JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Analyzing the physiological properties of olfactory sensory neurons still faces technical limitations. Here we record them through perforated patch-clamp in an intact preparation of the olfactory epithelium in gene-targeted mice. This technique allows the characterization of membrane properties and responses to specific ligands of neurons expressing defined olfactory receptors.

Özet

Özel bağ ile uyarıldıkları zaman koku duyu nöronlarının fizyolojik tepkilerini (OSN) analiz koku tahrikli davranışları ve modülasyon temelini anlamak önemlidir. Bu kodlama özellikleri koku molekülleri ve koku reseptörü (OR) arasındaki ilk etkileşim ağır bağımlı OSNs olarak ifade edilmiştir. ifade YA kritik kimliği, özgünlüğü ve ligand spektrumu. OR ligandı bulmak için olasılık epitel içinde rastgele seçilen bir OSN çok düşüktür dile getirdi. Bu sorunu çözmek için, bu protokol, genetik olarak tanımlanmış ORs promoterinin kontrolü altında floresan protein GFP ifade isim levhası fareler kullanır. OSNs komşu hücrelerin olgunlaşması ve fonksiyonu etkileyen ile burun boşluğuna astar sıkı ve organize epitel yer almaktadır. Burada OSNs e özelliklerini sağlam bir koku epiteli izole ve patch-kelepçe kayıtları ile kaydetmek için bir yöntem tariftanımlanan koku reseptörü xpressing. protokol komşu dokuya etkisi tutarken tek OSN membran özelliklerini karakterize sağlar. Patch-kelepçe sonuçlarının analizi ligand / VEYA etkileşimleri, iletim yollarının ve farmakoloji, OSNs 'kodlama özellikleri ve membran düzeyde modülasyon kesin miktarının verir.

Giriş

Koku alma duyu nöronları (OSN) koku algı ilk adımı temsil etmektedir. Kemirgenlerde burun boşluğunu çevreleyen koku epiteli bulunan beyinle kendi akson yoluyla gönderilen aksiyon potansiyelleri içine koku kimyasal bilgi dönüşümü. Daha iyi koku kodlama mekanizmaları anlamak için, OSNs iletimi ve membran özelliklerini karakterize etmek gereklidir. Yakın zamana kadar, memeli OSNs özelliklerini karakterize etmek için kullanılan teknikler çok ayrışmış OSNs 1-4 üzerinde gerçekleştirilmiştir. ayrışma süreci çevrelerinden OSNs boşaltmak için çeşitli mekanik ve kimyasal (yani enzimler) süreçleri kullanır. Bu işlemler, kayıtlar için uygun bir hücre, düşük uyarmaktadır. Bu az sayıda GFP etiketli hücrelerin durumunda daha da kritik öneme sahip olabilir. Aynşması da OSNs ve Surviv artırabilir koku epitel başka hücreler arasındaki yerel hücre-hücre etkileşimleri ortadan kaldırırEl ve OSNs 'özelliklerinin modülasyonu. Ayrışma işlemini atlamak için, sağlam bir preparat 5 geliştirilmiştir.

Her OSN büyük bir çoklu gen ailesi 6 arasından seçildiği (OR), bir koku reseptörü ifade eder. Fare ana koku epiteli olarak ifade 1,000 OR ~ vardır. Nedeniyle vahşi tip hayvanlarda OR çok sayıda, büyük ihtimalle aynı ifade OSNs kayıt YA çok düşük etmek. Bu sınırlamaları aşmak için, gen hedeflenen fareler mevcut olduğu bir tespit VEYA floresan proteini 7-9 ile etiketlenmiş ifade tüm OSNs. Bu etiketli OSNs ayrışmış hazırlıkları Daha önce de belirttiğimiz sakıncaları ile 7,10,11 fonksiyonel analiz yapmak için kullanıldı. Genetik etiketli farelerden alınan sağlam bir epitel hazırlık 5 Dolayısıyla bu sorunları circumvents. Vi yakın olarak bir ortamda tam olarak tanımlanmış ORs ifade OSNs aktivitesi izlenmesine olanak sağlarmümkün olduğunca vo. Ayrıca, OSNs patch-kelepçe kayıtları da zar özellikleri, iletim yolu farmakoloji, ligand / VEYA etkileşimlerinin hassas analiz sağlar. Bütün bu konular pek dışı kayıtları kullanılarak analiz edilebilir. Biz koku reseptörü SR1 ve MOR23 12,13 ifade OSNs yanıtları izlemek için bu tekniği kullanılır. teknik fizibilite nöronlar 15,16 ifade OSNs 14 eksprese eden MOR23 üzerinde diğer gruplar yanı sıra, diğer ORs ile teyit edilmiştir. OSNs tanımlanmış bir nüfus izleme 17 yaşlanma, böyle bir gelişme 14 gibi pek çok farklı bağlamlarda özelliklerinin analizi yol açabilir, odorant indüklenen plastisite 18 ve 15 kodlama koku odorant reseptörün dizilimindeki rolü. Bu protokol, böylece zar düzeyinde tanımlanan OSNs fonksiyonel özelliklerini izlemek için güçlü bir araç sağlar.

