Akış kaynaklı pulmoner hipertansiyon için bir Sıçan Modelinde Şant Cerrahisi, Sağ Kalp kateterizasyonu ve Damar Morfometri

Özet

This protocol describes a surgical procedure to create a model for flow-induced pulmonary arterial hypertension (PAH) in rats and the procedures to analyze the principle hemodynamic and histological end-points in this model.

Özet

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt (MCT+Flow). The shunt is created by inserting an 18-G needle from the abdominal aorta into the adjacent caval vein. Increased pulmonary flow has been demonstrated as an essential trigger for a severe form of PAH with distinct phases of disease progression, characterized by early medial hypertrophy followed by neointimal lesions and the progressive occlusion of the small pulmonary vessels. To measure the right heart and pulmonary hemodynamics in this model, right heart catheterization is performed by inserting a rigid cannula containing a flexible ball-tip catheter via the right jugular vein into the right ventricle. The catheter is then advanced into the main and the more distal pulmonary arteries. The histopathology of the pulmonary vasculature is assessed qualitatively, by scoring the pre- and intra-acinar vessels on the degree of muscularization and the presence of a neointima, and quantitatively, by measuring the wall thickness, the wall-lumen ratios, and the occlusion score.

Giriş

Bu yöntemin amacı, farelerde şiddetli akım kaynaklı pulmoner arteriyel hipertansiyon için tekrarlanabilir bir model oluşturmak için ve prensip hemodinamik ve histopatolojik bitiş noktalarını ölçmektir.

Pulmoner arteriyel hipertansiyon (PAH), sağ ventrikül yetmezliği ve ölüme yol açan pulmoner vasküler dirençte ilerleyici artış kapsayan bir klinik sendromdur. Pulmoner hipertansif hastalıklar (PH) superordinate hastalık spektrumu içinde, PAH tam iyileşme ¹ olmadan kalır en ağır formu ve biridir. PAH altta yatan arteriopatidir damar lümeni tıkar vasküler yeniden tipik bir formu ile karakterizedir. Normal olmayan muskularize damarlar ve medial damar tabakasının hipertrofisi Muskularizasyon PAH erken hastalık fenomen olarak kabul edilmektedir, aynı zamanda PH ² diğer şekillerde görülür ve ³ geri dönüşümlü olduğu düşünülmektedir. PAH a olarakdvances, intimal tabaka sonunda karakteristik neointimal lezyonlar ² şekillendirme, pişmanlık başlar. Neointimal tipi pulmoner vasküler yeniden şekillenme PAH özeldir ve şu anda ⁴ geri dönüşümsüz olarak kabul edilir.

PAH nadir bir hastalık olduğu için, onun biyopatolojik anlama gelişmeler ve yeni tedavilerin geliştirilmesi hayvan modellerinde dayanmıştır var. Sıçanlarda monocrotalin (MCT) model olmuştur basit bir tek vuruş modeli ve hala sık kullanılır. MCT pulmoner arteriol ve bölgesel inflamasyon ⁵ yaralanmasına neden olan bir zehirdir. / Kg MCT 60 mg ortalama pulmoner arter basıncında (mPAP), pulmoner vasküler rezistans (PVR) bir artışa yol açar ve 3 sonrası sağ ventrikül hipertrofisi (SVH) - 4 hafta ^6. Histomorphology neointimal lezyonlar ⁵ olmadan izole medial hipertrofi ile karakterize edilir. MCTyaygın ikinci olarak sunulan rağmen sıçan modeli böylece ılımlı bir PH şeklini değil, PAH temsil eder.

Konjenital sol-sağ şant (PAH-KKH) ile bağlantılı PAH çocuklarda pulmoner kan akımı neointimal lezyonlar ^{7, 8, 9} gelişmesi için gerekli tetikleyicisi olarak kabul edilir arttı. Sıçanlarda, artan pulmoner kan akışı abdominal aorta ve vena kava, ilk olarak 1990 ^10'da tarif edilen bir teknik arasında bir şönt oluşturulması ile indüklenebilir. Artmış pulmoner akım oluşturmak için Alternatifler tek taraflı pnömonektomi veya pulmoner arter anastomoz ¹¹ subklavyan tarafından uygulanır. Bu modellerin kavramsal dezavantajları nedeniyle ya da pulmoner vasküler iyatrojenik yaralanma pnömonektomi tarafından uyarılan kalan akciğer ve adaptif yolu aktivasyonu potansiyel telafi büyümesi oluşurpulmoner arter anastomoz, hem artmış pulmoner kan akımının etkilerini karıştırıcı.

