İlaç test için bir sulu iki-fazlı bir sistem ile Cancer Celi sferoitlerin Robotik üretimi

Özet

A protocol for robotic printing of cancer cell spheroids in a high throughput 96-well plate format using an aqueous two-phase system is presented.

Özet

Cancer cell spheroids present a relevant in vitro model of avascular tumors for anti-cancer drug testing applications. A detailed protocol for producing both mono-culture and co-culture spheroids in a high throughput 96-well plate format is described in this work. This approach utilizes an aqueous two-phase system to confine cells into a drop of the denser aqueous phase immersed within the second aqueous phase. The drop rests on the well surface and keeps cells in close proximity to form a single spheroid. This technology has been adapted to a robotic liquid handler to produce size-controlled spheroids and expedite the process of spheroid production for compound screening applications. Spheroids treated with a clinically-used drug show reduced cell viability with increase in the drug dose. The use of a standard micro-well plate for spheroid generation makes it straightforward to analyze viability of cancer cells of drug-treated spheroids with a micro-plate reader. This technology is straightforward to implement both robotically and with other liquid handling tools such as manual pipettes.

Giriş

Hücre bazlı analizler geliştirme ve yeni bir anti-kanser ilaçların bulunması için önemli bir araç sağlar. ^1,2 Tarihsel, kanser hücrelerinin tek tabakalı kültürleri kanser hücrelerinin belirli türlerine karşı aday bileşiklerinin etkinliğini araştırmak üzere istihdam edilmiştir. standart kültür plakaları içinde tek tabakalı kültürler bakım kolaylığı, reaktifler ilave edildikten ticari robotik araçlar ile standart levha uyumluluğu ve kimyasal bileşikler hücresel tepkilerin alt analizi için tarama ekipmanı ile 2D Kültürlerin çekici bir araç kılan en önemli yararlar uyuşturucu testi için. ³ yazık ki, tek tabakalı hücre deneyleri genellikle ilaç geliştirme ve keşif son derece pahalı verme süreci, in vivo bileşiklerin etkinliğini tahmin etmek başarısız. ^4,5 ilaç şirketleri ve akademik birimler, sadece ~% 1 önemli yatırım ve çaba rağmen Kanser karşıtı klinik çalışmalarda ilaç onaylanmıştırSon yirmi yıl içinde FDA tarafından. 2B kültürleri ve in vivo olarak kanser hücrelerinin, karmaşık 3 ortamı arasında ⁶ eşitsizlik tek tabakalı kültürü sistemlerinin önemli bir eksikliktir. ⁷ Bu nedenle, ortamda tümör hücrelerine karşı Aday bileşiklerin tarama daha yakından benzemektedir 3D tümör çevre roman kemoterapi ilaçlarının gelişimini hızlandırmak olabilir. ⁸

Kanser hücresi sferoidler, in vitro olarak ilgili bir 3D tümör modeli sunar. ^9,10 olan sferoitler hususiyetlerini yapışmayan yüzeylerde ya da dönen bir şişede, sıvı kaplama, mikrofabrike mikro gibi teknikler kullanılarak süspansiyon içinde kanser hücrelerinin kendiliğinden ya da neden olduğu bir montaj ile oluşturan yoğun kümeleri . diziler, mikroakışkanlar ve asılı damla de ^11-16 sferoitler geometri ve merkezi bölgeye oksijen, besin ve ilaç bileşiklerinin sınırlı ulaşım dahil olmak üzere katı tümörlerin temel özelliklerini taklit; dolayısıyla, onlar daha yakından uyuşturucu yanıtlayanların yenidentek tabakalı kültürleri ile karşılaştırıldığında katı tümörlerin bir bileşiğe dönüştürülebilir. Bu belirgin yarar rağmen ^17-19 sferoidler rutin kanser hücrelerine karşı kimyasal bileşiklerin taranması için kullanılmamaktadır. Piyasada mevcut robotik ve tarama / görüntüleme araçları ile uyumlu bir standart yüksek kapasiteli ortamda üniforma ölçekli spheroidler üreten Zorluk ilaç geliştirme boru hattına sfero kültürünün birleşmesini engellemektedir. Özel malzemeler ve plakalar son zamanlarda bu ihtiyacı gidermek için piyasada mevcut hale gelmiştir rağmen, maliyet düşünceler onların yaygın kullanımını engellemek.

