Farelerde Sistemik ve Karaciğer Hemodinamik Parametrelerin İzleme

Özet

Bu film farelerde sistemik ve hepatik hemodinamik kazanmak için nasıl gösterir. Tüm izleme hayati parametrelerin, sistemik kan basıncı, santral venöz basınç, ortak hepatik arter akım hızı ve portal ven basıncı yanı sıra farelerde portal akış hızı edinimini içerir.

Özet

Deneysel araştırma fare modellerinin kullanımı hepatik fizyolojisi ve patofizyolojik rahatsızlıkların çalışma için çok büyük önem taşıyor. Ancak nedeniyle fare, küçük boyutu, fare için uygun intraoperatif izleme prosedürünün teknik detayları nadiren tarif edildi. Daha önce biz fareler için hemodinamik parametrelerini elde etmek için bir izleme prosedürü bildirdi. Şimdi, farelerde sistemik ve hepatik hemodinamik parametrelerini elde etmek için prosedür, sıçanlar daha küçük on kat bir tür adapte. Bu film, hayvanların aletleri hem de farelerde karaciğer ve sistemik hemodinamikler değerlendirmek için gerekli olan veri toplama işlemini göstermektedir. Vücut ısısı, solunum hızı ve kalp hızı dahil yaşamsal parametreleri, işlem boyunca kaydedildi. Sistemik hemodinamik karotis arter basıncı (CAP) ve santral venöz basınç (CVP) oluşmaktadır. Karaciğer perfüzyon parametreleri portalı v dahilEin basıncı (PVP), köprülü akış hızı hem de ortak hepatik arter (Tablo 1) akış hızı. Enstrümantasyon ve veri toplama normal değerler 1.5 saat içinde tamamlandı kaydetmek için. Sistemik ve hepatik hemodinamik parametreler bu işlem sırasında normal sınırlar içinde kalmıştır.

Bu prosedür zor ama mümkündür. Biz zaten deneyler sıkma normal farelerde olduğu gibi% 70 hepatektomiden sırasında ve karaciğer lobunda hepatik hemodinamikleri değerlendirmek için bu prosedürü uyguladık. Rezeksiyon (n = 20), rezeksiyon (6.87 ± 2.39 _cmH2O) daha önce anlamlı derecede yüksek olduğu _cmH2O (p <0.05) 11.41 ± 2.94 idi sonra PVP idi. Denemeyi sıkma lob sonuçları bu izleme prosedürü portal basınçta ve portal akış hızında küçük değişiklikler tespit etmek için hassas ve uygun olduğunu belirtti. Sonuç olarak, bu yordamı tecrübeli bir mikro-cerrahın elinde güvenilir ama exp sınırlı olmalıdıreriments farenin kesinlikle nerede ihtiyaç vardır.

Giriş

Bu videonun genel amacı, sistemik ve hepatik hemodinamik parametrelerini elde etmek için gerçek-zamanlı izleme prosedürü göstermekti. Bu prosedürü geliştirmek için gerekçe sistemik ve hepatik hemodinamik parametrelerin elde edilmesi gerektiren farelerde deneysel müdahaleler için büyük bir değerdir. Prosedür böyle hepatektomiden, portal ven ligasyonu ve karaciğer nakli gibi, naif hayvanlara ve sırasında veya belirli bir hepatobiliyer deneysel cerrahi müdahale sonrasında uygulanabilir.

Kemirgenlerde karaciğer hemodinamik verilerin elde edilmesi önerilen invaziv prosedür gerektirir. Karaciğer perfüzyon non-invaziv elde edilemez. Ancak, sistemik kan basıncı edinimi için alternatifler vardır. Böyle kuyruk manşet tekniği ⁸ olarak izleme teknikleri sıçan ve farelerde hem de kan basıncını elde etmek için kullanılmıştır. Kuyruk manşet tekniği consci uygulanabilirlı hayvanlar. Kan basıncını ölçerken, hayvan belirli bir rahatsız bir pozisyonda yerleştirilir ve düzeltilmesi gerekiyor. Kuyruk manşet cihaz kılavuzda, üretici farenin sinir olur ve kuyruk dolaşımını azaltabilir hangi vurguladı belirtmektedir. Bu koşullar altında, kuyruk elde edilen periferik kan basıncı merkezi kan basıncından daha düşük olabilir.