Bir aorta-kaval şant oluşturulur ve MCT ile tedavi edilen sıçanlarda ikinci vuruşu olarak uyarılan pulmoner kan akımını artar, karakteristik neointimal lezyonlar ortaya çıkar, ve artan sonra PAH ağır formu ve ilgili sağ ventrikül yetmezliği (RVF) 3 hafta geliştirmek ¹² akar. Bu modelde PAH hemodinamik ilerlemesi ekokardiyografi ve sağ kalp kateterizasyonu in vivo değerlendirilebilir. Sağ kalp yetmezliği için damar histomorphology, damar duvar kalınlığı, arterioler tıkanıklığının derecesi ve parametreler PAH ex vivo karakterizasyonu ayağı oluşturur.

Bu yöntem aorta-kaval şant (AC-şant) ameliyatı için ayrıntılı protokoller, sağ kalp kateterizasyonu ve damar histomorphology nitel ve nicel değerlendirmesini açıklar.

Protokol

Hayvan denekleri Prosedürleri Hayvan Deneyleri için Hollanda Merkez Komitesi ve Üniversite Tıp Merkezi Groningen Hayvan Bakım Komitesi (NL) tarafından onaylanmıştır. 180 ve 300 g arasında ağırlıkları iki Wistar ve Lewis sıçanları kullanılmıştır.

1. Konut ve Aklimatizasyon

1. kafes başına 5 gruplar halinde merkez hayvan tesis, ev sıçan geldikten sonra. 7 günlük bir iklimlendirme döneminde, insan kullanımdan sıçan alıştırmak, ancak herhangi bir deneysel prosedürler gerçekleştirmeyin.

2. Hazırlık Steril Monocrotalin enjeksiyonu

1. 60 mg / ml monocrotalin (MCT) solüsyonu 1 mL için, 2 ml bir tüp içinde monocrotalin 60 mg ağırlığında. % 0.9 NaCl 700 uL ekleyin. 1 M HCI, 200 uL ekleyin. Sıcak çalışan musluk suyu ve vorteks o altında tüp içinde çözüm ısıtın. 7.0 doğru pH'ı getirmek için 6 N NaOH kullanın. kemirgenler içine enjeksiyon için MCT hazırlanması için steril tekniği kullanın.
2. (300 g bir fare için 60 mg / ml MCT 0.3 mL) boyun kg deri altından her steril 60 mg / ml MCT çözeltisi 1 ml enjekte edilir. NOT: Bu yazıda enjekte doz uygun olmayacağını büyük şans daha küçük hacimli kullanmak için değil tercih ederim.

