Bradford Protein Testi lineerleştirilmesi

Özet

Hızlı ve rahat Bradford yöntemi ile protein tayini doğruluk ve hassasiyet içsel doğrusal tehlikeye düşer. Biz büyük ölçüde hassasiyeti artırır yaklaşık 10 kat testin duyarlılığını artırır ve anlamlı deterjanların müdahaleleri azaltıyor, basit bir doğrusallaştırma prosedürü göstermektedir.

Özet

Bradford Coomassie parlak mavi tayininde protein mikrogram miktarların belirlenmesi, 590 nm'de absorbans ölçümü ile gerçekleştirilir. Bu en yaygın test biyokimyasal ölçümleri normalleştirme amacıyla, hızlı ve basit bir protein, hücre lizatları, hücresel kesirler, ya da rekombinant protein örneklerinin kantifikasyon sağlar. Ancak, içsel bir doğrusal bu yöntemin duyarlılığı ve hassasiyeti uzlaşır. Bu, standart test koşulları altında 590 nm'de absorbans ölçümleri ve 450 nm dalga oranı, protein konsantrasyonu ile kesinlikle doğrusal olduğunu göstermiştir. Bu basit bir prosedür doğruluğunu artırır ve 50 ng bovine serum albumin, 10 kat izin kantifikasyon hakkında testinin duyarlılığını artırır. Ayrıca, sık hücre lizatları oluşturmak için kullanılan deterjanların piyasaya girişim yeni bir protokol tarafından büyük ölçüde azalır. Kitlesel eylem ve Beer yasası temelinde geliştirilen bir lineer denklem deneysel veriler mükemmel uyuyor.

Protokol

Bradford Protein Kalibrasyon Grafik Doğrusallaştırma:

¹ Bradford testinin yaygın olarak bilinen Coomassie parlak mavi protein tahlil, yaygın, hızlı ve kullanışlı bir protokol yanı sıra bağıl duyarlılık nedeniyle kullanılır . Ne yazık ki, büyük ölçüde protein konsantrasyonları (Şekil 1) üzerinde geniş bir eğrilik var. Bu nedenle, nispeten yüksek protein konsantrasyonları, 2-10 mg / ml BSA, sadece dar bir aralıkta daha iyi (Şekil 1, yeşil) lineer regresyon uygun kalibrasyon grafiği için kullanılır. Ancak, doğrusal olmayan büyük bir hata önlemek için kalibrasyon grafiği sınırlı giren bilinmeyen örneklerin protein konsantrasyonu gere....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Bradford protein tahlil performans ve bağıl duyarlılık kolaylığı nedeniyle popüler. Protokol ile elde edilen aralığı tüm protein konsantrasyonları üzerine doğrusallaştırma, bilinmeyen örnekler aralığında kalibrasyon grafiği düşmeye gerek yok, burada daha fazla testin kolaylaştırır sundu.

Önemlisi, daha da geliştirilmiş protokol orijinal Bradford protokolü üzerinden aşağıdaki avantajları sağlar:

1. Doğruluğunu arttırdı.
2. Hassasiyet, .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bradford reagent	Bio-Rad	500-0006
Bovine Serum Albumin	Amersco	0332
Multiplate absorbance reader	BioTek	Synergy2