Generering og samdyrking av murine primære mikroglia og kortikale nevroner

Mikroglia er vevsresidente makrofager i sentralnervesystemet (CNS), som utfører en rekke funksjoner som støtter nevronal helse og CNS-homeostase. De er en stor populasjon av immunceller assosiert med CNS-sykdomsaktivitet, og tar i bruk reaktive fenotyper som potensielt bidrar til nevronal skade under kroniske nevrodegenerative sykdommer som multippel sklerose (MS). De distinkte mekanismene som mikroglia regulerer nevronal funksjon og overlevelse under helse og sykdom forblir begrenset på grunn av utfordringer med å løse de komplekse in vivo-interaksjonene mellom mikroglia, nevroner og andre CNS-miljøfaktorer. Dermed er in vitro-tilnærmingen til samdyrking av mikroglia og nevroner fortsatt et verdifullt verktøy for å studere mikroglia-nevronale interaksjoner. Her presenterer vi en protokoll for å generere og samdyrke primære mikroglia og nevroner fra mus. Spesifikt ble mikroglia isolert etter 9-10 dager in vitro fra en blandet gliakultur etablert fra hjernehomogenater avledet fra nyfødte mus mellom postnatale dager 0-2. Nevronale celler ble isolert fra hjernebarken til museembryoer mellom embryonale dager 16-18. Etter 4-5 dager in vitro ble nevronale celler sådd i 96-brønns plater, etterfulgt av tilsetning av mikroglia for å danne kokulturen. Nøye timing er avgjørende for denne protokollen, da begge celletypene må nå eksperimentell modenhet for å etablere kokulturen. Samlet sett kan denne kokulturen være nyttig for å studere mikroglia-nevron-interaksjoner og kan gi flere avlesninger, inkludert immunfluorescensmikroskopi, levende avbildning, samt RNA- og proteinanalyser.