Dalga boyundaki ve Oksidatif Stres Kırmızı / yakın-kızılötesi ışık Terapisi şiddetler bir Range Etkilerinin Değerlendirilmesi için Yöntemi<em&gt; İn Vitro</em

Özet

Non-coherent Xenon light was passed through narrow-band interference and neutral density filters to deliver light of varying wavelength and intensity to cultured cells. This protocol was used to assess the effects of red/near-infrared light therapy on production of reactive species in vitro: no effects were observed using the tested parameters.

Özet

Lazer veya ışık yayan diyot (LED) tarafından teslim Kırmızı / yakın-kızılötesi ışık tedavisi (R / NIR-LT), muhtemelen oksidatif stresi azaltarak in vivo merkezi sinir sistemi yaralanmaları, bir dizi fonksiyonel ve morfolojik sonuçlar geliştirir. Bununla birlikte, oksidatif stres R / NIR LT etkileri dalga boyu ya da ışının yoğunluğuna bağlı olarak değişecektir gösterilmiştir. Tedavi parametreleri karşılaştıran çalışmalar nedeniyle vitro optimizasyon çalışmalarında koymak yoluyla yüksek uygun çoklu dalga boylarını veya yoğunluklarını, teslim piyasada mevcut cihazların olmaması nedeniyle, eksiktir. Bu protokol belirli bir yaralanma modeli için gerekli olan terapötik dozları optimize etmek için dalga boyu ve yoğunluk aralığında ışık iletimi için bir yöntem açıklanır. Bu dalga boyu ve yoğunluk parametreleri kolayca değiştirilebilir hangi ışık sağlamaya yarayan bir yöntem olup, reaktif oksijen türleri azaltmak için Ar / NIR LT optimal dozunun belirlenmesini kolaylaştırmak ileri sürdülerIn vitro (ROS).

Düzensiz Xenon lambası değişen dalga boylarında (440, 550, 670 merkezi dalga boylarının ve 810nm) ve akızamanları sağlamak için dar bantlı girişim filtreleri içinden süzülmüş (8.5 x 10 ^-3 3.8 x 10 ^-1 J / ^cm2) ışık kültür hücreleri. Aygıtından Işık çıkışı, her dalga boyunda ışık, terapötik anlamda ilgili, eşit quantal doz yayılmasını sağlamak için kalibre edilmiştir. Glutamat DCFH-DA ve _{H2O 2} duyarlı fluoresan boyalar kullanılarak ışık ile muamele edilmiş hücreler stresli reaktif türleri tespit edilmiştir.

Başarıyla MSS yaralanması modeli olarak glutamata maruz kültür hücreleri, ilgili dalga boylarında ve yoğunlukları, fizyolojik ve terapötik bir aralığında ışık vermiştir. Kültürlenmiş hücreler tarafından üretilen ROS üzerinde bir etki gösterebilir değil mevcut çalışmada kullanılan R / NIR LT akıcılıklarda birlikte, ışık uygulama yöntemi için diğer syst için geçerlidirems daha fizyolojik mitokondri veya ilgili organotipik dilim kültür modelleri izole dahil, ve oksidatif metabolizma sonucu önlemlerinin bir dizi üzerindeki etkilerini değerlendirmek için kullanılabilir.

Giriş

Reaktif oksijen türleri (ROS) sinyal transdüksiyon yollar ve ^nöro-1 de dahil olmak üzere, hücresel metabolizmanın normal reaksiyonlar, bir dizi gereklidir. Endojen antioksidan mekanizma ROS üretimini kontrol edemiyoruz Ancak, hücreler oksidatif strese ^2,3 yenik düşebilir. MSS yaralanma sonrasında, ROS ve oksidatif stres varlığında ilişkili artışlar hasar ^4,5 ilerlemesinde önemli bir rol oynadığı düşünülmektedir. Değerlendirilmiştir oksidatif stres zayıflatmaya yönelik stratejiler geniş olmasına rağmen, nörotravma ⁶ aşağıdaki klinik kullanımda ROS üretimini ve ilişkili oksidatif stresi zayıflatmaya yönelik hiçbir tamamen etkili, klinik açıdan önemli bir anti-oksidan stratejileri şu anda. Bu nedenle oksidatif stres zayıflama terapötik müdahale ⁷ için önemli bir hedef olmaya devam etmektedir.

