Protozoa Termit Gut Karşı Ligandla litik Peptitler Protozoacidal Aktivitesi Test In vitro (Protozoa Kültür) ve In vivo (Mikroenjeksiyon içine Termit Hindgut)

Özet

Ligandlar protozoa Formosan litik peptitler ile birleştiğinde floresan mikroskopi ve bu ligandlar kullanılarak yeraltı termitler bağırsak protozoa öldürmek selüloz sindiren bu yüzey membran bağlamak gösteren prosedürleri mevcut In vitro (Anaerobik protozoa kültürü) ve In vivo (Termit hindgut içine enjeksiyon).

Özet

Biz kimyasal pestisit kullanımı konusunda daha az güven yol açacak yeraltı termit kontrol etmek için yeni bir yaklaşım geliştirmektedir. Yeraltı termitler, ahşap sindirmek için verimli işçi hindguts protozoa bağlıdır. Parçalayıcı peptidler, protozoa parazitleri (Mutwiri ve ark 2000) çeşitli öldürmek için gösterilen ve aynı zamanda Formosan yeraltı termit, Coptotermes formosanus (Husseneder ve Collier 2009) bağırsak protozoa olmuştur . Parçalayıcı peptidler ökaryotlar nonspesifik bağışıklık sisteminin bir parçasıdır ve mikroorganizmalar (Leuschner ve Hansel 2004) membranlar yok. En litik peptidler, onlar daha yüksek ökaryotlar (Javadpour ve ark 1996), elektriksel olarak nötr kolesterol içeren hücre zarlarının etkilemez çünkü daha yüksek ökaryotlar zarar vermek olası değildir. Parçalayıcı peptid eylem ek bir ligand tarafından belirli bir hücre tipleri için hedef olabilir. Örneğin, Hansel ve ark (2007), tek başına veya non-spesifik peptitler ile konjuge litik peptidler etkili olurken, kanser hücre zarı reseptörü ligandlar ile konjuge litik peptidler, meme kanseri hücrelerini yok etmek için kullanılan olabilir olduğunu bildirdi. Parçalayıcı peptidler de, prostat ve testis kanseri hücreleri (Leuschner ve Hansel 2004) hedeflenen yıkımı için tümör hücrelerinin reseptörlerine bağlanır hormonları konjuge edilmiştir.

Bu yazıda, bağırsak Formosan yeraltı termit protozoa yüzey membran bağlanır heptapeptide ligand birleştiğinde bir litik peptid (Hekate) protozoacidal faaliyet göstermek için kullanılan teknikler mevcut. Bu teknikler ekstirpasyonu termit işçilerden gut, gut anaerobik kültür (Pseudotrichonympha grassii, Holomastigotoides hartmanni, protozoa
Spirotrichonympha leidyi), mikroskobik onay ligand floresan boya ile işaretlenmiş, tek hücreli canlılar ve değil, bakteri ya da bağırsak dokusu protozoa serbest yaşayan diğer termit gut bağlanır. Ayrıca parçalayıcı bir peptide aynı ligand verimli,, in vitro (protozoa kültürü) ve in vivo (işçi hindgut içine mikroenjeksiyon) protozoa termit gut öldürür, ama yalnız litik peptid daha az bacteriacidal olduğunu göstermektedir . , En az iki hafta içinde termitler ölümü protozoa yol açar kaybı.

Gelecekte, termit gut protozoa öldürmek ve daha sonra koloninin termitler öldürecekti ligand litik peptidler ifade etmek için "Truva Atları" gibi bir termit kolonisi ile termit hindgut ve yayılması hayatta mikroorganizmaların genetik mühendisi olacak . Ligand-litik peptidler protozoa parazitlere karşı ilaç geliştirme için de yararlı olabilir.

Protokol

Deney 1: termit gut çıkarımı anaerobik koşullar altında protozoa

1. Nem ve oksijen seviyelerini sürekli olarak kontrol ve ısı eşitsizliği ortadan kaldırmak için bir kurutucu ve D tipi katalizör Stak Paks ile hava dolaşımı için bir torpido gözü bir fan kutusu (Coy Laboratories) kullanın. 20 ila 30 dakika azot sürekli bir akış ile torpido gözü doldurun. 1 saat için bir oksijen sensörü (C-squared, Inc.) Oksijen düzeyleri Monitör Azot gerektiğinde anaerobik şartlara ulaşmak ve korumak için kullanın.
2. Träger U ortam hazırlayın (Träger 1934) ve pH 7.0 'ye ayarlamak. % 2.5,% 5 hidrojen, karbon dioksit ve oksijen kalıntılardan temizlemek için 1 saat süre....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

(Hansel ve Leuschner 2004, Hansel ve ark 2007) kanser hücrelerinin etkin bir şekilde hedef ve yok etmek için ligand-litik peptidler başarıyla kullanılmaktadır. Bu kavram üzerine kuruludur, biz yüzeyine bağlanan heptapeptide ligand geliştirdi Formosan yeraltı termitler bağırsak protozoa ve bu, termit ulaşmak için, termitler, bağırsak bu zorunlu selüloz sindiren symbionts yok etmek amacı ile bir litik peptide birleştiğinde kontrol (Husseneder ve Collier 2009).

Bi.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sigmacote	Sigma-Aldrich	SL-2
EDANS	Novabiochem, EMD Millipore
Anaerobic glove box	Coy Laboratories, Inc.	Custom made
Intellus environmental controller	Percival Scientific, Inc.	I36NL
PC-10 Glass micropipette puller	Narishige International	PC-10
Glass needles (Model GD-1, 1 X 900 mm)	Narishige International	GD-1
Leitz micromanipulators	Vermont Optechs, Inc.	ACS01
Microinjector	Tritech Research, Inc.	MINJ-1
Microcaps	Drummond Scientific	1-000-0005
LEICA fluorescence imaging system	Leica Microsystems	DMRxA2
LEICA dissecting scope	Leica Microsystems	MZ16
LEICA microscope	Leica Microsystems	DMLB
Olympus dissecting scope	Olympus Corporation	SZ61