Değerlendirilmesi Fare, Nest İnşaat ve İstifçiliğine Sığıntı

Özet

Sığıntı, yerleştirme ve istifleme farelerin kolayca laboratuvar ortamında gerçekleştirmek, türün tipik faaliyetler. Bu makale, kolayca ve ucuza nasıl değerlendirilmelidir açıklamaktadır. Bu protokoller fare suşu, beyin lezyonları ve hastalıklara karşı son derece duyarlıdır. Dahası, fareler için "çevre zenginleştirme" oluşturur ve "3 Rs" 18 "Sadeleştirme" yönü somutlaştırmak.

Özet

"Günlük yaşam aktiviteleri (ADL) gerçekleştirmek için yeteneğinde bozulma (AD), Alzheimer hastalığının erken bir işareti. AD için olası tedaviler Preklinik davranışsal tarama şu anda büyük ölçüde bilişsel test, sık sık pahalı ekipman ve deneyci zaman çok talep üzerinde duruluyor. Ancak, insan epizodik bellek (MS bellek en ağır etkilenen yönü), büyük ölçüde olmayan epizodik görünüyor kemirgen bellek, farklı. Bu nedenle, kemirgenler AD için yeni MS tedavisi için tarama mevcut yolları, başarılı olmak özünde olası değildir. Farelerin ADL karakterize klinik öncesi tarama için yeni bir yaklaşım olacaktır. Tesadüfen, birkaç tür testlerin son Oxford'da geliştirildi, ve burada üç en hassas ve en iyi karakterize sunulmaktadır.

Sığıntı, ilk ^olarak Oxford 13 geliştirilmiştir. Bu bir fare istifleme paradigma geliştirmek için ihtiyaç gelişti. En yayınlamaked kemirgen istifleme paradigmalar, uzak bir besin kaynağı evde kafes bağlayan geçit ile bağlantılı olduğu gereklidir. Bu evde kafes değiştirerek yanı sıra bir fare geçirmez bağlayan geçit ve besin kaynağı içerecektir. Yani o kafesin içindeki besin kaynağı koymak mümkün olup olmayacağını kabul edildi. Bir kap zemine yerleştirilmiş olsaydı ertesi sabah tarafından boşaltılmış olduğunu tespit edildi, gıda pelet, ancak, sadece bir yığın konteyner girişinde biriken ziyade, konteyner uzak ayrı bir yere yerleştirilir. farelerin istifleme onları gerçekten olsaydı, tahmin edilebileceği gibi. Dikkat edilirse, seçilen bir yere ağızlarına pelet taşıyan fareler, ("burrowing") hareketleri kazma performanslı olduğunu gösterdi olduğu gibi eğer gerçekten ^istifleme. 6

Gıda pelet burrowing için önemli bir substrat değildir; fareler boş tüpleri, kum, çakıl, hatta kendi kafesi kirli yataklar dolu. Daha fazlaüzerinde, boş bir kimse bu ⁸ yanına bile tam bir tüp boş.

Literatürde çok sayıda yuvalama protokolleri mevcuttur. Mevcut Oxford prosedürü kolaylaştırır ve yuva kalite ⁵ için iyi tanımlanmış bir puanlama sistemi vardır.

Istifleme paradigma, daha sonra farelerin yerine, gerçek bir ev kafesine geri istifleme, istifleme aparatı "ana üs" yaşamaya adapte edildiği geliştirilmiştir. Bu ana üs, tel örgü, içerdiği besin kaynağı olan distal ucu yapılmış bir tüp bağlanmıştır. Bu düzenleme, iyi bir istifleme davranışı, gün boyunca farelerin "ana üs" yaşam için uyarlanmış ve sadece geceleri istifleme tüp girmek için izin gibi uzun verim olduğunu kanıtladı.