İyileştirmeler takiping R / NIR LT yaralanmalar ve belki de oksidatif stres azaltarak miyokard enfarktüs boyutu, diyabet renal ve hepatik komplikasyonlar, retinal dejenerasyon, merkezi sinir sistemi hasarı ve inme ⁸ azalmalar da dahil olmak üzere geniş bir hastalık aralığında bildirilmiştir. MSS yaralanması, özellikle ilgili olarak, 670nm ışık etkinliğinin klinik öncesi çalışmalar, retinal dejenerasyon ^9-11, omurilik yaralanması, ¹² nöronal ölüm ¹³ modellerinde iyi etki gözlemlenmemiştir. Klinik çalışmalar, ancak bu çalışmaların sonuçları ¹⁵ parametreleri etkin tedavi istihdam belki de bir arıza, umut verici görünmüyor, bağlı makula dejeneresansı kuru yaş için yapılan ve inme ¹⁴ şu anda devam etmektedir edilmiştir. Gibi, R / NIR-LT yaygın bir non-invaziv, yönetmek kolay ve nispeten ucuz bir tedavi olmasına rağmen, nörotravmada normal klinik pratikte bir parçası olarak kabul edilmemiştir. Klinik çeviri Engeller bir cl eksikliği,Erken bir standart etkili tedavi protokolü ^16,17 eylem ve yokluğu mekanizmasını anladım. Işık tedavisi ile ilgili güncel literatür ışınlama kaynaklarına göre (LED veya lazer), dalga boyu (örneğin, 630, 670, 780, 810, 830, 880, 904nm), ışınlama toplam dozu (joule / tedavi parametrelerinin varyasyon bir bolluk ortaya birim alan), süresi (maruz kalma süresi), zamanlama (öncesi veya sonrası hakaret), tedavi sıklığı ve doğum şekli () darbeli veya sürekli ^8. çalışmalar arasında tedavi parametreleri değişkenlik karşılaştırma zorlaştırır ve etkinliği ¹⁶ ilişkin şüphecilik katkıda bulunmuştur.

Bu nedenle, R / NIR-LT optimizasyonu açıkça birden değişkenleri karşılaştırmak için gerekli yüksek verimli tarama mekanizması sağlamak mümkün hücre kültürü sistemleri, gereklidir. Ancak wa üzerinde yeterli esneklik ve kontrol sağlayabilir birkaç piyasada mevcut aydınlatma sistemleri vardırvelength ve yoğunluğu gibi optimizasyon deneyleri gerçekleştirmek için. Ticari olarak temin edilebilen cihazlar genel olarak ışık yoğunluğu, sadece farklı olabilir, farklı üreticiler tarafından birden çok LED elemanları içeren araştırmacılar olarak elde edilen çoklu dalga ya da yoğunlukları, teslim etmek mümkün değil, aynı zamanda yayılan ışığın dalga boyu spektrumu değildir. Biz böylece R / NIR-LT parametrelerinin yakın, doğru kontrol sağlayan, dalga boyu ve ışık akıcılıklarda bir dizi üreten, dar girişim filtreleri ile filtre geniş bant Xenon ışık kaynağı kullanılarak bu konuya değindik.

Bu tedavinin terapötik doz R / NIR LT durumunda sitokrom C oksidaz (COX) ¹⁸ olduğu kabul edilmektedir, photoacceptor (kromofor) ile etkileşim fotonların sayısı ile tanımlanır dikkat etmek önemlidir. Teslim foton enerjisi dalga boyu ile değişir; farklı dalga boylarında enerji eşit dozlarda anlam com olacakfotonların farklı sayılar ödüllü. Bu nedenle, cihazdan çıkan ışık, test edilecek seçilmiş dalga boylarının her biri için bir foton eşit sayıda yaymak üzere kalibre edilmiştir. Biz in vitro hücrelere dalga boyu ve yoğunlukları aralığında R / NIR-LT sunmak için kullanılabilecek bir sistem geliştirildi ve tabi hücrelerde ROS üretimi üzerinde teslim R / NIR-LT etkilerini ölçmek yeteneği göstermiştir glutamat stres.

