Microcoil stenoz ile hafif intrauterin hipoperfüzyon fare modeli

Özet

Hafif intrauterin hipoperfüzyon metal halkaları embriyonik gün 17 fareler rahim ve yumurtalık arterlerde sarılı olan Artere Stent tarafından üretildi. Bu yordamı doğum öncesi hipoperfüzyon ve intrauterin büyüme kısıtlama üretti.

Özet

İntrauterin hipoperfüzyon/iskemi/fetal intrauterin büyüme kısıtlama, erken doğum ve düşük doğum ağırlığı en önemli nedenlerinden biridir. Bu fenomenin en çalışmaları şiddetli intrauterin iskemi ya modelleriyle veya modelleri intrauterin hipoperfüzyon degrade derecesi ile gerçekleştirilmiş. Hiçbir çalışma üniforma hafif intrauterin hipoperfüzyon (MIUH) bir modeli içinde yapıldı. İki model MIUH çalışmaları için kullanılan: Arteryel arcade her iki tarafında dikiş ligasyonu üzerinde dayalı bir modeli ile rahim ve yumurtalık arter oluşmuş ve geçici bir modelini alan ikili yumurtalık arterler ve açıklık sahip aort kırpma. MIUH bu iki kemirgen modelleri bazı sınırlamalar var, örneğin, tüm fetus rahim boynuz konumlarına bağlı olarak MIUH için tabi tutulmaktadır. Bizim MIUH modelinde, tüm fetusa intrauterin hipoperfüzyon karşılaştırılabilir bir seviyeye tabi tutulmaktadır. MIUH rahim, yani, besleme tüm dört arterler ikili rahim ve yumurtalık arter hafif stenoz tarafından sağlanır.

Arteryel stenoz metal halkaları besleme arter sarılı tarafından akımıdır. Bizi kontrol etmek, en iyi duruma getirmek, ve çok az arası hayvan değişkenlik ve düşük mortalite azalmış kan akışını yeniden izin halkaları ile Arteryel stenoz üreten, böylece doğru değerlendirme etkinleştirme. Halkaları 0,24 mm bir iç çapı ile kullanıldığında, plasenta ve fetüsün kan akışında hafif yapıldı (yaklaşık % 30 plasenta öncesi stenoz düzeyi) düşmüştür. Bizim MIUH modeli dölü açıkça nörolojik, nöroanatomik ve davranış testi sonuçlarında uzun ömürlü değişiklikler göstermektedir.

Giriş

Bebekler ile intrauterin büyüme sınırlama (IUGR) (fetal büyüme kısıtlama olarak da bilinir) (doğum ağırlığı < 10^inci yüzdelik Gestasyonel yaş için), erken doğum (d. < 37 gebelik haftasından itibaren) ve/veya düşük doğum ağırlığı (< 2500 g) hesabı için yaklaşık yüzde 10'u tüm yenidoğan ^2,3. Birçok bu bebeklerde serebral palsi ve gelişimsel bozukluklar (örn., dikkat-eksikliği/hiperaktivite bozukluğu (DEHB) ve öğrenme bozuklukları) ^3,4,5gibi nörolojik sorunlar ile mevcut. Bu koşulların benzerlikler ve farklılıklar nedenleri ve sonuçları var. IUGR etyolojisinde multifaktöriyel ve plasental yetmezlik ile intrauterin hipoperfüzyon ilişkili anormal sigara fetus ⁷en yaygın nedeni olarak kabul edilir. Erken doğum etyolojisinde de multifaktöriyel ise chorioamnionitis en sık nedeni ⁸.

