Sigara insan Stereotaksik Uzay Primate Beyin Diseksiyon

Özet

Insan dışı primat beynin normal işleme anlamak için önemli bir translasyonel türüdür. Primat beynin anatomik organizasyonu, insanlarda normal ve patolojik durumları önemli bilgiler sağlayabilir.

Özet

Insan olmayan primatlardan, insanlarda gelişim ve yaşlanma süreçleri anlamak için mükemmel bir translasyonel modeli sağlar

Protokol

Bölüm 1: Ön-işleme doku

1. Doku paraformaldehid, glutaraldehid, ya da formalin ile perfüze edilmelidir. Bu, genellikle diğer organlarda hasat için kullanılan standart transcardial perfüzyon yoluyla elde edilebilir. Bu çalışmada konu derinden sodyum pentobarbital (25 mg / kg, iv), aşırı dozda ötenazi ketamin hidroklorür (10 mg / kg, im), sedasyon ve tamamen exsanguinated.This takip olana kadar 0.1 M PBS ile transcardially perfüze 5 dakika (~ 1 litre) PBS içinde% 4 paraformaldehid çözüm.

Bölüm 2: Stereotaksik engelleme

1. Önce baş stereotaksik çerçeve içine yerleştirerek Horsley-Clarke/interaural uçak sıfır koordinatları alınması gerekir. Bu kulağı arasında teorik bir orta nokta. Bu düzlemde ölçmek için, kulak çubukları eşit aparat takılır gerekir, daha sonra stereotaksik manipülatör kolunun bir neşter bıçak ve kulak çubukları arasındaki orta ölçmek. Bu araştırma ihtiyaçlarını dayalı doku blok nerede belirlemek için önemlidir. Bu aşama tamamlandıktan sonra kafatası stereotaksik cihazın içine sabitleme için hazırlıklı olmak gerekiyor.
2. Baş stereotaksik çerçeve içine yerleştirmek için alt çene kemik rongeurs ve bir neşter ile temizlenebilir olması. Ayrıca cilt, kas, bağ doku ve kemik, kafatası açığa amacıyla çıkarılmalıdır. Bağ dokusu, kafatası kaldırıldıktan sonra, calvaria (oksipital kemik tablo kısmı parietal yanı sıra, reklam frontal kemiklerin) yontulmasıyla beynin maruz bırakmayın. Calvaria mevcut deney parçası olarak tüm hazır kaldırıldı. Temporal kemikler kulak kanalları stereotaksik çerçeve içine başını yere sağlam olması gerekir, çünkü tamamen kaldırmak için değil, dikkatli olun. Maruz kalan bir beyin kalan dura madde çıkarılmalıdır. Kafatası stereotaksik çerçeve içine yerleştirilmek üzere hazırdır.
3. Aynı şekilde tek bir stereotaksik ameliyat olacağı, göz, damak ve kulak çubukları ağzı stereotaksik aparat sabit olduğunu ayarlayabilirsiniz. Stereotaksik manipülatör yerleştirin ve önceden belirlenmiş (A / P) anterior / posterior koordinatlarda manipülatör beynin lateral hareket. Yavaşça, beyin içine bıçak alt beyinden gelen bıçak tamamen yükseltmek, daha sonra mediale hareket ettirin ve tekrar bıçak düşük. Bıçak ters yarımkürede lateral ulaşıncaya kadar bu iki adımı tekrarlayın. Bu ilk koronal blok tamamlar. Tüm beyni bloke dek sonraki koronal blok A / P ekseni ve tekrar manipülatör 1cm hareket.

Bölüm 3: kafatası beyin çıkarma

1. Stereotaksik çerçeve başını çıkarın ve elinizin avuç maruz kalan beyin tutun. Coddling beyin elinizin avuç içinde hafifçe yerleştirerek ve frontal loblar, kafatasının, beynin bu en aza indirir hareketi arasında serçe parmak beyin güvenli çalışın. Pial beyin yüzeyinin kurumasını önlemek için, bir parça PBS beyin boyunca nemlendirilmiş gazlı bez yerleştirin. Omuriliğe birlikte kafatası ve yonga uzak kalan oksipital ve temporal kemikler tarafından iyice kafa tutun. Bu beyin taban ve yanal yönlerini ortaya koyar. Son olarak koku ampuller erişim sağlayacaktır kalan frontal kemik ve burun kemiği, kaldırmak. Kafatası tabanı kaldırmak gibi beyin biraz hareket eder ve frontal loblar fontal kemik pürüzlü kenarlar zarar görmüş olabilir, çünkü son frontal kemikte kaldırmak için önemlidir. Kesme ve kalan dura madde kaldırmak. Dikkatle, beynin ön kaldırın kafatası, beyin ve beynin altında neşter kaydırın.