Yeni asılı damla platformu ve mikrofabrike mikro-kuyuları kullanmak yüksek verimlilik tutarlı ölçekli spheroidler üretme yeteneği ile iki önemli teknikler. ^13,16,20 Ancak, her iki yaklaşım özel plakaları ve imal pahalı ve uç nokta kullanıcılar için sakıncalı olan cihazlar gerektirir temel araştırma merkezleri ve ilaç sanayi, en büyük ef içindeyeni anti-kanser ilaç keşfi için kale yapılır. Damla plakaları asılı bir son tasarımı ile hücre içeren damla istikrar bazı iyileşmelere rağmen, plakanın sadece her delik hala damla yayılması / birleştirilmesi önlemek için kültür sırasında kullanılır. ¹⁶ Bu önemli ölçüde deneysel verim azalır. İlaç ilave ve yenileme kılavuzuna veya robotik pipetle zor ve bu plaka konfigürasyonu gibi plaka okuyucu gibi geleneksel tarama donanımları ile kolayca uyumlu olmadığı için sferoidler biyokimyasal analiz için standart bir plaka aktarılır gerekir. ²¹ Mikro-kuyuları da yumuşak litografi kullanarak imal Kontrollü boyutu sfero üretimine izin. ^13,20 Ancak, standart pipet araçları ile bu platformun uyumsuzluk tek bir tedavi durumu tüm sferoitleri açığa farklı ilaç bileşikleri / konsantrasyonları ile bireysel küremsi tedavi önler. Bu nedenle, bu yöntem için uygun değildirçok sayıda bileşik / konsantrasyonları aynı anda test gerektirir akış bileşik taraması.

Bu engellerin üstesinden gelmek için, standart 96 oyuklu plakalar içinde sürekli boyutlu kanser hücresi sferoitlerin yüksek verimli üretimi için yeni bir teknik geliştirilmiştir. ^22,23 yaklaşım polietilen glikol ile bir polimer sulu bir, iki fazlı bir sistem (ATPS) (dayanır faz oluşturucu polimerler PEG) ve dekstran (Dex). ²⁴ ATPSs son hücre micropatterning sağlamak için yeni bir hücre, biyolojik bir dizi uygulamada kullanılabilir ve son derece sulu ortam içinde hücrelerin biyolojik tepkin maddelerin sağlanmasını lokalize edilmiştir. ^25-32 bir oluşturmak küremsi, kanser hücreleri, sulu deksmedetomidin faz ve elde edilen süspansiyon bir alt mikrolitre damla karıştırılır iyi olarak ihtiva eden daldırma sulu PEG faz çözeltisi içine pipetlenir. damlası sfero oluşumunu kolaylaştırmak için daldırma aşaması sınırladığını hücrelerden karışmayan kalır. İthortantly yüksek sulu daldırma aşaması sfero hücrelerine besin sağlar ve ortam osmolalitesinin değişiklikler ve ilaç konsantrasyonlarının dalgalanmalara neden olur başka deneyler için ortak ortam buharlaştırma ile bilinen bir sorun en aza indirir. Bu teknik, küremsi üretim ve yalnızca standart 96 oyuklu plakalar içinde ticari olarak temin edilebilen reaktifler ve pipetleme araçlarını kullanarak ilaç tedavisi sağlar. Önemli bir şekilde, küremsilerin hücresel tepkilerin analizi standart biyokimyasal tahlilleri ve plaka okuyucu kullanarak aynı plakada gerçekleştirilir. Robotik sıvı taşıma yaklaşım ATP ve adaptasyon ile çalışma kolaylığı mono-kültür ve ko-kültür hem de yüksek verim nesil basit bir laboratuar tekniği sferoitlerin yapar. Bu yeni yaklaşım, geliştirilmiş test hacmi ve test bileşiklerin ve Redu artan sayıda maliyet-etkililik (ilaç geliştirme ve keşif süreçlerine kanser hücresi sferoitlerin entegrasyonu yönünde atılmış büyük bir adım olacakCED reaktif tüketimi) ve verimlilik (zaman eller azaltıcı).