Protokol

Bu protokol Université de Bourgogne hayvan bakım kuralları takip ve Université de Bourgogne etik kurul tarafından onaylandı.

1. Hayvanlar

  1. Jackson Laboratuvarı'nda mevcut genetik olarak OR-IRES-tauGFP fareler kullanın. Bu fareler koku alma sisteminin 19 akson hedefleme ve gelişimini analiz etmek için Dr. Peter Mombaerts 'laboratuvarda geliştirilmiştir. Örneğin, MOR23-IRES-tauGFP hattı, stok numarası 006643, resmi gerilme adı B6 taşır; 129P2- Olfr16 tm2Mom / MomJ; Benzer şekilde, SR1-IRES-tauGFP hattı, stok numarası 6717 resmi adı B6 taşır; 129P2- Olfr124 tm1Mom / MomJ.
  2. Hayvanların yaşı ile ilgili olarak: protokolünün daha iyi bir sonuç için, yaş 2 ve 4 hafta arasında hayvanları kullanın. Bu yaş grubunda, diseksiyon daha kolay (yumuşak kemikler, sıkı koku epiteli) ve dendritik topuzlar bi olmasıdırgger yaşlı hayvanlarda karşılaştırın.

Elektrotlar ve Çözümleri 2. Hazırlık

  1. Uyarıcı pipetler için: Satın alma pipetler uyarıcı prepulled. Aksi takdirde, elle onları hazırlamak.
    1. Bir alevi kullanarak, ucundan yaklaşık 1 cm altı 1 mm cam pipetler bükün. Bir delikten tarafından güçlendirmek 1,5 cm ısıyla daralan boru bu altı pipetler artı düz 7 inci takın.
    2. Isı birlikte ekli varil korumak için boru küçültmek. Varil diğer ucuna ek bir ısı shrink boru takın. Çok varil çektirmesi ile bu uyarıcı pipet çekin.
    3. Bükülmüş ipuçları güçlendirmek için deliğinden etrafında bazı beyaz sıvı tutkal ekleyin. Kuru O / N edelim.
  2. Normal Ringer hücre dışı solüsyon, 1 veya 2 L hazırlayın (mM olarak: NaCl 124, KCI 3, MgSO 4 1.3, CaCl2 2, NaHCO 3 26 NaH 2 PO 4 1.25, glükoz 15; pH 7.6, 305 mOsm). 4 ° C'de tutunkullanılıncaya kadar.
  3. (MM olarak) hücre içi bir stok çözelti hazırlayın: KCI 70, KOH 53, metansülfonik asit, 30 EGTA 5, HEPES 10, sukroz 70; pH 7.2 (KOH) ve 310 mOsm. Kullanılana kadar 4 ° C 'de muhafaza edin. Birkaç hafta için iyi.
  4. Deneyden önce (son dakikada) ekstemporane nystatin ile hücre içi kayıt çözeltisi hazırlayın.
    1. DMSO 50 ul ekleyin, nistatin 3 mg tartılır; tamamen seyreltilmiş kadar vorteks 20 sn sonra 2-3 dakika sonikasyon.
    2. Hücre içi stok çözeltisi, 5 ml DMSO-nistatin çözeltisi 20 ul ekle. Vortex 20 sn, daha sonra 3 dakika sonikasyon. 4 ° C 'de, bu çözüm tutun ve doğrudan ışıktan korumak, nistatin ışığa duyarlıdır. Bu çözelti, birkaç saat süre ile kullanılabilir. Her gün değiştirin.
    3. Koku epiteli hazırlık mikroskop altında sonra, elektrotlar doldurmak için bir alev uzatılmış sarı ucu ile 1 ml şırınga içinde bu çözümün bir kısmını almak; Doğrudan ışıktan korumak. Oda sıcaklığında, nistatin çözelti bir kezsabit değildir; her saat şırınga veya buz tutmak ml, 1 çözüm değiştirin.
  5. İç nystatin çözeltisi ile 15-20 M? Bir direnç ile uzun boyun ve küçük bir ipucu (~ 2 mikron) elde etmek için bir çektirmenin ile kayıt elektrotları çekin.
  6. Davlumbaz altında DMSO içinde 0.5 M de odorant çözeltisi hazırlayın; eş-payı ve kullanılana kadar -20 ° C'de saklayın. Istenen konsantrasyona kadar, Ringer çözeltisi içinde Deodorantını seyreltin. Uyarıcı pipet doldurun.