Gelişmekte olan beyin hafif intrauterin hipoperfüzyon (MIUH) etkisi belirsizdir. Şu anda mevcut hayvan modelleri intrauterin hipoperfüzyon/iskemi öncelikle şiddetli hipoperfüzyon veya Degrade hipoperfüzyon veya reperfüzyon ^9,10,11olmadan derecesini içeren. Klinik ayarları'nda, ancak, MIUH durumlarında bu ağır koşullar ilgili olanlar çok daha sık olarak kabul edilir. Şu anda mevcut MIUH dikiş ligasyonu ya rahim ya da yumurtalık arter ve ikili yumurtalık arterler ve açıklık ^{12,13olan aort kırpma içeren bir kemirgen model içeren bir kemirgen modeli modellerdir, 14,15,16,17}. Bu modeller dezavantajları biridir fetusa derin hipoperfüzyon ile gelen fetusa fetus rahim, Arteryel arcade içinde pozisyona bağlı olarak neredeyse bozulmamış perfüzyon ile arasında değişen geniş arası fetus değişkenliği ve Yumurtalık arterler. Başka bir dezavantajı bu modellerin her fetus konumunu doğumdan sonra ayırt etmek için kendi yetersizlik ise; Bu nedenle, araştırmacılar tarafından bireysel bir köpek yavrusu doğumundan sonra deneyimli intrauterin hipoperfüzyon şiddeti ayırt edemez.

Birden çok arter stenoz ¹içeren MIUH bir fare modeli geliştirdik. Yumurtalık ve uterin arter etrafında 0,24 mm bir iç çapı ile metal mikro-bobin sarma stenoz, ama değil (şekil 1) kan damarlarının tıkanıklığı neden olur. Bu halkaları tüm rahim, yani, temini arterler ikili rahim ve yumurtalık arter proksimal parça embriyonik gün 17 (embriyonik haftada 20-25 insanlar ¹⁸eşdeğeridir) uygulayarak önemli ama hafif bir düşüş neden olmaktadır Plasenta ve fetusa kan akışı. Bobinler rahim besleme tüm dört arterler uygulandıktan sonra kan akımı düşüşler büyük ölçüde her plasenta ve fetus üzerinde aynıdır. Fetus ölüm oranı % 20'den az olduğunu. Belgili tanımlık pups spontan doğum via 1-2 gün önceki (embriyonik gün 21-22) normalden daha doğar. Hemen hemen tüm pups önemli ölçüde düşük doğum ağırlıkları ¹sergilenmesi doğarlar. Açık dokusuna zarar olmadan ¹gri ve Beyaz maddenin birim azalmıştır. Yavruların yenidoğan refleksleri, kas güçsüzlüğü ve değiştirilmiş spontan aktivite ¹gecikmeli edinimi ile mevcut. Bu modeli taklit eden klinik belirti ve bulgular çocukların erken veya IUGR ile doğan; gri çocuk d. preterm sergi azaltılmış ve Beyaz maddenin birim veya beyaz madde yaralanma ⁶, mevcut olmadan kilometre taşları nörolojik gelişimi gecikmiş ve DEHB ^3,5gibi davranışsal sorunlar takdim edeyim; IUGR çocuklarla en az nöroanatomik değişiklikler sergi ve motor ve Bilişsel gecikme ^4,7gibi Engelli nörolojik gelişme riski vardır. Erken doğum ve IUGR farklı koşullar, ancak temel mekanizması, yani hakaret tam dönemlik Gestasyonel yaş önce olgunlaşmamış beyin için iki koşul paylaşmak.

Protokol

Tüm deneyler deneysel hayvan bakım ve kullanım komitesi ulusal beyin ve dolaşım Merkezi, Suita, Japonya tarafından onaylanmış protokoller uyarınca gerçekleştirilmiştir.

1. aşağıdaki hayvan ve malzemeleri MIUH ameliyat için hazırlayın

1. Gestasyonel gün 17, zamanlanmış hamile Sprague-Dawley Rat hazırlamak Yani, embriyonik gün 17 (E17). Baraj ortalama vücut ağırlıkları vardır 307.0 ± 40.7 g (yani ± SD, n = 9).
2. Metal halkaları hazırlamak; altın kaplı çelikten yapılmış 0,24 mm iç çap.
3. Malzemeleri masa başı olarak tüm malzemeleri hazırlayın.