Protokol

1. Optik Kalibrasyon: Ölçme Işık Çıkışı

1. Işık teslim aparatı hazırlamak için, geniş bant ışık kaynağı bağlamak (örneğin, Xenon veya tungsten lamba) uygun bir güç kaynağına. Işık, birleştirilmiş ışını üretmek için, ışık kaynağının önünde bir kolimatör lensi yerleştirin. Işık demeti gelen ısının çoğunu çıkarmak için bir sıvı ısı filtre içinden ışık geçirir. Uygulamaya bağlı olarak, ışığın daha esnek teslimat (örn., Bir kuluçka makinesi içine) sağlayan bir sıvı ışık kılavuzunun giriş açıklığı, üzerine birleştirilmiş ışın odak.
2. Sıvı ışık kılavuzunun diğer ucunda, ikinci bir kolimatör lensi ve daha sonra müdahale ve nötral yoğunluk filtreleri için bir tutucu yerleştirin. Bu düzenleme istenen dalga ve yoğunlukta bir ışık eşit aydınlatılmış nokta üretir olmadığını kontrol edin.
   Not: Işık rehber ve örnek uçağın sonu arasındaki mesafe bağlı olarak değişebilir gerekebilirIşıklı, ancak gereken alan ışık kılavuzu artar ucundan mesafe olarak, ışık şiddeti azalacak unutmayın. Bu çalışmada, bu mesafe, 14cm ve eşit oranda 96 oyuklu bir plaka üzerinde 3x3 alan iyi aydınlatan bir kiriş kesite üretir.
3. Lamba ve ilişkili optik bileşenleri bu sokak ışığı olun numune ulaşmak mümkün.
4. Sıvı ısı filtresi su soğutucusu açın ve filtre ceket suyun değişimi olduğundan emin olunuz. Lamba güç kaynağı açın ve stabilize genişbant ışık kaynağı için en az 5 dakika bekleyin. Not: su soğutucu kullanılması cihazın aşırı ısınmasını önlemek için gereklidir.
5. Aydınlatma istenen dalga bandını oluşturmak için (genellikle yarım maksimum (FWHM) bant genişliği kendi merkez dalga boyu, tepe geçirgenlik ve tam genişliği tarafından açıklanan) bir dar girişim filtre seçin. Not: Bu çalışmada kullanılan dar girişim filtreleri 4 idi42 nm, 550 nm, 671 nm ve 810 nm.
6. Numune tedavi sırasında yerleştirilmiş olan düzlemde lamba tarafından üretilen ışık ölçülür. Üreticinin talimatlarına uygun olarak uygunluk yazılımı kullanılarak, uygun bir spektrorayometrenin bağlı kalibre edilmiş bir ışık şiddeti prob (kosinüs kolektörü) kullanılarak ışık ölçülür.
7. İstenilen çıkış elde edilene kadar ışık yoğunluğunu ayarlamak için nötral yoğunluk filtreleri kullanın. Not: Bu çalışmada, her bir girişim filtresi tarafından geçirilen ışığın yoğunluğu dört tedavi dalgaların her birinde eşit quantal çıkış verecek şekilde ayarlanır. Bu lamba çıkışı değişebilir gibi, düzenli kalibrasyon kontrol etmek önemlidir.
   Not: aparatın set up takiben, hücreler ışıklı hazır 1 çalışmada kullanılan ışık teslim aygıtının bir temsildir..

Işık teslim aparatı. Resimli Şekil 1. Görüntü ışık güç kaynağı, konut, collimating lens, su filtresi, giriş açıklığı, sıvı ışık kılavuzu, ikinci kolimatör lens, filtre tutucu, tedavi çerçevesi ve mat siyah kart ile xenon lamba vardır. Dar dalga boyu ve yoğunluğu filtreleri gösterilmez unutmayın.