Koku Epitelinin 3. hazırlanması

Not: TD-IRES-tauGFP fareler ya da promotörün kontrolü altında tauGFP ifade eder. Bu farelerde, ilgi OR ifade tüm nöronlar GFP ile etiketlenmiş. Bu protokol tüm bölgeler ifade ameliyathanelerinde için uyarlanmıştır. Ancak, disseksiyonları ve kayıtlar dorsal bölgesinde ifade ameliyathanelerinde için daha kolaydır.

  1. Ketamin ve ksilazin (150 mg / kg ve 10 mg / kg Yönetim Kurulu karışımı enjekte edilerek hayvan anestezisiy ağırlık). Dekapitasyon genç farelerde ya da yaşlı fareler için uygun bir şekilde muhafaza kemirgen giyotinle birlikte keskin bir makasla gerçekleştirilebilir.
    1. Kullanımı halka diseksiyon makas dorsal deri yoluyla uzunlamasına bir medial kesi yapmak. Bunu dışında çekerek cildi çıkartın. Makas kullanarak, çene eklemi alt çene kesti. Dişlere koronal kesim paralel olarak üst ön dişleri çıkarın.
    2. Gözlerinin arkasında başın bir koronal kesim olun ve başın sadece ön kısmını tutun. Kapsamında diseksiyon için buz Ringer çözeltisi içinde bunu batırın.
  2. Kapsamında ayır: ventral tarafında, üst çene / diş boyunca uzunlamasına kesim yapmak. Burun boşluğunun dorso-yan tarafında takip, uzunlamasına sırt kemikleri kesin. En kemikleri ve damak kaldır; oda sıcaklığında oksijenli Ringer buna bağlı septum ve epitel aktarın.
  3. Son diseksiyon için: Sağ kayda başlamadan önceoturum forseps ile altta yatan septum gelen epitel uzak soyun. Forseps ile ve yapışma güçlü septum ön kısmında iki 4-5 mm makas darbeleri (kullanım microvannas makas) ile epitel ayırın.
    1. Dikkatle septal epiteline dorsal bağlantısı boyunca dışarı keserek vomeronasal organı çıkarın. Yukarı bakacak şekilde mukus tabakası ile bir kayıt odasına epitel aktarın; Bir harp ile odasında düz tutun.
  4. Floresan optik ve hassas bir kamera ile donatılmış dik bir mikroskop altında odasını takın. 40X su daldırma hedefi (sayısal açıklık 0.8) ve bir büyüteç ile elde ekstra bir 2X veya 4X büyütme ile yüksek büyütmede bilgisayar ekranında hazırlık gözünüzde canlandırın. Oda sıcaklığında oksijenli Ringer (1-2 ml / dakika) sürekli serpmek.

4. Kayıt Oturumu

  1. Floresan hücreye Ara: 480 de hazırlık heyecanlandırmak530-550 nm aralığında ışık yayar EGFP nm; floresan ve parlak bir alan altında güvenilir görünür tek dendritik topuzu hedef.
  2. Nystatin ile hücre içi çözelti ile elektrot doldurun; hafifçe elektrot üzerinde dokunarak kabarcıkları.
  3. Elektrot tutucu elektrot yerleştirin pipet pozitif basınç uygulayın; Direnç 15-20 M? Olmalıdır.
  4. Hücreye yakın elektrot getirin; Direnç ~ 40 M? ulaştığında, pozitif basınç serbest bırakın ve bir gigaseal ulaşmak için hafif negatif basınç uygulayın.
  5. Conta ulaşıldığında, yaklaşık -75 mV zar potansiyeli ayarlanır;
  6. Hücre açıldıktan sonra, stimülasyon protokolleri, farmakolojik tedaviler ile devam edin. Tek bir odorant stimülasyon, kayıt spontan aktivite 200-500 milisaniye kadar yanıtı ölçmek için, 500 milisaniye boyunca canlandırmayı ve 10 saniye 13 hücre yanıtı ölçmek. Farmakolojik tedaviler için de farmakolojik ajanlar serpmekİstenen bir konsantrasyon, 20.