Tam izleme prosedürü veri toplama için sensörler bir dizi kullanarak bir tümleşik çoklu-kanal monitör ile gerçekleştirildi. Kan basıncı, mikroskop altında dikkatli bir mikrocerrahi diseksiyon ve maruz kaldıktan sonra söz konusu kabı içine bir kateter sokulması ile elde edilmiştir. Akış hızı, her bir kabın etrafına transonik akış prob yerleştirilmesi ile ölçülmüştür.

Biz zaten SINGL karşılaştırılabilir fizyolojik hemodinamik verileri kapsamlı bir dizi sonuçlanan sıçanlar için benzer intraoperatif izleme prosedürü bildirdiDiğer grup ⁷ rapor E verileri. Bu nedenle fare, sıçan daha küçük 10-kat bir türe adapte için iyi bir temel temsil etmek için bu prosedürü kabul. Sıçan prosedüre en önemli fark, kan basıncı verileri yerine sıvı tabanlı kateter sistemi elde etmek için Millar kateter kullanılmasıdır. Akış veriler de transonik akış sondaları, gelen sıçan gemiler için daha sadece daha küçük olanlar ile elde edildi.

Nedeniyle hayvanın küçük boyutu, farelerin enstrümantasyon teknik açıdan zorlayıcı, ama mümkündür. Enstrümantasyon tamamlandıktan sonra önceden tanımlanmış bir ayar dosyası kullanılabilir beri, veri toplama ve birincil yaşam veri analizi, basittir. Ayar dosyası bir dizi deney başında bir kez tanımlanması ve bu depolanmış ve daha sonraki deneyler için kullanılabilir sahiptir.

Şimdiye kadar akut deneylerde karaciğer hemodinamik etkilerini değerlendirmek için bu prosedürü uygulanır. Biz CA ölçülenP ve PVP önce ve hemen% 70 parsiyel hepatektomi (PH) sonra ve / de-sıkma deneyler kıstırma. Biz karaciğer kütlesinin tamamen% 90'ını temsil eden kitle medyan kısa (5 dakika) sıkıştırma ve sol lateral lob ardından karaciğer% 20 temsil eden sağ lobunun Hepato-duodenum ligament kenetlenir. De-sıkma medyan ve sol lateral lobu boşaltarak ardından sağ lob kelepçeyi serbest başladı. Maksimum bağlama süresi 10 dakikanın altında idi.

Protokol

Konut ve yürütülen tüm işlemler Alman Hayvan Refahı Mevzuatına uygun vardı.

1. Sensörler Kalibrasyon (Sensörler Kalibrasyon için üreticinin talimatlarına uyun)

1.1) Millar kateter kalibrasyonu. 30 dakika önce dengelemek için (sıfırlar) ve kalibrasyon için steril su ya da tuzlu su içinde kateterin ucu ön-ıslatma.

1. Köprü amplifikatör millar1 kanalına millar sensörünü bağlayın ve su sütununa millar sensör ucu takın.
2. 0 _cmH2O O. su sütunu değerini ayarlayın Veri analiz yazılımı penceresinde, yükseltmek köprü seçin ve onu sıfır. Bazal değer 0 _cmH2O ayarlanabilir.
3. 20 _cmH2O O. su sütunu değerini ayarlayın Veri analiz yazılımı penceresi ilerlemeyi çalıştırın ve durdurun. Yükseltmek köprü penceresinde "birimleri" seçiniz, ₂ O buna göre 0 ve 20 CMH taban ayarlamak. 2 O.
4. Aynı şekilde CAP ölçülmesi için millar2 kalibre (iki taban hattı 90 ve 110 _cmH2O ayarlanır).

1.2) Kan akım probu kalibrasyonu

1. Iyonu giderilmiş su içine sonda yerleştirin. Transonik akış prob sistemi ile prob bağlayın.
2. Veri analiz yazılımı penceresinde, Giriş akış probu sıfıra yükseltmek seçin. Birimleri ayarlayın.
3. "Test kanalı" sinyal toplamak için düğmeye basın: sinyal 3-4 bar varsa, bu sinyalin iyi olduğu anlamına gelir. Iyi bir sinyal elde edilir durumda, prosedür devam edilebilir.
4. Değeri kalibre edilmiş veya edilmemiş olup olmadığını "sıfır kanal" ve ölçek görmek için kanalı için düğmeye basın.
5. Daha sonra ölçüm için "tedbir kanal" için düğmeye basın.