Protokol

1. Sığıntı

1. Cihaz

Çeşitli konteyner tasarımları yargılandı (örneğin kolaylıkla temizlenebilir bir metal sürahi, ancak fare girmek için istekli değildi). Sonunda plastik downpipe uzunluğu (evleri oluklar bağlı) gıda pelet yanlışlıkla deplasman (kasti) önlemek için bir ucunu hafifçe yükselmiş olduğunu keşfetti ve diğer ucunda imzalandı cihazlarının verimli bir parçası oldu. Burrows artık plastik downpipe, 68 mm çap, 20 cm uzun (Şekil 1) oyulmuş yapılır. Bir ucu 12 mm ve orta yoğunlukta lif levha (MDF), bir fiş ile kapatılır. (Mdf ile çalışırken Solunum koruması tavsiye edilir). , Amaç ve su yalıtımı temizlik için su geçirmez bir yapıştırıcı mastik bileşik burrowing tüp içine tutkal bu hizmet olarak mdf, iç ve dış yüzeylerde de uygulanabilir. Makine vidaları (5 cm uzunluğunda) diğer ucunu o yükseltmek için kullanılır.f yerden tüp 3 cm. Takılı 90 ° ve vidaları bir açıyla burrowing tüpün açık ucundan 1 cm iki delik delinir ve ⁴ sıkılır.

Burrows çapı muhtemelen kritik öneme sahiptir; Schmid-Holmes ve ark ¹⁹ yabani farelerin özellikle boyutu yapay olanlara benzer Burrows "burrow temizlenir" olduğu görülmektedir.

Şekil 1 bir burrowing tüp içinde bir fare.

2. Prosedür

1. Alışma
   Sığıntı normal spontan, ancak belirli bir öğrenme öğesi vardır. Öğrenme sürecinin sosyal kolaylaştırma tarafından geliştirilmiştir. Bu nedenle bir tedavi ile test daha sonra farelerin grup ev kafes içine bir gecede tam burrow yerleştirin. Her burrow 200 gr normal diyet olarak verilen gıda pelet ile doludur. (Bu tdiyet yoğun sıkıştırılmış tipi; bir "genişletilmiş" diyet burrow kullanmak ise) daha az 200g yapacak. Burrowing substrat seçerken deneyciler dikkate gibi faktörleri dikkate almalıdır.
   
   Farelerin yiyecek karnesi (örneğin, eşzamanlı bir labirent öğrenme görevi çalıştırmak için onları motive etmek) ise gıda-dışı maddeler kapalı bitki saksılar toprağın yüzey hattı için kullanılır, örneğin, kil toplar, kullanılan olabilir; bezelye shingle (küçük taşlar ~ 1 cm çapında) ve kum. Farelerin bir "tavan etkisi" önlemek için, çok şiddetle burrowing eğer gıda pelet göre üç kat daha ağır Bezelye çakıl ve kum, gıda pelet için yararlı yerine.
2. Baselining
   Run (tercihen iki) önerilen tedaviden sonra test etmek için yapılacaktır aynı şekilde ayrı testler 48 saat burrowing taban çizgisi. 0700-1900 saat karanlık ışık döngüsü farelerin yerleştirilmiştir test optimal 16:00 civarında başladı. Bu hassas bir zaman.şu anda normal uyanık ve burrowing daha yavaş ve dolayısıyla karanlık aşamasına iyi olsaydı daha çok aktif başlar, test etmek için. Başladıktan sonra iki saat, bir "anlık" ölçme sızdılar gıda kilo alınır; burrow tared bir kap içine boşaltılır ve tartılır ve pelet kafes içine geri koymak burrow değiştirilmelidir. Burrow fare ise, sadece tartım kabı içine yavaşça ve içeriğini dökün ve fare kafes değiştirin. Sonra iki saat sızdılar ağırlık orijinal 200 g. çıkarma tarafından hesaplanır. Ertesi sabah son okuma alınır. Zamanlama farelerin uyku geri dönmüş olacaktır (genellikle burrow) ve artık aktif burrowing gibi önemli değildir. Ikinci deneme başlangıç ​​performans için dengeli bir grup oluşturmak için alınan 2 saat ölçüm kullanın. Uygulama ¹⁷ ile artar burrowing olarak, baselining farelerin daha istikrarlı asymp ulaşmak için yardımcı olurtedavi etkilerinin daha iyi ortaya koymaktadır totic performans.
3. Test
   Test edilmesi için, uygulanan tedavilerden sonra farelerin burrowing test baselining aşamada tam olarak aynı verilmiştir. Burrowing testi kronik kullanılmak üzere ise, en az 48 saat ayrı testler prosedürü aşırı maruz kalma nedeniyle performansında bir düşüş önlemek için tavsiye edilir.
4. Not
   Burrow içine kafes katta sızdılar gıda yerine yapmayın. Fare şey sızdılar olsa bile burrowing meydana gelmiş olsaydı, tartım işlemi gerçekleştirmek; ağırlığında neden rahatsızlık davranışları teşvik etmek ve zaten bazı yüzey sızdılar farelerde, sonra sık sık yenilenen gayretle burrowing başlayacak eğilimindedir süreci ağırlığında.