3. Aort-kaval Şant Cerrahisi

1. Anestezi.
   1. (Akış: / dak 1 L)% 5 izofluran /% 100 O ₂ ile indüksiyon odasına doldurun ve odasında sıçan yerleştirin. Bir arka ayak tutam yaparak anestezi yeterli derinlikte olup olmadığını kontrol edin. sıçan tartılır.
   2. Tıraş ve yaklaşık 8 cm uzunluğunda ve 3 cm genişliğinde bir alana karın temizleyin. steril bir mat kaplı bir ısı mat (37 ° C) sırtında sıçan yerleştirin.
   3. % 3 izofluran /% 100 O ₂ (: / dk 1 L akışı) - 2 ile solunum maskesi / kaputu burun yerleştirin. Bir arka ayak tutam yaparak anestezi derinliğini kontrol edin. anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için göz merhemi sürün.
2. şant Surgery.
   1. dezenfeksiyon için klorür-heksidinli cilt fırçalayın. kg buprenorfin subkutan post-operatif analjezi için 0.01 mg / enjekte edilir.
   2. Ameliyat için steril aletler kullanın. Bir sadece genital üstünde aşağı uzanan diyafram altında 1 cm başlayarak, orta hat karın bir 10. neşter bıçağı ile bir kesi yapmak.
   3. steril, ıslak gazlı bez (% 0.9 NaCl) içinde bağırsakları kapak, bir pamuklu çubukla bağırsak yukarı kaldırın ve hayvanın sol tarafına koyun.
   4. abdominal aorta ve çevre dokulara inferior vena kava takmak membranlar ayırmak için pamuklu çubuklarla kullanın.
      NOT: aort ve vena kava arasındaki membranlar incelemek etmeyin.
   5. splinter forseps kullanarak, sadece aort sağ tarafında ve tek iğne eklenecek sitede, sadece çatallanma üstünde perivasküler aort yağ çıkarmak.
   6. 2 mm supe gelen aort ve vena kava ayırmak için pamuklu çubuklarla kullanınİğne bir Biemer kelepçesi için alan yaratmak amacıyla eklenir siteye Rior.
   7. Bu alanda, ilk aort etrafında gevşek bir bitişik harfleri (5-0 dikiş) yerleştirin. Kesi (Şekil 1A) için Kocher üstün koyun sonra üzerine bir Kocher kelepçe koyarak dikilen gerginlik oluşturun ve. Biemer ligature (Figür e 1A) sadece üstün kelepçe yerleştirin.
   8. Bir pamuklu çubuk kullanarak, akış (Şekil 1A) engel olarak distale mümkün olduğunca vena kava sıkıştırmak. Bend dışında (Şekil 1A) doğru menfez işaret ile 45 derecelik bir açı içine iğne (Bu protokol 18 G).
   9. 90 derecelik bir açı ile, sol (Şekil 1A) iğne işaret deliği ile sadece çatallanma üzerinde aorta iğneyi. sola iğne ucu işleyin ve vena kava takın.
      NOT: İğne ucu şimdi olmalıdır visivena kava (Şekil 1B) ble.
   10. trombozu önlemek için ekleme siteden aort kalan kan itmek için ikinci bir pamuklu çubuk kullanın. tutkal yeterince sopa için sırayla bir steril gazlı bez ile şant çevresini kurutun.
   11. Aort dışarı tüm iğne çekin ve hemen aorta ponksiyon üzerine doku yapıştırıcısı bir damla uygulayın. dokuya pamuklu çubukla tutkal değil emin olun. aorta çözülme.
   12. çekerek ve şantın aort proksimalinde bitişik harfleri serbest elle şant doğrulayın. Gevşeme parlak kırmızı şant vena kava distalinden renk ve şönt yerinde türbülans oluşturmanız gerekir.
       NOT: Sıkma geri koyu kırmızı vena kava kan dönecek.
   13. geri hayvanda bağırsak yerleştirin. emilebilir 4-0 sütür ile kas tabakası ve cilt kapatın. Anestezi kurtarmak için% 100 O ₂ ile hayvan havalandırınız.
       NOT: Bir ani bırakmayınsternal yatma korumak için yeterli bilinci yerine kadar mal katılımsız.
3. Sham Cerrahi.
   1. Aort içine iğne sokulması haricinde yukarıdaki işlemlerin tümünü gerçekleştirebilir.
4. Ameliyat sonrası bakım.
   1. Tek bir kafes ve ertesi sabaha kadar 37 ° C'deki bir kuluçka makinesi içine sıçan yerleştirin.
   2. Ameliyat sonrası 6 saat civarında, post-operatif analjezi için kg buprenorfin subkutan / 0.01 mg enjekte edilir. Sıçan rahatsızlık belirtileri gösterir, eğer ertesi sabah tekrarlayın.
      Not: Ameliyattan sonraki ilk 3 gün sonra, sıçanlar (yemi ya da içme suyu ilaçlar ile karıştırılmaktadır, bu özellikle önemlidir) ve yemek az içki eğilimindedir. Çoğu sıçanlar 3 gün ameliyattan sonra normal davranışı göstermektedir. Değilse, yakından izleyin. 1 hafta içinde% 15 aşan Zayıflama, anormal olarak kabul edilir ve bu fareler anestezi altında iken kan hacminin ekstre ötenazi edilmelidir.

4. PAH Gelişimi

NOT: Bu protokol, hayvan anestezi altında iken dolaşan kan hacminin çıkarılması ile ötenazi.

1. Pulmoner kan akımının artırılması erken hücresel ve fonksiyonel yanıtları (örneğin, gen up-regülasyonu veya erken transkripsiyon faktörleri) için cerrahi (MF8) 1 gün sonra Kurban.
2. Bir erken evre PAH vasküler fenotip (neointimal lezyonlar olmadan medial hipertrofi) için cerrahi (MF14) 1 hafta sonra Kurban.
3. RVP ve mPAP hafif yükselti ile bir ileri evre PAH vasküler fenotip için cerrahi (MF21) (işaretli medial hipertrofi ve neointimal oluşumu) 2 hafta sonra Kurban.
4. RVP ve mPAP bir son dönem PAH vasküler fenotip için cerrahi (MF28) (işaretli neointimal tıkanıklığı) ve güçlü yükseklik 3 hafta sonra Kurban. sağ ventrikül yetmezliği klinik belirtileri, bu aşamada yaygındır.
5. gün 28 (MF-SVY'nin sonra Kurban) Klinik nefes darlığı, şiddetli uyuşukluk ve kilo kaybı (<1 hafta içinde% 10) olarak tanımlanan PAH ilişkili sağ ventrikül yetmezliği (RVF), için. Bu işaretlerden biri varken sıçan sonlandırın. Sık sık, fareler gün 28 ve 35 arasında bu belirtiler geliştirmek, korumasız bırakılırsa, bu zaman aralığında kendiliğinden ölür.