Bölüm 4: Ölçüler

1. Donmaya karşı önce yapılabilir yararlıdır ölçümlerin bir dizi vardır. Örneğin, bir cetvel ile beyin A / P ekseni. Ayrıca belirli bir yoğunluk mezun silindir hacmi deplasman (Tablo 1) ağırlık bölünmesi yerinden su hacmini ölçerek, beyin ağırlığında ölçülebilir.

Bölüm 5: Son beyin engelleme.

1. Genelde beyin neşter bıçak takıldığında bunu tamamen beyin tam dorsal-ventral ölçüde nüfuz etmek için yeterince uzun değildir. Beyin kaldırılır ve brüt ölçümler elde edildikten sonra, bir doku dilimleme bıçağı alır ve beynin ventral tarafında (Şekil 2) yoluyla beyni bloke bitirmek.
2. Blokları dondurma önce, bakımı, 4 ˚ C kadar beyin lavabolar (10, 20, ve% 30) doku cryoprotect kademeli PBS-tamponlu sakaroz çözümler gereklidir. Genellikle 2-3 gün ve% 20 ek 3-5 gün kabın dibine batırmak için bloklar için% 30,% 10 bir gece inkübasyon alır. Inci bir günlük değişime% 30 sakaroz çözeltisini tavsiye edilir.

Bölüm 6: Temsilci Sonuçlar

Beyin kafatası kaldırıldıktan sonra yapılabilir brüt morfolojik ölçümleri vardır. Bunlar A / P uzunluk, ağırlık, ve özgül yoğunluğu (Tablo 1). Biz genellikle 1cm (Şekil 1) ölçüm 6-7 bloklar halinde beyin blok. Her bir parça sonra fotoğraflandı (Şekil 2) ve daha fazla araştırma ihtiyaçlarına bağlı olarak disseke veya kademeli sakaroz çözümler dondurmak için hazırlanmış olabilir.

Konu	A / P Uzunluk (Mm)	Ağırlık (Gram)	Su Hacmi (Ml)	Özgül Yoğunluk (G / ml)
O2303-2-1-1	64,3	28,1	24	1,171
O5180-1	71,3	38,7	34	1,138
O2708-3-1	62,8	28,7	26	1,104
O9184-4-2	65,3	29,5	24	1,229
N459-1-14-2	68,2	31,6	26	1,215
ORTALAMA	66,38	31,32	26,8	1,171
STD DEV	3,38	4,33	4,17	0,052

5 Ay Eski Vervets sağ yarımkürede Tablo 1 Brüt Morfolojik Ölçümleri

Şekil 1. Beyin engellemek için kullanılan koronal planlarda Şemalar Bu bir dışsallaşmış yetişkin vervet beyin bir örnektir. Engelleme işlemi örneği. Burada dikey çizgiler genellikle her yarımkürede 7 koronal blok üreten, 1 cm aralıklı.

Şekil 2. Stereotaksik alan beyin doku bloklar Her blok 50μm alınan yaklaşık 200 bölüm verim. Bu örnekleme şeması ile koronal planda dilimlenmiş korteks üzerinden 1200'den fazla bölümleri beyincik ve ek bir 400-500 olacak.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

St Kitts vervet (Chlorocebus aethiops sabeus) insanların kortikal ve subkortikal beyin gelişiminde benzer alışkanlıkları ve oranları ile bir Eski Dünya primat. Bu tür gibi karmaşık insan davranış bozuklukları endişeli davranış, hipertansiyon ^8, hemisferektomi ^9, Parkinson hastalığı ^10, Alzhemier hastalığında ¹¹ ve alkol kötüye kullanımı ¹² modeli için kullanılır olmuştur. Daha yakın zamanlarda, bu tür natüralist prenatal et...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Scalpel	Fine Science Tools	10003-12
Scalpel blades	Fine Science Tools	10011-00
Scissors	Fine Science Tools	14090-11	Any surgical scissors are sufficient
Rongeurs	Fine Science Tools	16121-14
Forceps	Fine Science Tools	11027-12
Filter paper	Fisher Scientific	09-924-150
Stereotaxic Frame	Kopf Instruments
Tissue slicing blade	Thomas Scientific