2. Hücre Hazırlanması

1. açıklandığı gibi R / NIR LT dağıtım yöntemi, herhangi bir hücre tipi ya da in vitro model sisteminde uygulanabilir; Hücre kültürü, aşağıdaki tanımları, kültür feokromositoma (PC12), Müller (rMC1) ve primer karma retina hücreleri tarafından iyi bilinen teknikler kullanılarak, genel olarak.
2. Işık tedavisi ve oksidatif stres tahlilinde hücre ekim önce kültür T75 flas uygun ekler (örn., FBS, antibiyotikler) ihtiva eden ilgili büyüme ortamında hücrelerin ölümsüz% 70-80, birbirine karışana kadar ks.
3. Örneğin test edilecek hücre tipi için uygun yöntemi kullanarak, T75 şişelerinden ölümsüzleştirdi hücreleri ayırmak., Tripsin. Gerekirse, 96 oyuklu tahlil plâkalarında hücrelerin tohumlama ile devam etmeden önce, kaplama bir deney plakası (PC 12 hücreleri için, örneğin.) 1 saat için 10 ug / mL poli-L-lizin ile kuyu veya 10 ug / ml poli-L-lizin için 10 ug olan bir O / N inkübasyon, ardından 1 saat / mL, laminin (ör., karışık retina hücreleri için).
4. Santrifüj hücreleri (örn., PC12 hücreleri için 405 x g ya da rMC1 hücreleri için 218 x g'de 10 dakika sonra 3 dakika) uygun toplamak için, uygun hücre kültür ortamı içinde 8 ml supernatant ve tekrar süspansiyon çıkarın.
5. Karışık retinal hücreler kullanılacak ise, tespit edilmiş işlemler ^19'a göre enzimatik sindirme (papain) ile P0-5 yenidoğan sıçan yavrularından hazırlanması
6. Bir hemositometre kullanılarak,% 0.4 (a / h), tripan mavi boya hariç canlı hücre sayısı.
7. Hücre yoğunluğu suc ayarlamaHücreler, kültür içinde 24 ya da 48 saat sonra yaklaşık olarak% 70-80 konfluent olacak s. (PC 12 hücreleri için tohum yoğunluğu rMC1 hücreleri için, bu, 2.5 x 10 ⁵ canlı hücre / ml ve karışık retina hücreleri için 8 x 10 ⁵ canlı hücre / ml, 4.0 x 10 ⁵ canlı hücre / ml). Hücreleri ilave edildikten sonra ya da uygun bir büyüme ortamı, 100 ul, _{(H2O 2} veya DCFH-DA deneyi için sırasıyla kullanılır) açık ya da siyah 96 oyuklu plakalar, plaka 37 ° C'de, 5 düz bir yüzey üzerinde oturmasına olanak sağlamak için % _CO2 hücre yapışmasını sağlamak için en az 24 saat boyunca (ya da koşullar, belirli bir hücre tipi için uygun).
8. Uygun 96 gözlü tepsiler içinde büyüme ortamı içinde kültür hücreleri% 70-80 konfluent (PC12 ve rMC1 hücreleri için 24 saat karıştırılmış retina hücreleri için 48 saat) kadar.

3. Hücreleri Glutamat stresördür ekleme

1. Uygun tam yetişmektedir 0-10mM L-glutamik asit monosodyum tuzu, hidratı stres konsantrasyonları hazırlamakinci kültür ortamı.
2. Hücrelerden ortamı çıkarın ve yavaşça PBS (PC12) veya HBSS (rMC1 ve karışık retina hücreleri) ile hücreler 3 kez yıkayın. Yıkamadan sonra, / göz 100 ul toplam hacmine glutamat içeren ortamı eklenir.

Işık Tedavi 4. İlk dozları

1. Hemen glutamat ya da tercih edilen stres eklenmesi ile hazırlanan ışık verme cihazının altına yerleştirilerek, istenen dalga boylarında ve yoğunluklarda ışık tedavisi hücrelerin maruz kalmaktadır. Dalga boyuna bağlı olarak nötral yoğunluk filtreleri kurulan kombinasyonları kullanılarak ışık demetinin quantal çıkışını yönetilen değiştirmek emin olun.
   Not: Mevcut deneylerde, 3 dakika boyunca ışık tedavisi hücreleri maruz 37 ^o C ısı yastığı 96 kuyu plakaları dinlenme sıcaklığını korumak. Gerekli tedavi süresi değişebilir.
   1. 96-wel bitişik kuyulara yansıtan ışık önlemek için hücrelerin altında bir mat siyah kart yerleştirinl tepsisi diğer tedavi parametreleri için belirlenen.
2. Tedavi süresi, daha uzun için arzu edildiği takdirde, uygun olan ya da koşulları hücre kültür ortamının pH'ının muhafaza edilmesi ya da, ideal olarak% 5 _CO2 ayarlandı _CO2 konsantrasyonuna sahip bir kuluçka makinesi içinde cihaz ve tedavi plakaları yerleştirmek için 25 mM Hepes tampon eklemek özel bir hücre tipi için.
3. Işık tedavisi tamamlandıktan sonra, düz bir yüzeye yerleştirin ve hücreleri 37 ° C ve% 5 CO ₂ inkübe 24 saat için (ya da koşullar ne olursa olsun hücre tipi için en uygun).
   Not: Yukarıda tarif edildiği gibi, istenen R / NIR LT ek dozlar uygulanabilir.