5. Veri Analizi

  1. Olarak takip Odorant uyarılmasıyla ortaya akımları analiz: (msn maksimum genlik% 90 ulaşmak için gerekli zaman,) maksimum genlik, yükselme zamanı, toplam akım (PAS eğrinin altında kalan alan), zaman% 50 (başlangıcı ve msn'de, azami amplitüd% 50 karşılık mahsup arasındaki süre).
    1. Çizip Hill denklemi kullanarak bir doz yanıt eğrisi ayarı, farklı konsantrasyonda (maksimum amplitüd ulaştı) tepe iletim akımları kullanılarak: I = Imax / (1 ​​+ (K 02/01 / C) n-i) tepe akımını temsil eder, , maksimum cevabın yarısı erişildiği K1 / 2 konsantrasyonu, C odorant konsantrasyonu ve n Hill katsayısı doyurarak konsantrasyonlarda maksimum cevap IMAX.
  2. Maksimum depolarizasyon için geçerli kelepçe tota membran potansiyeli kayıtları analizl potansiyeli (mVsec eğrinin altında kalan alan) ortaya çıkardı; 30 sn 1 dk kayıtları üzerinde rekor spontan spike aktivitesi; akımlar (5-10 pA) enjeksiyonu ile ortaya sivri aracılığıyla kayıt heyecanlanma.

Sonuçlar

Bu protokolün sonuç diseksiyon kalitesine bağlıdır. Bu diseksiyon adımlar kısa (en az 10 dk 15) ve (yani, epitel zarar görmemesi için) kesin olmalıdır. Şekil 1 ideal hazırlık farklı büyütme seviyelerinde nasıl göründüğünü göstermektedir. Parlak saha altında düşük büyütme (bu tür hücreleri desteklemek OSNs tokmakları gibi), farklı hücre tipleri ayırt (Şekil 1A) 'dir. En yüksek büyütme düzeyinde, genellikle 80X 160x, aydınlık alanda...

Tartışmalar

doğru, sağlıklı OSNs özelliklerini izlemek için bu protokolün yeteneği hazırlık kalitesine büyük ölçüde bağlıdır. Bu nedenle, diseksiyon adımlar önemlidir. Önce kalite (pH, osmolarite), oksijenasyon ve sıcaklık (buz-soğuk ama dondurulmuş değil) diseksiyon orta dikkat etmek önemlidir. İkincisi, diseksiyon araçları ile epitel manipülasyon olarak zarar görmemesi için mümkün olduğunca sınırlı olmalıdır. Son olarak, mümkün olduğunca büyük OSN popülasyonu erişmek amacıyla, müm...

Açıklamalar

The authors declare that they have no competing financial interest.

Teşekkürler

Authors would like to thank Peter Mombaerts for the generous gift of OR-GFP mice; Anne Lefranc and the CSGA animal facility for excellent animal care. Funding was provided by CNRS through an ATIP and ATIP Plus grants, by Conseil Régional de Bourgogne (FABER and PARI grants), by Université de Bourgogne (BQR program).

