Kadın Küçük Kemirgenler Sinir koruyucu Orta üretral Tıkanıklığı (Nemo)

Özet

kemirgenlerde kısmi mesane çıkışı tıkanıklığı geleneksel modelleme hayvan ölüm ile doludur. Proksimal üretra ve mesane boynuna diseksiyon A denervasyon yaralanması büyük sorun oluşturmaktadır. Biz geleneksel modelin eksiklikleri kaçınarak, gelişmiş ve güvenli ve güvenilir bir orta üretral tıkanma modelini değerlendirdi.

Özet

Kısmi mesane çıkışı tıkanması (pBOO), oldukça yaygın olarak görülen önemli hasta yükünü ve muazzam sağlık maliyetlerini de beraberinde getirmektedir. pBOO içinde mesane yenileme araştırmak için en yaygın hayvan modeli proksimal üretra kısmi tıkanıklık geçiren kadın kemirgenler. tıkanıklığı ve hayvan ölüm derecesindeki Değişkenlik proksimal tıkanıklığı ile önemli sorunlardır. Ayrıca, proksimal üretra ve mesane boynunda kesme mesane inervasyonu tehlikeye atar.

Biz geleneksel modelin dezavantajları kaçınarak pBOO için sinir koruyucu orta üretral tıkanma (Nemo) model geliştirdi. Biz laparotomi yanı sıra bu alanda nasıl tedavi edilmesi gerektiği obviated pubis eklemi, sadece alt üretra yaklaştı; Ayrıca, çizgili üretral sfinkter bakir kalmıştır. Bu dişi Sprague-Dawley farelerinde (12 engel, 6 sahte hayvanlar) ve aynı zamanda dişi C57 / BL6 fareleri NEMO gerçekleştirildi (20 tıkanıklığıs, 18 sahte hayvanlar). İki hafta sonra, mesane fonksiyonu, mesane kitlesi ve vücut kitle değerlendirdi.

Biz obstructed- veya yapay olarak ameliyat dişi sıçanların arasında hiçbir ölümlerinin vardı; Geleneksel yakın pBOO-yöntemi için tarif edildiği gibi, biz idrar yoluna dikiş bağlı ve bir geçici 0.9 mm delikli metal çubuk yerleştirilir. NEMO iki hafta sonra, mesane kütlesinde% 85'lik bir artışa neden ortalama rezidüel idrar hacmi, sadece 0.03 mL iken plasebo hayvanlarda kısmen tıkanmış sıçanlarda 0.4 ml idi. farelerde, dikiş bağlama biz üretra boyunca yerleştirilmiş kanüller 3 boyutları test edilmiştir. Bir 27-gauge kanül kullanılarak% 50 hayvan üzerinde mortalite sonuçlandığını tespit; artan mesane kütlesinde istenen yanıtı sağlamak değil, 25-gauge bir kanül yerleştirilmesi; 26 numara bir kanül kullanılarak en az bir hayvan ölüm (1/8) henüz mesane kitlesinde önemli bir 2-kat bir artış ile olumlu sonuçlar vermiştir.

Giriş

Kısmi mesane çıkışı tıkanması (pBOO) yüksek oranda bulunur ve şiddetli mesane fonksiyon bozukluğu ¹ neden olabilir; tayfı, iyi huylu prostat hiperplazisi için alınan üretral striktür fazla posterior üretral valfleri veya hipospadyas gibi konjenital malformasyonlar, arasında değişmektedir. Erkekler altmış yıldan fazla% 30 ve ² eski etkileyen ikincisi. Büyük hasta yükü ve pBOO taşıdığı büyük sağlık masrafları artan dış akış direnci ³ cevaben okuyan mesane yeniden koymak önemli araştırma çaba garanti. 2006 yılından itibaren 2015 yılına kadar 220 üzerinde PubMed makaleleri idrar kesesi üzerinde pBOO etkisiyle ilgili yayımlandı endekslendi.