ROS Işık Tedavi ve Algılama 5. Nihai Doz

1. Işık tedavisi son turu yapmadan önce, reaktifler ROS tespiti için kullanılacak hazırlamak. ₂ O ₂ algılama reaktif çalışma 50mM sitrat tamponu (pH 6.0), Triton X100 ve H hazırlayınçözeltisi (1: 2: 10 mM _{H2O 2} saptama reaktif maddesi stok çözeltisi 97 oranı, 10 U / ml yaban turpu peroksidaz, 50 mM soyum sitrat (pH 6.0)). Uygun bir ortamda 100uM nihai konsantrasyon DCFH-DA hazırlayın.
   Not: PC 12 hücreleri için DCFH-DA reaktif RPMI ortamı içinde olan, rMC1 hücreleri için DCFH-DA reaktif DMEM ortamı. Piyasada mevcut algılama reaktifleri özel ROS diferansiyel hassasiyetleri var ve reaktifler bir bireysel başvuru için istenen bilgileri temin etmek dikkatle seçilmelidir unutmayın.
2. Aşama 4.1-4.1.2 tarif edildiği gibi, hücrelere ışık tedavisi uygulayın. Emin olun hücreler ışık istenen etkilenirler / dalga boyları ile tedavi ediliyor.
3. Hemen glutamat içeren ortamını çıkarın ve uygun tampon çözeltisi ile iki kez yıkanır, ışık tedavisi aşağıdaki gibidir (PC 12 hücreleri için, PBS kullanılır ve rMC1 hücreleri için, HBSS kullanılır). Aşağıdaki gibi hücreler üzerinde ROS tahlilleri gerçekleştirin:
   1. _{H2O 2} deneyi: kuyuların herbirine 50 mM sitrat tampon maddesi (pH 6.0) ve 5 ul Triton X100, 45 ul ekle. Yavaşça, 30 saniye için bir orbital çalkalayıcıda hücreler, çalkalama 15 dakika boyunca _CO2 37 ° C'de inkübe etmek ve% 5. H 50 ul _{H2O 2} algılama çalışma çözeltisi eklenir ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edilir. 530nm bir eksitasyon dalga boyu ve 480nm emisyon dalga boyu olan bir plaka okuyucusu kullanılarak floresan ölçülür.
   2. DCF deneyi: bölümlerinin her birine DCFH-DA, 100 uM çözeltisi 100 ul ve 37 ° C'de 30 dakika% 5 _CO2 inkübe edilir. 100 uM DCFH-DA içeren Ortamı çıkarın ve (yukarıda anlatıldığı gibi) iki kez uygun bir tampon çözeltisi ile yıkanır. Kuyusunun herbirine, tampon çözeltisi ve 10 ul Triton X100, 90 ul ekleyin ve yavaşça 37 ° C'de 30 saniye 15 önce dakika kuluçkalama için bir orbital çalkalayıcı üzerinde çalkalayın. 480nm bir eksitasyon dalga boyu ve emisyon Wavel bir plaka okuyucusu kullanılarak DCF edilen floresan ölçülür530nm ve ength.
   3. Hızlı ROS mg protein hesaplamak için standart bir eğri değini ile, üreticinin talimatlarına uygun olarak protein konsantrasyonunu belirlemek için kolorimetrik bir kit kullanılarak, oyuklarda kalan hücrelerin protein konsantrasyonu ile ilgili değerler.

Sonuçlar

670nm bir dalga boyunda, iletilen ışığın, önceden in vivo üretimi (0.3 J / ^{cm2), 20} olarak yararlı olduğu gösterilmiştir 670nm ışık dozu kapsayan akıcılıklarda bir dizi hücre ışın tedavisi amacıyla nötr yoğunluk filtreleri kullanılarak kalibre edilmiştir. Artan ışık kaynağının önünde nötral yoğunluk filtreleri sayısı arttıkça, yoğunluk (W / m ²⁾ daha az ışık hedef alana geçmek için izin düşmüştür. Tablo 1, bir dalga boyu filtre ta...