2. Cerrahi Prosedür için Fare hazırlayın

1. Indüksiyon odasında fare yerleştirin ve% 2 izofluran ile fare uyutmak ve0.3 ml / dakika oksijen. Fare ayak parmağı sıkıştırma çekme refleksi mevcut olmaması halinde işlemi gerçekleştirilebilir.
2. Sol boyun ve karın dahil cerrahi bölgelerde, kürk tıraş.
3. Ameliyat masasında fare yerleştirin ve kasetleri kullanarak sabitleyin. Işletme süresince kuruluğunu önlemek için gözlerin veteriner merhem kullanın.
4. Boyun operasyon alanının optimal pozlama için boyun altında bir gazlı bez yastık yerleştirin.
5. Operasyon alanı dezenfekte edin ve sadece açık cerrahi alanını terk fareyi kapsayacak şekilde sterilize Gauzes yerleştirin.

3. Vital Parametreler Ölçüm

1. Deri altından fare pençeleri içine EKG iğneler takın.
2. Fare arkasına altında solunum sensörü yerleştirin.
3. Fare rektum içine, sıcaklık probu yerleştirin.
4. Tutanak sıcaklığı, EKG ve veri analizi yazılımı fare solunum hızı.

S 4. Boyun Operasyonuystemic Kardiyovasküler İzleme

4.1) Gemi diseksiyonu

1. Boyun orta hattı, klavikula orta noktası, mandibulanın açısını tanımlayın.
2. Orta çizginin sol tarafına 0.5cm olan klavikula orta noktaya mandibula açısı bir 2cm boyuna kesi yapmak.
3. , Submandibular bez disseke ters çevirin ve tuzlu batırılmış gazlı bez ile örtün.
4. , Juguler ven tespit teşrih ve daha sonra ligasyon ve sabitleme için ven altına üç 6-0 ipek sütür koyun.
5. , Sternokleidomastoid kas tespit digastricus'un omohyoid ve arka karnının üstün karnından ayırmak ve karotis arter kolay maruz kalma bir ekartör ile çekin.
6. Karotis arter incelemek ve daha sonra ligasyon ve sabitleme için arterin altında üç 6-0 ipek sütür koyun.

4.2) Karotis arter kan akım ölçümü

1. Transonic yerleştirin, karotis arter etrafında soruşturma sabit tutmak ve ultrason jeli veya tuzlu su kullanılarak kişiyi optimize.
2. Veri analiz yazılımı kullanılarak transonik cihazın küçük ekranda gösterildiği gibi karotis arter rekor kan akım hızı
3. Ölçümü tamamladıktan sonra probu çıkarın

4.3) Karotis arter basıncı ölçümü (CAP)

1. Karotid arterin distal ucunu birbirine bağlamak ve yakın uca kelepçe.
2. Karotis arter etrafında 2 sabitleme sütür koyun. Kalmak dikiş için 10-0 proleni kullanın.
3. Geminin ön duvarında küçük bir kesi yapmak.
4. Millar kateter yerleştirin ve önceden yerleştirilmiş dikişler ile sabitleyin.
5. Veri analizi yazılımı CAP kaydedin.

4.4) Boyun ven kan akımı ölçümü

1. Juguler ven kaldırın ve akış hızını ölçmek için transonik akış probu yerleştirin.
2. Veri işleme ve akış hızı kaydedin.

4.5) Santral venöz basınç ölçümü (CVP)

1. Şahdamarından proksimal ucunu Kelepçe ve distal ucu Arter.
2. Kabın ön duvar microscissors kullanarak küçük bir kesik kesin.
3. Sıvı dolu kateter yerleştirin ve önceden yerleştirilmiş dikiş hatları ile sabitleyin.
4. Veri analizi yazılımı CVP kaydedin.

Karaciğer Hemodinamiğin Edinme 5. Karın Çalışması

5.1) Gemi tanımlama

1. Karın üzerinde enine kesi yapmak.
2. Sol tarafa bağırsakları Eventerate ve ıslak bir gazlı bez ile kaplayın.
3. Inferior vena kava, portal ven, ortak hepatik arter ve uygun hepatik arter tanımlayın.
4. Bütün izleme işlemi sırasında karın ve bağırsak her 5 dakika yüzeyinde bir ılık tuzlu su bırakın.