PBOO için hayvan modelleri, örneğin sıçan ^5, tavşan ^6, domuz ⁷ ve Mous gibi çeşitli türler ⁴ üzere tasarımlanmış olmakla berabere ^{8, 9,} ancak proksimal üretra kısmi engelleme uygulanan dişi fareler burada en yaygın olarak kullanılan bir hayvan modelidir; Mesane boynuna hayvanların karın erişim, mesanenin exteriorizing ve diseksiyon bu geleneksel proksimal üretral tıkanıklığı tekniği ile kaçınılmazdır. Tıkanıklığı ve hayvan ölüm derecesinde değişkenlik sadece ¹¹ Bu prosedür ^{10 ile} ilişkili endişelerden bazılarını; Biz sahte ameliyat hayvanlarda, idrar yoluna diseksiyon mesane boynu ^12, sinir liflerinin kaybı ile ilişkili fizyolojik değişikliklere neden olduğunu göstermiştir. Bu bulgu, bir kadın kemirgenlerde yakın üretra erişmek kapsar en yaygın olarak kullanılan pBOO hayvan modeli, etki, mesane bağlantılı bir yapısal ve işlevsel değişiklikler ile denervasyon hasara yol açtığını, göstermektedirsahte ve tıkalı hayvanlar. Bu nedenle, alternatif bir yaklaşım kaçınarak denervasyon yaralanması ihtiyaç vardı. Bizim laboratuvar geliştirilmiş ve sham ameliyat edilen hayvanlar ameliyat edilmemiş kontrol hayvanları ayırt iken, bu, organ kütlesini ve rezidüel idrar artış olarak mesanede beklenen tıkanıklığı ile uyumlu değişiklikler indüklenmesinde etkili olan bir sinir-koruyucu Orta üretral tıkanıklık (NEMO) yaklaşımı değerlendirildi . Bu diseksiyon seviyesine yakınlığında uzandığına olarak da, çizgili üretral sfinkter bakir kalmıştır. Bundan başka, mesane kütlesi içinde tıkanma ile uyarılmış değişkenlik geleneksel Üretra tıkanıklığında önemli ölçüde daha düşük olduğu ve hayvan ölüm olmamıştır.

Bugüne kadar tarif edilmiş fareler için tüm pBOO modelleri 50 yaklaşık% mortalite ile ilişkili ise de başarılı bir tıkanmış hayvanlarda% 10'dan az mortalite ile dişi farelerde NEMO uygulanır. Farelerde pBOO bağlamında mesane yenileme incelenmesi applicabil yararlanacaktırTransgenik modifikasyonların bütün spektrum üretebilir.

Kadın kemirgenlerde orta idrar yoluna Kesme geleneksel yakın obstrüksiyon modelinde gözlenen idrar kesesi, istenmeyen ve karıştırıcı yapısal veya fonksiyonel değişiklikler indüklemez. Bununla birlikte, orta üretral düzeyinde bir kısmi engelleme indükleyici hala mesane hipertrofi indükler ve pBOO için bir hayvan modeli beklendiği gibi, artık idrar artmıştır. Önemli olarak, farelerde NEMO performans büyük kemirgenlerde neredeyse kullanılamaz transgenik yöntemlere pBOO mesane biçimlenme soruşturma açar.

Protokol

Aşağıdaki deneysel protokol kurumun hayvan bakımı komitesi tarafından onaylandı.

Dişi sıçanlarda 1. NEMO

1. Hazırlık
   1. Yaklaşık 200 g 3 altında% izofluran anestezisi ağırlığında dişi Sprague-Dawley sıçan yerleştirin hayvan tartmak ve tıraş ve bir iyot cerrahi yıkama kullanılarak prepubik parkı 3 kez dezenfekte.
   2. aşağı bir ısıtma yastığı, şerit arka bacak ve kuyruk üzerinde ve ayrıca yumuşak, kaymasını önlemek üzere aşağı bantlanmış 20-gauge anjiyokateterinden ile mesaneye kateter.
2. teşrih
   1. üretra deliğine doğru aşikar pubis eklemi bir 8 mm uzunlamasına bir deri yarığı gerçekleştirmek için bir neşter kullanarak. Daha sonra yara kapanmasını kolaylaştırmak için her iki tarafta derisini kaldırın.
   2. uzunlamasına ince makasla yayarak stentli üretra tanımlamak için açık açık teşrih. Açıklığı artırmak için ince kendini tutan deri kancaları yerleştirinüretra.
   3. Gerçekleştirmek bazı yumuşak uzunlamasına üretra ve vajina arasında düzlemi geliştirmek için kavisli bir makas üretraya dorsal kullanarak yayılma. Sonra, açık açık üretra arkasında 4-0 ipek sütür geçmek ve bir cerrahın düğüm çift atış hazırlayın.
3. Kısmi üretral tıkanıklığı
   1. , Angiocatheter kaldırma üretra 0.9 mm'lik bir metal çubuk paralel yerleştirin ve ikinci hala kolayca sonra kayarak ve böylece daha sonra, üretra ve metal çubuk çevresinde bir düğüm sıkın.
   2. 3 daha çubuk çıkarmadan önce nazik gerginliği kullanarak atış ile düğüm sabitleyin. sütür uzun yaklaşık 3 mm veya tıkanıklık sonradan serbest bırakma deney parçası ise 4 mm biter kesin.
4. Yara kapatma
   1. emilebilen örgülü sütür 4-0 gömülü tek dikişle paraüretral bezleri yaklaşmaktadır.
   2. Aynı emilebilen SUT kullanarak gömülü yatay yatak dikiş ile cilt kapatınobilyaları. Not: Bir cilt-delici dikiş için emilebilir dikiş kullanmak alışılmamış görünse de, bu tür yara enfeksiyonları gibi komplikasyonlar karşılaşmak yoktu ve bu dikiş alınması önlenebilir.
5. bakım sonrası
   1. Enjekte buprenorfin 0.1 mg / kg deri altından, bir kurtarma kafeste sıçan yerleştirmeden önce.
   2. Tek Housed fareye ilk 24 saat bazı yumuşak kurtarma diyet sunun. Bu süre geçtikten sonra, prosedür önce olduğu gibi aynı ikili tekrar ev hayvanların daha iyi olması ve aynı bakım grubuna aittir sağladı.
   3. mesane büyüklüğü ve genel iyi sağlık için günlük sıçanlar kontrol; en azından haftada kendi ağırlığı kaydedin.

Kadın Farelerde 2. NEMO

1. Hazırlık
   1. yaklaşık 18 g ağırlığında dişi C57BL / 6 fare ve aşama 1.1.1 detaylı devam edin.
   2. 24 ayar ang kullanmak dışında adım 1.1.2 deki gibi detaylı Devamiocatheter.
2. teşrih
   1. üretra deliğine doğru aşikar pubis eklemi 6 mm uzunlamasına cilt insizyonu gerçekleştirmek için bir neşter kullanarak.
   2. uzunlamasına ince makasla yayarak stentli üretra tanımlamak için açık açık teşrih. benzer künt diseksiyon ile üretra üzerinde ventral çalışan nöro-vasküler demet kaldırın.
   3. Gerçekleştirmek bazı yumuşak uzunlamasına üretra ve vajina arasında düzlemi geliştirmek için kavisli bir makas üretraya dorsal kullanarak yayılma. Sonra, açık açık üretra arkasında 5-0 emilemeyen örgülü sütür geçmek ve bir cerrahın düğüm çift atış hazırlayın.
3. Kısmi üretral tıkanıklığı
   1. 1 ml şırınga ile angiocatheter bağlayın ve mesane içine, normal tuzlu su, 0.1 mL enjekte edilir.
   2. üretraya 26 numara bir kanül paralel yerleştirin. angioca geri çekerken yavaşça üretra ve kanül etrafında düğüm sıkıninci.
   3. 3 daha kanül çıkarmadan önce nazik gerginliği kullanarak atış ile düğüm sabitleyin.
   4. hayvanın mesane hafif basınç uygulanması üzerine meatusta görünen idrar için test; idrar ifade edemeyen eğer kravat gevşetin. Aksi takdirde, ameliyat dikiş ipliği, yaklaşık 3 mm long uçları kesilmiş.
4. Yara kapatma
   1. 5-0 örgülü emilebilir sütür kullanarak gömülü yatay yatak dikiş ile cilt kapatın.
5. bakım sonrası
   1. Kurtarma kafes içinde fare yerleştirmeden önce 0.1 mg / kg deri altından buprenorfın enjekte edilir.
   2. Tek Housed fareye ilk 48 saat bazı yumuşak kurtarma diyet sunun. Bu dönemden sonra, işlem öncesi aynı grupta yine ev hayvanları onlar iyi yapıyor ve aynı tedavi grubuna ait koşuluyla.
      NOT: Aşırı engellendiği ele zaman geçersiz yoktur ve n içinde ölecektir işlemden sonra ele gelen şişmiş mesane 24 saat ile Farelerengelleyici ligature çıkarılması için anestezi altında geri alınmıştır 2 gün sürece 1 - dahili.
   3. mesane büyüklüğü ve genel iyi sağlık için günlük fareler kontrol; en azından haftada kendi ağırlığı kaydedin.

