来の脳ホモジネートから確立された混合グリア培養物から in vitro で9〜10日後に単離されました。ニューロン細胞は、胚の16-18日の間にマウス胚の脳皮質から単離された。 in vitroで4〜5日後、ニューロン細胞を96ウェルプレートに播種し、続いてミクログリアを添加して共培養を形成しました。このプロトコルでは、両方の細胞タイプが共培養を確立するために実験的成熟に達する必要があるため、慎重なタイミングが重要です。全体として、この共培養はミクログリアとニューロンの相互作用の研究に有用であり、免疫蛍光顕微鏡法、ライブイメージング、RNAおよびタンパク質アッセイなど、複数の読み出しを提供できます。