ATPS yaklaşım kullanılarak 96 oyuklu plakalar içinde kanser hücresi sferoitlerin robot üretimi için ayrıntılı bir protokol, aşağıda tarif edilmiştir. Buna ek olarak, sonuçta elde edilen sferoitlerin ve ticari bir biyokimyasal analizi kullanılarak hücresel tepkilerin alt analizi ilaç tedavisi ayrıntıları sunulmaktadır.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Polimer sulu iki fazlı bir sistem 1. Hazırlama (ATPS)

1. Polietilen glikol (PEG) (MW 35,000) ve 0.5 g tartılır ve sulu faz, PEG (w / v)% 5, 10 ml hazırlamak için, steril bir 15 ml konik tam büyüme ortamı 9,5 ml ekleyin.
   Not: İlk polimer ekleyerek ve ardından konik orta yarısını eklenmesi sonra orta kalan miktarı konik duvarlara polimerin yapışmasını en aza indirir ve polimer daha hızlı çözülür yardımcı olur.
2. Dekstran (Dex) ve 0.128 g (MW 500,000) tartılır ve% 12.8 (w / v) sulu bir DEX faz 1 ml hazırlamak için, steril bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içinde tam büyüme ortamı 0.872 ml ekleyin.
3. Yaklaşık 1 dakika vorteksleyin, her iki çözelti ortam içinde polimerlerin çözünmesi için.
4. Bir çözünme ve karışımın homojen bir karışım sağlamak için 1 saat boyunca 37 ° C'de bir su banyosu içinde, her iki çözüm tutun. Banyosundan çözümler bulaşma olasılığını önlemek için su seviyesinin üzerinde kapaklarını tutmaksu.
5. Steril, plastik şırıngaya PEG fazlı bir çözelti yükleyin ve yabancı maddelerin çıkarılması için 0.2 mikron gözenek boyutunda bir şırınga filtresinden geçirilir.
   Yavaş yavaş filtre ile çözüm itmek, PEG çözeltisi ile şırınga doldurun bir konik tüpün üst ve kuvvet kullanarak filtre ekleme yerleştirin: Not. Bu enjektör pistonunun hareketine karşı direnç olması normaldir. Çözeltisinin bir kısmının filtre kalır, ancak polimer konsantrasyonu değişmez olarak polimer çözeltisinin küçük kaybı oluşur.
6. Pipet 10 DEX faz çözeltisi ul ve ayrı bir tüp içinde ortamdan 10 ul seyreltilmesi% 6.4 (ağırlık / hacim) deksmedetomidin fazlı bir çözelti ile sonuçlandırılabilir. Aspire 100, PEG faz çözeltisi ul bir Petri çanağı içine dağıtın.
   1. PEG faz çözeltisi içine deksmedetomidin faz çözeltisi (ağırlık / hacim)% 6.4, 0.5 ul koyun. Görme mikroskop altında DEX damla gözlemleyerek başarılı ATPS oluşumunu onaylayın. damla sınıriki sabit, ayrı sulu fazın varlığına işaret eden görülebilir kalmalıdır.
7. Kullanana kadar 4 ° C stok sulu PEG ve DEX faz çözümleri saklayın.
   Not: Polimer solüsyonları, önceki her bir deney için taze olarak hazırlanmıştır ve depolama, 24 saat içinde kullanılması önerilmektedir.

Baskı Kanseri Hücre küremsilerin 2. Hazırlık

1. % 90 -100% konfluent tek tabaka için de (örneğin, MDA-MB-157 göğüs kanseri hücre) kanser hücrelerinin büyütün. MDA-MB-157 hücreleri için, DMEM,% 10 FBS,% 1 glutamin ve% 1 antibiyotik içeren oluşan bir ortamı kullanmaktadır.
   1. (Üreticinin protokolüne göre) ve 15 ml konik bir süspansiyon yük hücre ayırma tamponu kullanılarak hasat hücreleri. , 173.3 x g'de 5 dakika için santrifüj süpernatant kaldırmak ve tekrar süspansiyon hücreleri tam büyüme ortamı, 1 ml.
2. Yük hücreleri bir hemositometrede üzerine ve onları saymak gerekli sayısını hesaplamak içinistenen bir küremsi hücre yoğunluğu için hücre. T75 şişesi içinde yetiştirilen, MDA-MB-157 hücrelerinin konfluent tek tabaka genellikle ~ 7 x 10 ⁶ hücre sağlar.
   Not:. 1.5 x 10 ⁴ veya MDA-MB-157 hücreleri için daha büyük bir damla hacmi için gerekli hücre yoğunluğu, bir tek küremsi hücre tipine bağlı olacaktır oluşturmak için örneğin ^22, bir yoğunluk için 0.3 ul deksmedetomidin faz damla başına önerilir Tek bir sfero oluşumunu sağlamak.
3. 173.3 x g'de 5 dakika boyunca ikinci bir kez santrifüj hücreleri ve arzu edilen bir hücre yoğunluğuna kadar süspansiyon konsantre büyüme ortamı, uygun hacimde bunları yeniden süspanse edin.
   Not: 7 x 10 ⁶ kanser hücreleri hasat edilmiştir, örneğin, bir 0.3 ul deksmedetomidin faz damla 1.5 x 10 ⁴ hücre yoğunluğunun bir küremsi oluşturulması için gerekli olan hücre süspansiyonu, toplam hacmi 140 | il olacaktır. Bununla birlikte bağlı bir sonraki aşamada deksmedetomidin faz çözeltisi ile seyreltme ile, sadece hücreler tekrar süspansiyon hücre kültür ortamı, 70 ul kullanın.
4. % 12.8 eşit bir miktarda (w / v) sulu bir DEX fazlı çözelti 1.2 hazırlanan elde edilen hücre süspansiyonu ekleyin. 1.5 x 10 ⁴ hücre yoğunluğu sfero Örneğin, deksmedetomidin fazlı bir çözelti, 70 ul hücre süspansiyonu, 70 ul ilave edilir.
5. İyice hücreleri ve deksmedetomidin çözeltisi karıştırma homojen dağılımını sağlamak için bir hücre süspansiyonu karıştırılır. Pipetleme yukarı ve aşağı kabarcık oluşmasmı önlemek üzere yavaşça yapılması gerekmektedir.

