İndüksiyon ve Kronik Relaps Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis Klinik Puanlama

Özet

DA sıçanlarda kronik relapsing deneysel otoimmün ensefalomyelit: Bu video, multipl skleroz bir hayvan modeli indüksiyonu ve klinik skorlama göstermektedir. Tüm sıçan omurilik ve tam Freund adjuvan içeren bir emülsiyon immunizing fareler tarafından uyarılan hastalık, insan hastalığına benzer klinik belirtiler sunar.

Özet

Multipl skleroz (MS), genç erişkinlerde sık etkileyen santral sinir sistemi (MSS) kronik inflamatuvar bir hastalıktır. Bu, beyin ve omurilikte yaygın alanlarda demiyelinizasyon ve glial korkutuyorsun tarafından karakterize edilir. Bu lezyonlar, sinir iletim değiştirebilir ve CNS (örneğin paraparezi, felç, körlük, inkontinans) demyelinated plakların yerini değişir devre dışı bırakma nörolojik defisit neden.

Deneysel otoimmun ensefalomiyelit (EAE), MS için bir model. EAE ilk tavşan omurilik yetişen virüsler kullanarak, insanlarda kuduz aşılama sırasında yanlışlıkla indüklenen oldu. Inaktive virüs omurilik enjekte edilen artıklar, merkezi sinir sistemi hastalığı kaynaklı. Bu gözlemlerin ardından, EAE ilk modeli nehirleri Homojenat ve 1935 yılında Schwenther MSS ile aşılanan insan olmayan primatlar olarak tarif edilmişti. EAE bu yana türlerin çeşitli oluşturulan ve türlerin / zorlanma ve antijen kullanılan immunizing bağlı olarak farklı ders takip edebilirsiniz. Aynı antijen kobay kronik bir hastalıktır neden olur Örneğin, adjuvan ile emülsiyon miyelin temel protein Lewis sıçanlarda immunizing, EAE akut modeli neden olur.

Burada açıklanan EAE modeli tam Freund adjuvan emülsiyon DA DA sıçan omurilik karşı sıçan immunizing tarafından indüklenir. Sıçanlar-bağışıklama sonrası 7-14 gün içinde artan bir flask paralizi gelişir. Klinik belirtiler birkaç hafta içinde bir relapsing-remitting seyir takip etmektedir. Patoloji, CNS ve demiyelinizasyon plaklar büyük immün infiltratlar gösterir. Videonun sonunda EAE ile hayvanların bakımı için özel dikkat edilmesi gereken noktalar açıklanmıştır.

Protokol

Kronik-relapsing EAE indüksiyonu ve izleme

Emülsiyon takviye tam Freund adjuvan eklendi sulu çözelti antijeni 1:1 karışımıdır. Bu antijen adjuvan ve başka bir yol boyunca eklemek için çok önemlidir!

Yapma ve bir emülsiyon enjekte atık bir sürü. 1.5 veya 2 kez her zaman için ihtiyaç duyduğunuz herşeyi daha fazla hazırlamak.

Otoklavlanmış harç, havaneli, cam şırınga, ve köprüler kullanın. Tüm plastik steril olmalıdır. Düzenli bir laboratuvar tezgahı üzerinde hazırlık yapılabilir.

1. Takviye adjuvan hazırlanması

Mycobacterium tuberculosis (Difco katalog # 231.141) ve bir havan topu yerleştirmek 30 mg tartılır. Bakteri kırılma önlemek için çok sert basmadan ince toz haline olun. Freund adjuvan H37Ra (Difco katalog # 231.131) ve karışımı tam 10 ml ekleyin. Bu takviye adjuvan 4 mg / ml, Mycobacterium tuberculosis içerir. Tüpüne aktarın.