5. Sağ Kalp kateterizasyonu

1. Anestezi.
   1. (Akış: / dak 1 L)% 5 izofluran /% 100 O ₂ ile indüksiyon odasına doldurun ve kutuya sıçan yerleştirin. Bir arka ayak tutam yaparak anestezi yeterli derinlikte olup olmadığını kontrol edin. sıçan tartılır.
   2. ekokardiyografi protokolü, toraks ve üst batın, Tıraş ve sıçan sağ ventral tarafında boyun temizlemek ve.
   3. Bir ısı mat (37 ° C) sırtında sıçan yerleştirin ve 2 ile bir solunum maskesi / kaputu burun yerleştirin -% 3 izofluran /% 100 O ₂ (akış: / dak 1 L). burun araştırmacı doğru karşıya edilmelidir.
   4. Anestezi derinliğini kontrol edin. Şiddetli PH bulunan fareler ile dikkatli olun. Kalp hızı azalırsa, anestezi derinliğini azaltmak. Tercih, 20 dakika içinde tüm ölçümler yapmak. anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için göz merhemi sürün.
2. Ekokardiyografi protokolü.
   1. Brittain ve arkadaşları tarafından tarif edilen protokole göre ekokardiyografi gerçekleştirin. Jüpiter ^13.
3. Kateterizasyon protokolü.
   NOT: Bu protokol önceden ucu ile sert bir kanül ucu bir top 2 mm 15 cm silikon kateter rehberlik 20 derece bükülmüş kullanır. Içine hafifçe bükülmüş olan deliği ile 20-G iğne sağ juguler damara kanül eklemek için kullanılır (malzeme listesine bakınız). PAH ilerlemesi ve kontrol herhangi bir aşamasında Sıçanlar Bu protokolde kullanılabilir.
   1. klorür-heksidinli boyun dezenfekte edin. Sağ-ventral tarafta bir 10. neşter bıçağı ile 1.5 cm kesi yapmakBoyun, sağ köprücük kemiği üzerinde mandibular kemik.
   2. makas kullanılarak doku yayıldı. boyun damarı görünene kadar cımbız kullanarak, yavaşça birbirinden doku çekin. kıymık forseps kullanarak damar şahdamarına etrafındaki zarların parçalara ayır.
   3. Geminin etrafında gevşek bitişik harfleri (5-0 dikiş) koyarak juguler ven üzerindeki gerilimi koyun. Gerginliği artırmak ve havalandırma maskesi (Şekil 2A) üzerine bitişik harfleri bantlayın.
   4. Ekleme bölgesinden akım-aşağı kanül sızıntı ve basınç kaybını önlemek için, yerinde sonra sıkıştırmak için teknenin etrafına gevşek bitişik harfleri yerleştirin.
   5. Bir forseps kolları kullanarak, hafifçe kateter ile kanül yapmak için iç deliği ile 20 G iğne ucu bükün.
   6. damara 20-G iğne ucu tanıtmak ve hızlı bir şekilde geminin içindeki kateter içeren kanül yerleştirin. iğne çekin ve ardından bitişik harfleri kapatınBu aşama 5.3.4 hazırlandı.
   7. şah damara kateter içeren kanül yürütün. kanül ucu 20 derecelik eğri olan (adım 5.3.5 bakınız). Köprücük kemiği altında kanül Manevra ve sağ atrium (Şekil 2C) girmek için biraz ilerlemek.
   8. Sağ ventrikül girmek için, kalp (Şekil 2B) doğru sola kanül ucu, işaret. Başucu monitöründe, bir rv basınç eğrisi Şekil 2D eşleşen görünmelidir.
   9. RV basınç eğrisi sabit olduğunda, sistolik ve diyastolik sağ ventrikül basıncı 1 yazınız (sRVP1 / dRVP1).
   10. sol ve yukarı kanül ucu işleyin. Kanül (Şekil 2E) içinde kateteri ilerletin.
   11. Ana pulmoner arter (PA) içine kateteri ilerletin. Pulmoner vana geçerken hiçbir direnç hissettim edilmelidir.
       NOT: Kateter ana pulmoner arter girdiğinde, diastolic basınç artacak. Başucu monitörde, bir PA basınç eğrisi Şekil 2E eşleşen görünmelidir.
   12. PA basınç eğrisi sabit olduğunda, sistolik, diyastolik yazmak ve PA basıncı 1 (sPAP1, dPAP1, mPAP1) anlamına gelir.
   13. kateterin ucundaki topu pulmoner arter sıkışmış alır kadar daha fazla kanül içinde kateteri ilerlemek. Başucu monitör damla basınç eğrisi gözlemlemek ve Şekil 2F kama basıncı eğrisini maç.
   14. wedge basıncı eğrisi sabit olduğunda, sistolik, diyastolik yazmak ve kama basıncı anlamına gelir.
   15. Yavaş yavaş ve daha sonra kateter geri çekin ölçmek ve başucu monitörünüzde görüntülenen, sPAP2, dPAP2, mPAP2, sRVP2 ve dRVP2 değerlerini yazınız.
   16. RV, biraz ölçmek için kanül ve kateter geri çekin sağ atriyal basıncı (RAP) anlamına gelir. Eğri Şekil 2A RAP eğrisini eşleşmesi gerekir.
       YOK HAYIRTE: Bu protokol, sıçanlar anestezi altında iken dolaşan kan hacminin çıkarılması ile kateterizasyon protokolünden sonra ötenazi.