Sonuçlar

Dişi sıçanlarda sinir-koruyucu Orta üretral tıkanması (NEMO)

ölümlülük

Şu ana kadar 40'ın üzerinde dişi fareler üzerinde bir orta üretral tıkanma gerçekleştirilen ve hiçbir ölümlerinin vardı.

mesane kütlesi

Tartışmalar

Hayvan ölümleri Birçok raporda ^{10, 11, 13%} 15 veya daha fazlasında proksimal üretra de pBOO geleneksel modelin önemli sorunlardan biridir. NEMO dişi sıçanlarda uygulandığında çok az ölüm oranı gibi görünmektedir. Farelerde proksimal üretral tıkanma teknik olarak daha zor sıçanlarda daha ve böylece daha meyilli komplikasyonlar etmektir. Bizim orta üretral yaklaşım için yer tutucu olara...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Female rat	Charles-River Canada	Sprague Dawley Rat (Crl:SD); Strain Code: 400	about 200 g
Isoflorane vaporizer	Benson medical industries inc.	TEC III Isoflurane; product code: 53-T3ISO
Isoflorane	Fresenius Kabi Animal Health	Isoflorane; product code CP0406V2	250 mL bottle
Disposable scalpel	Ted Pella, Inc.	#15 Sterile, Stainless Steel Scalpels; catalogue number 549-9-15S
Microscopy forceps	Ted Pella, Inc.	Aesculap Microscopy Forceps, Finepoint, 115mm; product number 5443
Adson forceps	Ted Pella, Inc.	Aesculap Adson Dissection Forceps, Curved, 120mm; product number 5002-9
Curved surgical scissors	Ted Pella, Inc.	Surgical Scissors, Curved, S/S, 105mm; catalogue number 1376
0.9 mm inox metal rod	goodfellow.com	Stainless Steel - AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65
Skin hooks - self made from inox steel	goodfellow.com	Stainless Steel - AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65
4-0 Silk suture	esutures.com	4-0 Sofsilk black 98" strand; product number LS640
5-0 Vicry suture	esutures.com	5-0 Vicryl undyed 27" RB-1 taper; product number J213H
Needle holder	Medsupplier.com	Integra Miltex Carb-N-Sert Baumgartner Needle Holder - 5 1/2"; product code SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC
Temgesic (Buprenorphine)	first veterinary supply	Buprenex 0.3MG/ml inj amps; item #075701
1 mL syringe with 27 G needle	Fisher Scientific	BD Tuberculin Syringe, BD 309623
20 G Angiocath	Fisher Scientific	Andwin Scientific ANGIOCATH 20 GA; Catalog No. NC9561906
Recovery diet	clearh2o	DietGel 31M; 72-08-5022
C57Bl/6 female mice	Charles-River Canada	C57BL/6 Mouse (C57BL/6NCrI); Strain Code: 027	about 18 g
24 G angiocath	Fisher Scientific	Hanna Pharmaceutical Supply Co., Inc. IV CATH ANGIOCATH 24GX3/4IN; Catalog No. NC9814340
5-0 Ethibond	esutures.com	5-0 Ethibond green 30" RB-1 taper; product number X550H
26 G syringe needle	Sigma-Aldrich	BD Precisionglide syringe needle, Gauge 26; z192392
Normal Saline	Baxter	0.9% Sodium Chloride Injection, USP, 100 mL MINI-BAG; product code 2B0043