Eş-kültür küremsi Baskı için 3. Hazırlık

1. Büyüme kanser hücreleri (örneğin, MDA-MB-157 insan meme kanseri hücreleri) ve 90% -100% konfluent tek tabaka destek hücreler (örneğin, insan fibroblastları). (Üreticinin protokolüne göre) bir hücre ayırma tamponu kullanılarak, her hücre türü hasat edilir.
   1. Her konik 5 173.3 xg'de dakika ve aspire süpernatant onları santrifüj, 15 ml konik içine her süspansiyon yükleyin. Tam g, 1 ml her bir konik hücreleri tekrarrowth ortamı.
      Not: Calcein AM (canlı hücre lekesiz) ve nükleer boya (Hoechst) gibi floresan boyalar iki hücre tipleri ayırt etmek için kullanılabilir.
2. Bir hemasitometre üzerinde ayrı ayrı hücre tipi yükleyin ve ko-kültür sferoitler hücreleri desteklemek için kanser hücrelerinin arzu edilen bir oran için, her hücre türü için gerekli sayısını hesaplamak için say. T75 şişeleri içinde yetiştirilen Konfluent, MDA-MB-157 hücrelerinin tek tabakaları ve fibroblast genellikle, sırası ile, yaklaşık 7 x 10 ⁶ ve ~ 6 x 10 ⁶ hücreleri vermek.
3. Iki hücre türünün sayısının istenilen oranı verecek şekilde kanser hücreleri süspansiyonuna hücrelerdeki durdurulması- doğru hacim. Örneğin, 1 fibroblast hücre 50 kanser hücreleri oranı kullanılır.
4. Santrifüj, uygun bir hacim içinde 173.3 xg ve tekrar süspansiyon hücreleri, 5 dakika boyunca karıştırılmış bir hücre süspansiyonu ihtiva eden konik sulu deksmedetomidin (w / v) eşit bir büyüme ortamı hacmi ve% 12.8 içeren son yoğunluğuna sonuçlandığı(1.2 hazırlandı) fazlı çözelti.
5. Yavaşça süspansiyon homojenliği sağlamak için yukarı ve aşağı ortaya çıkan hücre süspansiyonu pipetle.