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
vibration table with Faraday cageTMC63-500 SERIESrequired : isolates the recording system from vibrations induced by the environment (movements of experimenter, vibrations of equipment such as fans for cooling computers, etc); can also be purchased with a Faraday cage, or equipped by a custom made Faraday cage; this cage is recommended to avoid electric noise from the environment
optics
microscopeOlympusBX51WIupright microcope equipped with epifluorescence; fixed or moving stage depending on the user's preference
objectivesOlympusLUMPLFL40XWat least 2 objectives required: a 4X or 10X for coarse approach to the cell; and a 40X immersion long distance example Olympus LUMPLFL40XW / IR /0,8 / WD:3.3 MM
magnifierOlympusU-TVCACABSOLUTELY REQUIRED: placed in the light path between the objective and the camera; allows to magnify the image on the screen in order to reach precisely the knob with the recording electrode
cameraOlympusDP72a good camera is required to see the neurons in fluorescence as well as in bright field; the controlling software is simple and allows to take pictures and do live camera image to monitor the approach of the electrode to the cell. An ultrasensitive camera is not necessary
filtersOlympus/Chromadepending on the fluorescent protein used in the mice; example for GFP: excitation : BP460-490: emission: HQ530/50m
amplifierHEKAEPC10 USBmonitors the currents flowing through the recording electrode and also controls the puffing by sending a TTL signal to the spritzer; the EPC10 setup is controled by computer
softwareHEKAPatchmastercontrols the amplifier during the experiment
micromanipulatorSutterMP225precision micromanipulator, allows precise movements down to 1/10th of a micrometer; this model is very stable; avoid hydraulic manipulators that may drift
electrode pullerSutterP97with a FT345-B wide trough filament;  to prepare recording pipets of about 2µm diameter with a long tip to reach the cells; the resistance should be 15 to 20Mohm with perforated patch clamp solution
glassSutterBF120-69-10in our recording conditions, this glass is ideal for recording pipets
recording chamberWarner InstrumentsRC-26Ga chamber is needed to set the preparation under the microscope. To maintain the preparation in the center of the chamber, a net/anchor should be used.
stimulation
glassWPITW100F-4attached in groups of 7, these pipettes are used to prepare prepulled stimulating pipettes
multibarrel pullerMDIPMP-107-Zby association of pull and twist, this puller allows us to prepare puffing electrodes with 7 barrels
precision pressure injector Toohey CompanyP/N T25-1-900 Single Channel   this precision pressure injector  controls the pressure ejected in the multibarrel puller; it is controlled manually or by the amplifier by a 5V  TTLs
micromanipulatorNarishigeYOU-1a coarse manipulator is enough to bring the puffing electrode close to the recording site
tubingsN/Atygon tubing to bring the pressure from the puffer to the puffing pipette
solutions/perfusion/chemicals
vacuum pumpgardner denver300 seriesa vibrating membrane pump is more quiet and efficient than other types of pumps
perfusion systemN/AN/Agravity perfusion system with polyethlylen tubing to bring in and out the external solution from the recording chamber
nystatinSigma-AldrichN3503mandatory to perpare internal solution for perforated patch clamp
DIMETHYL SULFOXIDESigma-AldrichD5879used to disolve nystatin for internal solution for perforated patch 
Sodium chlorideSigma-AldrichS9625extracellular solution
Potassium chlorideSigma-AldrichP4504intracellular/extracellular solution
Calcium chloride dihydrateSigma-AldrichC7902extracellular solution
Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2PO4)Sigma-AldrichS9638extracellular solution
Magnesium sulfate heptahydrate (MgSO4 7H2O)Sigma-Aldrich63140extracellular solution
GlucoseSigma-AldrichG8270extracellular solution
Sodium bicarbonateSigma-AldrichS6297extracellular solution
EGTA (Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N′,N′-tetraacetic acid)Sigma-AldrichE3889internal solution
Potassium hydroxydeSigma-AldrichP1767internal solution
Methyl SulfoxideSigma-AldrichW387509intracellular solution
Hepes-NaSigma-AldrichH7006intracellular solution
SucroseSigma-AldrichS0389intracellular solution