2. Beklenen sonuçlar

C57 ~ BL / 6 fareler burrow, genellikle ilk iki saat içinde yaklaşık 70 gr ve 200 gr yakıngeceleme. Hipokampal Lezyonlu fareler genellikle burrow az 5 gr ¹¹ (Şekil 2). Prion hastalığı ^1,2 burrowing inhibe lipopolisakkarid yönetiminin ^20. Klinik belirtileri ise sadece 22 hafta ¹³ Sığıntı, hastalıklı beyin Homojenat enjeksiyondan sonra 10-12 hafta prion (scrapie) hastalığı saptayabilir. (Şekil 3). Sığıntı farklılıkları potasyum iyon kanalı alt birimden ^{10 15} ve knock-out suşu duyarlı olduğu gösterilmiştir.

Şekil 2, gıda kontrolü ve hipokampal Lezyonlu fareler tarafından iki saat içinde sızdılar pelet (medyan ve interquartil aralıkları) ağırlığı . Sonuncusu (p = 0.0001) kontrollere göre anlamlı derecede daha az sızdılar.

Şekil 3. Ağırlıkgıda kontrolü ve scrapie ile enfekte farelerde gecede sızdılar pelet (anlamına gelir). Haftanın 7 ila 10 enjeksiyon sonrası her iki grupta da (uygulama) artar Sığıntı, ancak hafta 12 burrowing scrapie grubundaki düşüşler ve gruplar arasındaki fark istatistiksel olarak anlamlı hale gelir (ortalamanın iki standart hataları aşan).

3. Tartışma

Sıçan, Gerbils, hamster ve Mısır dikenli fareler ⁸ - Biz kemirgenler diğer türler burrowing test ettik. Tüm ama ikincisi, çakıl veya kum gibi karasal yüzeyler burrow önemli miktarda uyarılan, ancak gıda pelet burrowing olabilir karasal malzemeler ile geniş bir deneyime sonra bile, daha az oldu. Farelerden elde edilen bu farkın nedeni bilinmemektedir. Bu çalışmanın yapıldığını sonra, aslında Mısır dikenli bir farelerin vahşi Burrows yapamaz olduğunu keşfetti; Burrows doğal ha yüzey Gerbils tarafından yapılan işgalbitat genellikle hard rock. Nairobi son gözlem cinsi Acomys içinde, vahşi yuva Wilson dikenli bir fare (Acomys wilsoni) ve Percival dikenli bir fare (Acomys percivali), laboratuvarda da sızdılar, gösterdi.

4. Yuvalama

1. Cihaz

Bu test bireysel kafeslerde yapılır; burrowing için kullanıldığı gibi aynı olanlar uygundur. Normal yataklar 0.5 cm derinlikte zemin kapsamalıdır. (Varyasyon, derinlemesine ve çok derin yataklar, yuva inşaatı etkileyebilecek). Her kafes "Nestlet", preslenmiş pamuk vuruş (Ancare) 5 cm kare ile verilir.

2. Prosedür

Fareler karanlık evre önce yaklaşık bir saat yuvalama kafesler içine tek tek yerleştirilir ve ertesi sabah değerlendirilir. Burrowing ile ve benzeri nedenlerle, zamanlama kritik değildir.

3.Puanlama

Yuvaları 5 puanlık bir ölçek (Şekil 4-8) değerlendirilir ve untorn Nestlet miktarı da ⁵ tartılır.

1. Nestlet (>% 90 sağlam) büyük ölçüde el değmemiş.
2. Nestlet kısmen (% 50-90 bozulmadan kalan) yırttılar.
3. Nestlet çoğunlukla parçalanmış ama genellikle hiçbir tanımlanabilir yuva sitesi var:
4. Tanımlanabilir, ama düz bir yuva:>% 90 Nestlet yırtılmış, malzemenin kafes taban alanı dörtte içinde bir yuva içine toplanmış, ancak yuva ile, düz fare gövde yüksekliği daha yüksek duvarlar (yukarı kıvrılmış çevresi% 50 daha az yan).
5. (Yakın) mükemmel bir nest: Nestlet% 90 paramparça>, çevresi% 50 daha fazla fare vücut yüksekliğinden daha yüksek duvarları ile iç içe, bir krater.

Nerede kriterler fark bölmek aynı fikirde değilim. Örneğin unshredded 0.7g bir parça ile mükemmel bir yuva 4.5 puan olacak.

Şekil 4. Nest 1 puan

Şekil 5.. Nest skoru 2

Şekil 6.. Nest skoru 3

Şekil 7 Nest puan 4

Şekil 8 Nest puanlıE 5

4. Beklenen sonuçlar

Onların amacı termoregülasyon yanı sıra üreme ile ilişkili olarak kadın ve erkeklerde, yuva yapmak. C57BL / 6 fareler için, biz tek bir deneyde kontrollü bir karşılaştırma yapmadı olmasına rağmen erkekler ve kadınlar için yuva puanları, aynı aralıkta. En C57BL / 6 fareler yuva inşaat 4-5 puan, ancak hipokampus Lezyonlu olduğunda ortanca skoru 1-2 civarında olacağını; 3 puan olası değildir (Şekil 9) aşılmamalıdır. Yuvalama ayrıca yaklaşık 10-12 hafta ^1,2,16 prion hastalığı duyarlı olduğunu ^kanıtladı.

Şekil 9 kontrol fareler ve dorsal, ventral ve tam hipokampus lezyonu olan fareler Nest puanları (medyan ve interquartil aralıkları). Sadece tam Lezyonlu farelerin iç içe inhibisyonu, bu nedenle selektif dorsal ve ventr etkilerial bölgelerin alt eşik ama katkı görünür.

5. Istifleme

1. Cihaz

"Bir dizi" ev üsleri, tel örgü yapılmış tüplere bağlı, gıda pelet yerleştirilen distal ucunda ve geçici olarak ahşap bir fişi proksimal sonunda kalıcı kapatılmış. Bu ana üs uyum occurred7 önce tüpler giren fareler önlemek için kullanılır.

(Şekil 10) Cihaz temel ilkelerine uyulduğu sürece, çeşitli yollarla yapılabilir. Bizimki 8 ahşap kutular bir satır oluşuyor, her biri 30 x 13 x 15 cm şeffaf pleksiglas kapaklı. Her bir su şişesi ile birlikte, istifleme tüp push-donatılmış içine arkasında bir delik vardır. Tüpler, 10 cm uzunluğunda siyah plastik, 40 mm çapında, 50 cm, toplam uzunluğu oluşturmak için, 45 cm uzunluğunda bir tel örgü tüp, 4 cm çapında katıldı. Örgü, 13 mm kareler oluşur.ve küçük kafes delikleri ve gıda pelet yoluyla bırakarak önlemek için yanlış sıralanmış kafes ile bir çift rulo. 6 mm kare örgü varsa bu bir rulo yeterli olacağı gibi daha iyi bir malzemedir. Gıda pelet yerleştirilen tüp, distal ucu kapatılmış. Proksimal ucu çıkarılabilir bir ahşap fişi ile mühürlenir.

Istifleme tüpler Şekil 10 Fare.

2. Prosedür

1. Tipik olarak, ilk kez istifleme çok değişken ve bazı farelerin tüm istif olmayabilir. İstifçiliğine burrowing gibi, uygulama ile geliştirir. Bu nedenle bir tedavi uygulanmadan önce, deneysel tasarım sağlar, baselining oturumları en iyi şekilde verilmektedir. Açıkçası, bu bağımsız değişken doğuştan ise, farklı fare suşlarının test ederken (non-koşullu) mutant fare ile veya pratik değildir.
2. Bir fare koymakher kutuda günün erken alışmakta. Kutusu "ev" gibi hissettirmek için de en az bir gece için gerçek grup evde kafes içinde bir karton tünel, kirli yataklar cömert bir kısmı, ile sağlanır. Ahşap bir bung akşama kadar istifleme tüp erişim engellenmiş olur. 100 g gıda pellet (küçük ve büyük bir karışımı) (tüp dik tutularak diğer ucunda geliþtirilen) distal ucunda istifleme tüp yerleştirilir. Fare test başlamadan önce hafif aç olduğundan emin olmak için, ev kutusu gıda ile sağlanmaz.
3. Tıpkı karanlık aşaması başlamadan önce, istifleme tüp fare erişimine izin vermek ahşap bung kaldırmak. Ertesi sabah (tekrar, zamanlama çok önemli değildir) toplamak ve ana üs kutuya stoklandı olan tüm gıda pelet tartmak.