Portal kan akışının 5.2) Ölçüm

1. Portal ven teşrih.
2. Akış prob yerleştirirken, teknenin kaldırma sağlamak için, portal ven altında 6-0 ipek yerleştirin.
3. Portal ven etrafında transonik akış probu yerleştirin ve kan akış hızını ölçmek.
4. Portal ven kan akış hızını kaydedin.

Ortak hepatik arter akış 5.3) Ölçme

1. Dikkatli ortak hepatik arter ayır.
2. Teknenin kaldırma sağlamak için teknenin yaklaşık bir 6-0 ipek dikiş yerleştirin.
3. Arter etrafında akış probu yerleştirin.
4. Kendi kan akımını ölçmek ve veri elde.

Portal ven basıncı 5.4) Ölçüm (PVP)

1. Düz portal ven içine akıtır az yan dalları ile mezenterik ven, bir dalı seçin.
2. Seçilen mezenterik ven uzak ucunu Arter. Ligasyon bağırsak tüp yakın olduğundan emin olun. Onun küçük dalları bağlayan
3. 2 f yerleştirinven çevresinde 6-0 prolen sütür kullanarak ixing. Bu prosedürün kilit noktası ven bağlanarak zaman mezenterik arter dokunmamak için.
4. Portal ven proksimal ucunu sıkıştırın.
5. 10-0 prolen kullanılarak 2 kalmak sütür koyun. Kalmak dikiş ince mezenterik ven damar duvarına nüfuz etmelidir yana bazı kanama meydana gelecektir.
6. 45 derece açıyla eğik bir microscissor kullanarak ven küçük bir kesi yapmak.
7. Portal ven içine mezenterik ven aracılığıyla Millar kateter yerleştirin ve bunu düzeltmek
8. Portal ven basıncını kaydedin. Prosedürün sonunda, anestezi altında kanı akıtılarak kurban fareler.

Sonuçlar

Böyle solunum hızı ve kalp hızı gibi farelerin hayati parametreleri açıkça sıçan çok daha yüksektir. Ortalama sistemik kan basıncı ve boyun ven basıncı sıçan değerlere benzer ve insan verilerinden bile benzer.

Karaciğer hemodinamik veriler açıkça farklıdır. Biz 8 farelerin normal değerleri elde edilmiştir. Normal farelerde, portal kan akışı 1,6-2,3 ml / dakika arasında değişmektedir. Ortak hepatik arter akış 0.10 0.35 ml / dk arasında değişmektedir. Norm...

Tartışmalar

Hepatik Hemodinamiğin izlenmesi Hepatoloji ve karaciğer cerrahisinde önemli bir araştırma aracı. Hepatik hemodinamik verilerin elde dolaşım sistemi üzerinde hepatobilier prosedürlerin etkisini belirlemek için yardımcı olur. Vazoaktif ilaçlar değerlendiren çalışmalarda gerektiği gibi hepatik hemodinamik verilerin elde edilmesi de, örneğin portal basıncı ve portal akışını etkileyen ilaçların etkilerini incelemek için gereklidir.

Küçük boyutuna rağmen,...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
PowerLab 16/30	ADInstruments	PL3516
Quad Bridge Amp	ADInstruments	FE224	Bridge amplifier
Animal Bio Amp	ADInstruments	FE136
Needle Electrodes for FE136 (3 pk)	ADInstruments	MLA1213
Perivascular Flowmeter Module	Transonic	TS420
Flowprobe MA0.5PSB/MA1PSB	Transonic	MA0.5PSB/MA1PSB
SPR-1000 Mouse Pressure Catheter	Millar instruments	841-0001
fluid filled catheter	Terumo	SR+DU2619PX	26G, 0.64×19mm
micro scissors	F·S·L	No. 14058-09
micro serrefine	F·S·L	No.18055-05
Micro clamps applicator	F·S·L	No. 18057-14
Straight micro forceps	F·S·L	No. 00632-11
Curved micro forceps	F·S·L	No. 00649-11
needle-holder	F·S·L	No. 12061-01
6-0 silk	ethicon
6-0 prolene	ethicon
7-0 prolene	ethicon
10-0 prolene	ethicon
Tail cut-off device	Kent Scientific		www.kentscientific.com
LabChart7	ADInstruments		data  analysis software