96 oyuklu bir plaka içerisine Tümör sferoitlerin 4. Baskı

1. Bir gün önce deneyler için,% 1 kat muamele edilmemiş, yuvarlak dipli 96 oyuklu plakalar, 24 saat boyunca 37 ° C 'de (w / v) Pluronik. Bu kaplama, kültür süresi boyunca, hücre yapışmasını önler.
2. Süzüldü% 5, 50 ul koyun 96 oyuklu bir plaka (hedef plaka) her bir oyuğuna, sulu PEG faz (a / h).
3. Bir pipet kullanarak, hücre süspansiyonu karışımı (aşama 2 veya sırasıyla mono ve ko-kültür, Aşama 3'te hazırlanan) ve 384 oyuklu plakanın bir kolonu (kaynak plaka) ile ilgili de her süspansiyonun 20 ul .
4. Sıvı işleyici ve "ev" koordinatlarını kaydetmek için pipet kafa açın. Ardından laboratuar aletlerinin sağlamak için (4.6 aşağıda) önceden tanımlanmış protokol derlemek ve parametreleri doğru tanımlanırly. Bu "güdümlü" bir adım, farklı sıvı işleyicileri için farklı olabilir.
   Not: protokol akışı, adım-adım aşağıda 4.6 olarak, ne olursa olsun kullanılan robotik sıvı işleyici benzer olacaktır gösterilmiştir; Ancak, programlama arayüzü sayesinde farklı yazılım kullanımı farklı görünebilir.
5. Şekil 1'de gösterildiği gibi sıvı işleyici iş istasyonunda belirlenen pozisyonlarda kaynak plaka, plaka hedef ve pipet ucu kutuları yerleştirin.
6. Aşağıdaki adımları içeren protokolü yürütün:
   1. Yük istasyonunda (Şekil 1) den pipet uçları (8 ipuçları) karıştırma sıvı işleyici pipet kafasından varil bir sütun.
   2. Kaynak plaka (Şekil 1), oyuklarında hücre süspansiyonu karıştırılır. Kabarcık oluşumunu önlemek için kuyular hücre süspansiyonu hacmi daha küçük bir karıştırma birimi seçin.
   3. Boş bir atık ipuçları kutusu (Şekil 1) içine ipuçlarını çıkarın.
   4. Yük 10 ul dağıtım pipet uçları ile pipet kafasından varil bir sütun (Şekil 1).
   5. Her bir kaynağı havalandır pipet içine kaynak plaka hücre süspansiyonunun 0.3 ul (Şekil 1).
   6. Hedef plakanın bir kolonu (şekil 1) ve kuyu içine bir hücre süspansiyonu koyun. 0.5 mm'lik bir dağıtıcı yüksekliği ve 1'den küçük ul / sn bir dağıtıcı akış hızı kullanın.
   7. Tüm hedef plakasına kolon-by-kolonu baskı tamamlanana kadar tekrarlayın 4.6.6 ile 4.6.1 adımları.
7. Dikkatle iş istasyonu yüzeyinden hedef plaka kaldırmak ve CO ₂ 37 ° C'de nemli inkübatör yerleştirin ve% 5. Hücreleri içeren DEX faz damlalarının bozmamak için kuvöz içine taşırken plaka yatay koruyun.
8. Deksmedetomidin faz damla içinde bir küremsi, hücrelerin toplanmasını sağlamak için 24 saat boyunca plaka inkübe edin.

5. Cancer Celi sferoitlerin İlaç Tedavisi

Aşağıdaki protokol 4 gün ilaç tedavisi ve diğer tedavi dönemleri için modifiye edilebilir günden sonra 2. taze ilaç ile bir yenileme içerdiğini unutmayın.

1. Görsel olarak, 24 saat sonra, 96 gözlü plakalar içinde küremsi oluşumu teyit edilmiştir. Her sfero küçük ve en büyük çap ortalamasını alarak küremsilerin boyutunun ölçülmesi için görüntü kuyu Gerekirse.
2. Önceden tespit edilmiş bir çözünürlük konsantrasyonda üretici tarafından tavsiye edilen bir solvent içinde eritilmesi ile arzu edilen bir ilacın stok çözelti hazırlayın. Örneğin, mi, 2 mg / su içinde sisplatin çözülür.
   Not: İlaç ışığa duyarlı ise ışıktan ilacın stok solüsyonu koruyun.
3. Seri seyreltme tekniği kullanarak, önceki aşamada hazırlanmış olan stok çözeltisinden hücre kültür ortamı ile sulandırılmış ilaç konsantrasyonları hazırlamak. Her bir seyreltme iki kez, istenen konsantrasyon yapılmalıdır. DilKatkı oranları başlangıç ​​stok konsantrasyonuna bağlı olarak değişir ve çalışma konsantrasyonlarını arzu edecektir.
4. Her bir oyuğa, önceki aşamada hazırlanan ilaç solüsyonu 50 ul ekle. Bu robot veya manuel pipetleme yapılabilir.
   Not: her bir ilaç konsantrasyonu, her yuva içinde daha önce 50 ul sulu bir PEG faz ile istenen konsantrasyona devre seyreltilir.
   1. Her bir konsantrasyon için, 96-çukurlu bir tablaya (n = 16) iki adet sütun sferoidler kullanın.
   2. Kontrol kuyuları olarak, sulu bir PEG fazın mevcut 50 ul taze kültür ortamı 50 ul ekle.
5. Işıksız bir ortamda 37 ° C'de 48 saat% 5 _CO2 için ilaç ile sferoidler inkübe edin.
6. Inkübasyondan 48 saat sonra, arzu edilen konsantrasyonlarda ilacın taze dilüsyonları hazırlanması ve her bir oyuğa taze ilaç çözeltisinin 50 ul ekleyerek ilaç yeniler.
   Not: kuyular zaten ilk ilaç t istenen ilaç konsantrasyonu içerirreatment. Seyreltme ortaya çıkar çünkü Bu nedenle, bu yenileme evresinde, her bir konsantrasyonu, arzu edilen bir konsantrasyonda hazırlanır.
7. Işıksız bir ortamda 37 ° C'de başka bir 48 saat süre ile ilaç ve% 5 _CO2 ile sferoidler inkübe edin.