Referanslar

  1. Lowe, G., Gold, G. H. Nonlinear amplification by calcium-dependent chloride channels in olfactory receptor cells. Nature. 366 (6452), 283-286 (1993).
  2. Ponissery Saidu, S., Dibattista, M., Matthews, H. R. Odorant-induced responses recorded from olfactory receptor neurons using the suction pipette technique. J Vis Exp. (62), e3862 (2012).
  3. Moss, R. L., et al. Electrophysiological and biochemical responses of mouse vomeronasal receptor cells to urine-derived compounds: possible mechanism of action. Chem Senses. 23 (4), 483-489 (1998).
  4. Kaur, A., Dey, S. Live cell calcium imaging of dissociated vomeronasal neurons. Methods Mol Biol. 1068, 189-200 (2013).
  5. Ma, M., Chen, W. R. Electrophysiological characterization of rat and mouse olfactory receptor neurons from an intact epithelial preparation. J Neurosci Methods. 92 (1-2), 31-40 (1999).
  6. Axel, R. A novel multigene family may encode odorant receptors: a molecular basis for odor recognition. Cell. 65 (1), 175-187 (1991).
  7. Bozza, T., Feinstein, P., Zheng, C. Odorant receptor expression defines functional units in the mouse olfactory system. J Neurosci. 22 (8), 3033-3043 (2002).
  8. Bozza, T., et al. Mapping of class I and class II odorant receptors to glomerular domains by two distinct types of olfactory sensory neurons in the mouse. Neuron. 61 (2), 220-233 (2009).
  9. Vassalli, A., Rothman, A., Feinstein, P., Zapotocky, M. Minigenes impart odorant receptor-specific axon guidance in the olfactory bulb. Neuron. 35 (4), 681-696 (2002).
  10. Feinstein, P., Bozza, T., Rodriguez, I., Vassalli, A. Axon guidance of mouse olfactory sensory neurons by odorant receptors and the beta2 adrenergic receptor. Cell. 117 (6), 833-846 (2004).
  11. Mombaerts, P. Genes and ligands for odorant, vomeronasal and taste receptors. Nat Rev Neurosci. 5 (4), 263-278 (2004).
  12. Grosmaitre, X., et al. SR1, a mouse odorant receptor with an unusually broad response profile. J Neurosci. 29 (46), 14545-14552 (2009).
  13. Grosmaitre, X., Vassalli, A., Mombaerts, P., Shepherd, G. M. Odorant responses of olfactory sensory neurons expressing the odorant receptor MOR23: a patch clamp analysis in gene-targeted mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (6), 1970-1975 (2006).
  14. Lam, R. S. Odorant responsiveness of embryonic mouse olfactory sensory neurons expressing the odorant receptors S1 or MOR23. Eur J Neurosci. 38 (2), 2210-2217 (2013).
  15. Zhang, J., Huang, G., Dewan, A., Feinstein, P. Uncoupling stimulus specificity and glomerular position in the mouse olfactory system. Mol Cell Neurosci. 51 (3-4), 79-88 (2012).
  16. Zhang, J., Pacifico, R., Cawley, D., Feinstein, P. Ultrasensitive detection of amines by a trace amine-associated receptor. J Neurosci. 33 (7), 3228-3239 (2013).
  17. Lee, A. C., Tian, H., Grosmaitre, X. Expression patterns of odorant receptors and response properties of olfactory sensory neurons in aged mice. Chem Senses. 34 (8), 695-703 (2009).
  18. Cadiou, H., et al. Postnatal odorant exposure induces peripheral olfactory plasticity at the cellular level. J Neurosci. 34 (14), 4857-4870 (2014).
  19. Mombaerts, P. Axonal wiring in the mouse olfactory system. Annu Rev Cell Dev Biol. 22, 713-737 (2006).
  20. Grosmaitre, X., Santarelli, L. C., Tan, J., Luo, M. Dual functions of mammalian olfactory sensory neurons as odor detectors and mechanical sensors. Nat Neurosci. 10 (3), 348-354 (2007).
  21. Duchamp-Viret, P., Chaput, M. A. Odor response properties of rat olfactory receptor neurons. Science. 284 (5423), 2171-2174 (1999).
  22. Heydel, J. M., et al. Odorant-binding proteins and xenobiotic metabolizing enzymes: implications in olfactory perireceptor events. Anat Rec (Hoboken). 296 (9), 1333-1345 (2013).
  23. Pelosi, P. Perireceptor events in olfaction). J Neurobiol. 30 (1), 3-19 (1996).
  24. Spehr, M., Wetzel, C. H., Hatt, H. 3-phosphoinositides modulate cyclic nucleotide signaling in olfactory receptor neurons. Neuron. 33, 731-739 (2002).
  25. Chen, S., Lane, A. P., Bock, R., Leinders-Zufall, T. Blocking adenylyl cyclase inhibits olfactory generator currents induced by 'IP(3)-odors. J Neurophysiol. 84 (1), 575-580 (2000).
  26. Savigner, A., et al. Modulation of spontaneous and odorant-evoked activity of rat olfactory sensory neurons by two anorectic peptides, insulin and leptin. J Neurophysiol. 101 (6), 2898-2906 (2009).
  27. Ukhanov, K., Brunert, D., Corey, E. A. Phosphoinositide 3-kinase-dependent antagonism in mammalian olfactory receptor neurons. J Neurosci. 31 (1), 273-280 (2011).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

N robilimSay 101N robilimelektrofizyolojidelikli patch kelep ekoku duyu n ronlargen hedefli fareiletimifarmakoloji

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır