Generering och samodling av murina primära mikroglia och kortikala neuroner

Mikroglia är vävnadsresidenta makrofager i centrala nervsystemet (CNS), som utför många funktioner som stöder neuronal hälsa och CNS-homeostas. De är en stor population av immunceller associerade med CNS-sjukdomsaktivitet, och antar reaktiva fenotyper som potentiellt bidrar till neuronal skada under kroniska neurodegenerativa sjukdomar som multipel skleros (MS). De distinkta mekanismerna genom vilka mikroglia reglerar neuronal funktion och överlevnad under hälsa och sjukdom förblir begränsade på grund av utmaningar med att lösa de komplexa in vivo-interaktionerna mellan mikroglia, neuroner och andra CNS-miljöfaktorer. Således är in vitro-metoden att samodla mikroglia och neuroner fortfarande ett värdefullt verktyg för att studera mikroglia-neuronala interaktioner. Här presenterar vi ett protokoll för att generera och samodla primära mikroglia och neuroner från möss. Specifikt isolerades mikroglia efter 9-10 dagar in vitro från en blandad gliakultur etablerad från hjärnhomogenat från neonatala möss mellan postnatal dag 0-2. Neuronala celler isolerades från hjärnbarken hos musembryon mellan embryonal dag 16-18. Efter 4-5 dagar in vitro såddes neuronala celler i 96-brunnars plattor, följt av tillsats av mikroglia för att bilda samkulturen. Noggrann timing är avgörande för detta protokoll eftersom båda celltyperna måste nå experimentell mognad för att etablera samkulturen. Sammantaget kan denna samkultur vara användbar för att studera interaktioner mellan mikroglia och neuron och kan ge flera avläsningar, inklusive immunofluorescensmikroskopi, live-avbildning, samt RNA- och proteinanalyser.