6. küresellerde hücresel viabileteyi analizi

1. Yenilenen ilaç (örneğin, bir ilaç ile küremsilerin toplam tedavi süresi 4 gün) ile inkübasyondan ve 48 saat sonra iyi kılavuzlarını pipetleme ile bir ortamın toplam hacmini ölçün.
   Not: Bir kuyuda tipik hacmi 140 ul (küçük bir düşüş buharlaşma nedeniyle oluşur) ~ olduğunu.
2. Toplam oyuk hacmi içinde% 10 konsantrasyonda hücre canlılığı reaktifi (örneğin, PrestoBlue) hacminin hesaplayın. Her bir oyuğa Hücre canlılığı reaktifi bu hacim.
   Not: iyi olarak 140 ul olan bir ortam hacmi ile, 15.6 ul bir hacim de, toplam% 10'luk bir konsantrasyon vermek için gereklidir. Bu hesaplanır9 (140 ul / 9 = 15.6 ul) mevcut medya hacmine bölünmesi.
3. Işıksız bir ortamda 37 ° C 'de 6 saat süre ile her bir göze ilave hücre canlılığı maddesi ile plaka inkübe edin.
4. Bir mikro-plaka okuyucusu içinde plakayı ve sırasıyla 560 nm ve 590 nm'lik eksitasyon ve emisyon dalga boyunda floresan sinyalini okur.
5. Aynı muamele şartlarından değerlerinin ortalaması sonra kontrol kuyularının edilene işlenmiş olan gözeneklerden elde floresan sinyali normalize edilmesi ile küremsi hücrelerin yüzde canlılığı hesaplayın.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Robotik sıvı işleyici iş istasyonu. Şekil 1'de gösterildiği pipetleme baş ve bölüm 4.6 sferoidlerinin robotik baskıda kullanılan tüm istasyonlar etiketli edilir. Görüntü ucu kutuları için iki farklı istasyonda (bir karıştırma ipuçları grubu ve hücre süspansiyonu sulu deksmedetomidin faz karışımının / dağıtılmasını emilmesi için ikinci kümesinin) kullanımını göstermektedir. tüm kurulum kısırlık korumak için bir standart biyolojik güvenlik kabini içinde...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Sferoidler iyi tümör fizyolojisini ve ilaç etkinliğini anlamak ve anti-kanser ilaç keşfi için yararlı bir araç sağlamak için gerçekçi bir modeli sunuyoruz. Bu tür uygulamalar büyük ölçüde yalnızca standart laboratuar aletlerinin, sıvı taşıma araçları ve tarama ekipmanı gerektirmeyen basit sfero üretimi ve bakım teknikleri yararlanacak. sulu iki-fazlı sistemde açılan faz içinde kendiliğinden agrega kanser hücrelerinin kullanılması verimli üretim ve robotik sıvı işleyicilerle sfero...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagents and Consumables
Polyethylene glycol, MW: 35,000	Sigma-Aldrich	94646
Dextran, MW: 500,000	Pharmacosmos	5510 0500 9007
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)	Sigma-Aldrich	D6429
Fetal Bovine Serum	Sigma-Aldrich	12306C
Glutamine	Life Technologies	35050-061
Antibiotic	Life Technologies	15240-062
Clacein AM	Life Technologies	C3100MP
Hoechst	Life Technologies	33342
Cisplatin	Spectrum Chemicals	15663-27-1
PrestoBlue	Life Technologies	A-13261
Pluronic F-108	Sigma Aldrich	542342
Disposable Tips (10 µl)	Fluotics	C-P10V11.ST
Disposable Tips (70 µl)	Fluotics	C-P70V11.ST
Round-bottom 96-well plates	Nunc	268200
Equipment
Liquid Handler	Agilent Technologies	SRT Bravo
Microplate Reader	Biotek Instruments	Synergy H1M