6. Morfoloji Değerlendirme ve Morfometri

NOT: Bu protokol, hayvan anestezi altında iken dolaşan kan hacminin çıkarılması ile ötenazi. PAH ilerlemesi ve kontrol herhangi bir aşamasında Sıçanlar Bu protokolde kullanılabilir.

1. Ölümden sonra 5 bronş çatallanma yukarıdaki mm ve kalp akciğerler bağlamak gemiler hakkında trakea keserek akciğerleri çıkar. soğuk tuzlu su içinde akciğerlere koyun. Sol akciğer parçalara ayır. çatallanma sol ana bronş kesin.
2. ,% 4 paraformaldehid ile 50 ml şırınga doldurun şırıngaya bir kanül ile bir tüp takın ve çalışma tablosu üzerinde bir metre şırınga asmak. pasif paraformaldehid ile akciğer doldurmak için sol ana bronş içinde kanül takın.dikkatli paraformaldehid anlaştım.
3. 48 saat paraformaldehid sol akciğer inkübe edin.
4. (% 70 etanol (1 H),% 80 etanol (1 H),% 90 etanol (1 H),% 100 etanol (3H), ksilol (2 saat) ve parafin ardışık olarak inkübe edilerek kalan akciğer kurutmak 2H).
5. Kaseti bakan akciğer hilus ile, parafin sol akciğer gömün.
6. Üreticinin talimatlarına ²⁹ uyarınca, bir Verhoeff veya Elastica-van Gieson boyama kullanılarak parafine gömülü, 4 mikron akciğer bölümleri Leke. Emin olun elastik lamina iyi (Şekil 3 gibi) ayrılır. 40X büyütmede lekeli bölümleri tarayın.
7. 4 parçaya bölünür akciğer bölün. Her bir çeyrek daire olarak, bir dış çapa sahip 10 gemi 50 um (ön asinar) bulabilirsiniz. Bir resim (akciğer başına 2 x 40 resim) atın. rastgele her geminin 20x büyütme ve fotoğraf kadar büyütBu görüş sahası; seçim verevi en aza indirmek için.
8. > 2 en uzun / kısa çap oranı, tam olmayan dairesel bir şekli, ya da kap duvarının fazla dörtte biri bir çöküş sahip damarları hariç.
   NOT: dışlanan geminin bir örneği aynı büyütme (40X) her resim yapın ve bir ölçek çubuğu dahil 3b Şekil gösterilmiştir.
9. Açık ImageJ ve ilk resim. "Analyse" yoluyla ölçek ayarlamak için resimdeki ölçek çubuğunda düz bir çizgi çizmek ve "ölçek olarak ayarlayın." Için "Bilinen mesafe," resmin ölçek çubuğunda değeri kullanın. uzunluk birimi olarak mikrometre (um) kullanın. Küresel için ölçek olarak ayarlayın.
10. "Serbest seçimleri" kullanma lümen alanı (Şekil 3) iç sınırında bir çizgi çizin, ve "ölçmek" kullanın (Ctrl m) bu alanı ölçmek için. Ardından, dış elast etrafında bir çizgi çizinic lamina (Şekil 3) toplam damar alanı ölçmek için.
11. (Luminal ve dış çapı hesaplamak ) kullanılarak .
12. kullanarak duvar kalınlığını hesaplamak .
13. kullanarak duvar / lümen oranını hesaplamak .
14. kullanarak tıkanıklığı puanı hesaplamak .
15. Muskularizasyon gemiyi Puan (hayır, kısmi veya toplam muskularizasyon) (Şekil 3B).
    NOT: Tamamen muskularize olarak yarısından fazlasının çevresi için bir çift elastik lamina gemiler tanımlanır. Kısmen muskularize gibi bir çift elastik lamina yarısından daha az çevre gemiler tanımlanır.
16. Bir Neoi varlığına gemi Skoruntima (evet veya hayır) (Şekil 3C).
    NOT: (genellikle eksantrik) lümen tıkanıklığı ile birlikte açıkça tanımlanmış internal elastik lamina olmadan gemiler neointimal lezyonlar olarak tanımlanır.