6. Beklenen sonuçlar

Kadın C57BL / 6 farelerin kullanarak, stoklandı medyan miktarı etrafında olurdu50-70 g. Prefrontal korteks lezyonları sadece zayıf bir etkisi ¹² (Şekil 11) ise hipokampal lezyonlar kuvvetle bastırmak, hoarding11.

Şekil 11 gıda pelet Kilo kontrolü ve medial prefrontal korteks Lezyonlu fareler (medyan ve interquartil aralıkları) stoklandı. Medyan oldukça farklı olmasına rağmen, kontrol grubunda yüksek değişkenliği sonuç (P = 0.3) istatistiksel olarak anlamlı olmaktan uzaktır anlamına gelir.

Tartışmalar

Bu testleri çalıştırmak için son derece basit ama etkisi boyutları çok büyük, Russel ve Burch 3 Rs ^"18" Sadeleştirme "yönü uygun tedaviler, gerilme farklılıkları, vb onları son derece duyarlı hale. Gerçekten de, burrowing gibi testlerde iyi performans hayvanların genel sağlık durumu iyi göstergesi gibi görünüyor. Bu nedenle bu hayvan refahı değerlendirilmesi için iyi bir test olabilir.

Laboratuvar kemirgenler için çevre zenginleştirme önemi bu gün kabul edilmektedir. Yuvalama malzeme temini, çok sayıda hayvan barınağı artık standart bir uygulama olduğunu ve bunu yapmak kolaydır. Coşku ile fareler burrow bir potansiyel mükemmel zenginleştirme, ama ne yazık ki bu henüz geliştirilmiş değil sağlayan pratik bir yolu olacaktır "self-yeniden yükleme" burrow burrowing yapar. Fareler bulmak ister istifleme zenginleştirici henüz tespit edilmiştir değil.

_content "> Bir dezavantajı bu testler tarafından oluşturulan veriler genellikle non-parametrik (Gauss dağılım) olduğunu, bu nedenle uygun non-parametrik istatistikler, örneğin ikili karşılaştırmalar Mann-Whitney U testi, bunları analiz için gerekli olan Kruskal- çok grup veri Wallis ANOVA tekrarlayan ölçümler tasarımları, non-parametrik veriler için hiç uygun ANOVA testi olmadığından kullanılması durumunda, sonuçları örneğin karekök veya günlük prosedürleri onlara daha normal bir dağılım uygun yapmak için, dönüştürülecek. .

Cihazların ölçümleri biraz metin belirtilenlerden farklı (ABD deneyciler için yararlı), ancak geniş farklar kaçınılmalıdır. Ancak, bazı durumlarda diğer deneyciler, burada açıklanan dışında farklı yapılar daha iyi çalışmasını bulabilirsiniz.

Tüm davranışsal ölçümleri için gibi, farelerin aktivite düzeyleri normal olup olmadığını, hareketsizlik gibi açıkça bir detrim olacak görmek için test edilmelidirental türlerin tipik davranışları üzerindeki etkisi. Scrapie ile enfekte farelerde engelli burrowing ve yuvalama gösteren, aktivite düzeyleri (açık alan aparatı test) normal idi. Gerçekten de, hiperaktivite bir dönem bu türün tipik davranışlar ilk ² engelli yaklaşık 2-4 hafta sonra ortaya çıkar.

Burrowing hipokampal lezyonları tarafından üretilen güçlü bir bozulma, yerleştirme ve istifleme, tüm bu türün tipik davranışlar, bu lezyonların gibi köklü etkileri uzamsal öğrenme ve memory9 bozuklukları tamamlar. Bu karakteristik MS ¹⁴ günlük yaşam faaliyetlerine bozuklukları eşdeğer gibi görünüyor.

Bu türlerin tipik testleri de preklinik tarama, Alzheimer ve diğer nörodejeneratif ^hastalıklar 14 tedaviler için büyük bir kullanım olarak karşımıza çıkabilir . Birçok insan beyin bozuklukları kaybı veya azaltılmış yeteneği normal arifesinde gerçekleştirmekryday görevleri kognitif bozukluk gibi hastalığın diğer özellikleri kadar önemlidir. Özellikle, bu kayıp, bakıcılar ve bu yüzden sık sık empoze büyük sosyo-ekonomik yük katılımı gerekebilir.