2. Spinal kord Homojenat hazırlanması

-80 Dondurulmuş DA sıçan (yaş / cinsiyet kayıtsız) ve mağaza ° C omurilik toplayın Takviye adjuvan: 1:1 (hacim ağırlığı) karıştırmak için yeterli donmuş omurilik tartılır. Bir jilet ile mümkün olduğunca ince olarak omurilik Kıyma, 1. kısımda kullanılan harç transferi ve havaneli bir hamur yapın.

3. Emülsiyon hazırlanması

1. Place bir tüp Freund adjuvan tam desteklenmiştir. Yüksek hızda karıştırın. Vorteks ise omurilik Homojenat damla damla ekleyin. omurilik Homojenat tüm eklenir, 5 dakika daha karıştırın. Bu karışım hafif pembe açmalısınız.
   
   
2. 5 ml cam şırınga içinde koyun ve emülsiyon (Fisher katalog # 14-825-17L) 18G köprü kullanarak başka bir 5 ml cam şırınga bağlamak. (5-10 dk) sabit hale gelinceye kadar, diğer bir şırınga emülsiyon gönder. Emülsiyon 5 ml 'den fazla hazır ise, birkaç 5 ml şırınga büyük şırınga KULLANMAYIN kullanın.
   
   
3. Emülsiyon şırınga 4 ° C'de 3 hafta süreyle saklanabilir. Ben onu yıkmak değildir kontrol etmek için en az 12 saat önceden hazırlanması tavsiye ederiz. Bu kalın ve 2 faz ayrı kalmalıdır. Rengi sarı veya bej bir ışık gecede değişecektir.

4. Sıçan, Bağışıklama

1. Birkaç dakika için şırınga emülsiyon karıştırın ve enjeksiyon için kullanılan şırınga transfer. 200 ul, çok kısa süreli anestezi altında 23G iğne ve 3 ml Luer-Lock şırınga kullanarak kuyruk dibinde subkutan enjekte edilir.
   
   
2. Alıcılar 7-9 hafta eski kadın DA sıçan. Harlan Sprague Dawley sıçan olsun.
   
   
3. Sıçanlar günde iki kez gözlenen ve günlük olarak değerlendirilmelidir. Klinik bulgular emülsiyon enjeksiyondan sonra 7-15 gün bekleniyor.
   

Klinik skorlama:

0: Herhangi bir hastalık

0.5: distal gevşek kuyruk

1: gevşek kuyruk

2: orta şiddette paraparezi, ataksi

3: orta derecede paraparezi, zaman zaman sıçanlarda gezileri

3.5: bir arka bacak felç, diğer hamle

4: tam arka ekstremite paralizisi

5: komple arka bacak felci ve inkontinans

6: can çekişen, nefes alma zorluğu, yemek veya içmek değildir. Hemen Euthanize.

Tartışmalar

Bu protokol için birkaç önemli hususlar vardır.

DA sıçanlarda Genetiği satın hangi damızlık bağlı olarak biraz farklı olacaktır. Bu farklılıklar, indüksiyon EAE sıçan yatkınlık artabilir veya azalabilir. Sıçanlarda EAE daha duyarlı iseniz olmayan takviye tam Freund adjuvan hatta eksik Freund adjuvan kullanarak bağışıklama gücü azaltmak istiyorsanız. Ayrıca emülsiyon hazırlarken önce enjekte emülsiyon miktarını azaltarak ya da, tuzlu su ile omurilik Homojenat seyreltilmesi düşünebilirsiniz. S?...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Complete Freund’s Adjuvant	Reagent	Fisher Scientific	DF 311-360-5	Manufactured by Difco
Mycobacterium tuberculosis H37Ra	Reagent	Fisher Scientific	DF3114-33-8	Manufactured by Difco
DA rat	Animal	Harlan Laboratories		Females, 7-9 weeks old.
Glass syringes - 5 ml	Tool	Fisher Scientific	14-823-10 B
Metal bridge - 18G	Tool	Fisher Scientific	14-825-17L
Luer Lok plastic syringes - 3 ml	Tool	BD Biosciences	309585
Needles - 20G 1 1/2	Tool	Fisher Scientific	14-826-5C