Sonuçlar

Örnek sonuçlar Şekil 4'te sunulmaktadır. Kontrol grubu (n = 3), MF8 (n = 5), MF14 (n = 5), MF28 (n = 5), ve MF-RVF (: sunulan sonuçlar MCT + aşağıdaki grupları Lewis sıçanlarında akış özellikleri gösterir n = 10). İstatistiksel analizler Bonferroni düzeltmesi ile tek-yönlü ANOVA ile yapılmıştır.

60 / kg MCT mg ve sistolik sağ ventrikül basıncında ortalama artış (SRVP) (23 ± 6...

Tartışmalar

Bu yöntem sıçanlarda prensip hemodinamik ve PAH ve bu modeli karakterize histopatolojik uç noktalarını değerlendirmek için akış kaynaklı PAH ve teknikleri oluşturmak için MCT ile ön işleme tabi bir aorto-kaval şant cerrahi prosedürü tanımlamaktadır.

Protokolün ve Sorun Giderme içinde kritik adımlar

Cerrahi ve ameliyat sonrası. aorta-kaval şant ameliyatı sırasında en kritik adım aort ve vena kava diseksiyonudur. aort ve vena kava yeterinc...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Shunt Surgery
Sterile surgical gloves
Duratears Eye ointment	Alcon	10380
Chloride-Hexidine
Cotton swabs
Histoacryllic tissue glue	B. Braun Medical	1050052
Silkam 5-0 sutures black non-resorbable	B. Braun Medical	F1134027
Safil 4-0 sutures violet resorbable	B. Braun Medical
18 G needle	Luer	NN1838R BD	tip bent in 45 degrees orifice to the outside
Gauzes 10 x 10 cm	Paul Hartmann	407825
Temgesic Buprenorphine	RB Pharmaceuticals	5429	subcutaneous injection
Sodium Chloride 0.9%
Ventilation mask Rat
Scalple blade
Biemer clamp 18 mm, 5 mm opening	AgnTho	64-562
Heat mat
Kocher Clamp
Shaving machine
Microscope	Leica
Right Heart Catheterization
Sterile surgical gloves
Eye ointment	Duratears
Chloride-Hexidine
Cotton swabs
Gauzes 10 x 10 cm	Paul Hartmann	407825
Silkam 5-0 sutures black non-resorbable	B. Braun Medical	F1134027
Needle 20 G	Luer		Tip slightly bent to the inside
Cannula 20 G	Luer		to introduce catheter, tip pre-formed in 20 degrees
Silastic Catheter 15 cm long			0.5 mm ball 2 mm from tip
Pressure transducer	Ailtech
Bedside monitor Cardiocap/5	Datex-Ohmeda
Shaving machine
10 mL Syringe
Sodium Chloride 0.9%			for flushing
Vascular Morphology
50 mL Syringe
4% Formaldehyde
18 G cannula with tube
Verhoef staining kit	Sigma-Aldrich	HT254	http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en&region=US
Digital slide scanner	Hamamatsu	C9600
ImageJ
Elastic (Connective Tissue Stain)	Abcam	ab150667	http://www.abcam.com/elastic-connective-tissue-stain-ab150667.html http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(website).pdf