Tartışmalar

Biz başarıyla R / NIR-LT in vitro optimizasyonu çalışması için bir mekanizma sağlamak için kesin ve kalibre ışık iletim sistemini adapte var. R Dalgaboyu ve yoğunluk parametreleri / NUR-LT, bu sistemi kullanarak doğru ve etkili bir şekilde manipüle edilmesi mümkün bulunmaktadır. ROS test edilen hücre tiplerinde, Verilen dalga boylarında ve dozajlarda düşük değil, ancak biz, hücre ölümüne yol açmamıştır hücrelerininkine ışık tedavisi kurulmuştur. 670nm (20.11W / m ²⁾

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
OxiSelect Intracellular ROS Assay Kit (Green Fluorescence)	Cell Biolabs	STA-342
Amplex UltraRed Reagent	Molecular Probes	A36006
300 Watt Xenon Arc Lamp	Newport Corporation	6258	Very intense light source, do not look directly into the lamp. Ensure there is sufficient cooling to the lamp whilst it is switched on
USB4000-FL Fluorescence Spectrometer	Ocean Optics
CC-3-UV Cosine Corrector for Emission Collection	Ocean Optics
200μm diameter quartz fibre optic	Ocean Optics
SpectraSuite Spectroscopy Platform	Ocean Optics
2300 EnSpire Multimode Plate Reader	Perkin Elmer
Pierce BCA Protein Assay Kit	Thermo Scientific	23225
Triton X-100	Sigma-Aldrich	9002-93-1	Acute toxicity, wear gloves when handling.
L-Glutamic acid monosodium salt hydrate	Sigma-Aldrich	142-47-2 (anhydrous)
Pheochromocytoma rat adrenal medulla (PC12) cells	American Type Culture Collection	CRL-2522
Roswell Park Memorial Institute (RPMI1640) Media	Gibco	11875-119
Fetal Bovine Serum, certified, heat inactivated, US origin	Gibco	10082-147	Warm to 37 °C in water bath before use
Horse Serum, New Zealand origin	Gibco	16050-122	Warm to 37 °C in water bath before use
GlutaMAX Supplement	Gibco	35050-061	Warm to 37 °C in water bath before use
100 mM Sodium Pyruvate	Gibco	11360-070	Warm to 37 °C in water bath before use
Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)	Gibco	15140-122	Warm to 37 °C in water bath before use
100X MEM Non-Essential Amino Acids Solution	Gibco	11140-050	Warm to 37 °C in water bath before use
Retinal Muller (rMC1) cells	University of California, San Diego
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)	Gibco	11965-118	Warm to 37 °C in water bath before use
75 cm2 Flasks	BD Biosciences	B4-BE-353136
Poly-L-lysine hydrobromide	Sigma-Aldrich	25988-63-0	Aliquot and store at -20 °C
Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)	Gibco	14025-134	Warm to 37 °C in water bath before use
Phosphate-Buffered Saline (PBS)	Gibco	10010-049	Warm to 37 °C in water bath before use
Laminin Mouse Protein, Natural	Gibco	23017-015	Aliquot and store at -20 °C
1X Neurobasal Medium	Gibco	21103-049	Warm to 37 °C in water bath before use
Trypan Blue Solution, 0.4%	Gibco	15250-061
165U Papain	Worthington
L-Cysteine	Sigma-Aldrich	W326305
Corning 96 well plates, clear bottom, black	Corning	CLS3603-48EA
Costar Clear Polystyrene 96-Well Plates Untreated; Well shape: Round; Sterile.	Costar	07-200-103
Seesaw Rocker	Standard lab epuipment
Centrifuge	Standard lab epuipment
Neutral Density Filter Paper (0.3)	THORLABS
442 nm Bandpass Filter	THORLABS	FL441.6-10
550 nm Bandpass Filter	THORLABS	FB550-10
670 nm Bandpass Filter	THORLABS	FB670-10
810 nm Bandpass Filter	THORLABS	FB810-10e
Unmounted Ø25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.1)	THORLABS	NE01B
Unmounted Ø25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.2)	THORLABS	NE02B
Unmounted Ø25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.3)	THORLABS	NE03B
Unmounted Ø25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.5)	THORLABS	NE05B
Unmounted Ø25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.6)	THORLABS	NE06B
Unmounted Ø25 mm Absorptive Neutral Density Filters (1.0)	THORLABS	NE10B