2. MIUH ameliyat için hazırlayın

1. Bir Isıtma yastığı sıçan yerleşim için 37 ° C'de sıcak
2. Steril bez Isıtma yastığını yerleştirin
3. Sıcak steril serum fizyolojik bir su banyosu içinde 37 ° C'de

3. MIUH ameliyatı

1. Steril koşul altında cerrahi işlemler gerçekleştirmek. Sargılar, forseps, iğne ile % 70 etanol kullanmadan önce sterilize. Zaman zaman etanol sprey uygulanarak dezenfekte ve steril eldiven kullanın.
2. Fareyi anestezi indüksiyon kutuya koyun. %4 isoflurane içine belgili tanımlık kutu (yaklaşık 5 dk) tanıtmak.
3. Hayvan iyice indüksiyon kutusunda anestezi sonra Steril bez üzerine fare Isıtma yastığını sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Bir yanıt-e doğru ayak parmağı çimdik eksikliği ile anestezi derinliği için denetleyin. 1.5-%2.0 isoflurane burun konisi ile koruyun.
4. Pelvik Kemer bölgesi aşağı göbek karın üzerine depilatory köpük uygulayın. Birkaç dakika sonra kağıt havlu ile depilatory köpük yok etmek. Bir tıraş makinesi depilatory köpük için bir yedek olarak kullanılabilir.
5. İyot dezenfektan çözüm cilt depilated bölgesine batırılmış gazlı bez uygulayın.
6. Karın bölgesinin kalbinde cerrahi kesi dışında kapsayacak şekilde yuvarlak bir açılış ile cerrahi örtüsü yerleştirin. Gazlı bez gibi birkaç asmak için bir yedek olarak kullanılabilir.
7. Cerrahi bir neşter kullanarak yaptığınız bir kesi yaklaşık 2.5 cm uzun kasık kemiğine üst kenarından alt karın üzerinde yukarı doğru göbek. O zaman, bir kesi altında kas katmanı üzerinden yapmak.
8. Örtüsü açılış etrafında steril gazlı bez gibi birkaç yer ve gazlı bez ısıtılmış salin ile ıslak.
9. Rahim boynuz bir kısmı--dan belgili tanımlık kesme ortaya karın yanal her iki tarafında yavaşça itin.
10. Cerrahın elleri % 70 etanol ile dezenfekte.
11. Yavaşça tüm rahim boynuz Karın boşluğundan el ile forseps kullanmadan çekin. Cerrahi forseps kullanarak onlar kolayca kırılgan rahim, fetus ve kan damarları güçlü ve düzensiz sıkıştırarak zarar verebilir tavsiye, değildir.
12. Rahim boynuz üzerinde ıslak gazlı bez koyun.
13. Diğer rahim horn için aynı yordamı gerçekleştirin.
14. Fetusa saymak.
15. Sık sık rahim ameliyatı sıcak ve nemli tutmak için ısıtılmış salin uygulanır.
    1. Çok fazla tuz absorbe ne zaman bebek bezi değiştirme. Çalışma düzenini sağlamak için dezenfeksiyon eldiven % 70 etanol ve iyot aletle ipuçları ile yineleyin. Non-steril parmak enstrümanın steril ipuçları uzak tutmak çok önemlidir.
16. Bir stereomicroscope altında yumurtalık ve uterin arter ana arcade proksimal parçası belirleyin.
    Not: Ana arcade şube için plasenta ayırt etmek önemlidir. Not ne zaman rahim boynuz saygısız Cerrahi operasyon daha kolay olabilir. Bazen, bir bobin Arcade çok proksimal kısmında uygulama derin karın boşluğu içinde bulunduğu ve arterler için plasenta arcade proksimal parçası yakın çok zor, çünkü. Bu durumda, bir bobin arcade bir parçası ilk şube çatal sonra kapalı uygulanabilir.
17. Forseps ile paralel damar damar ayrı ve aralarında boşluk olun.
18. Dize (ipek dikiş 4.0, 5 cm uzunluğunda) arter altında bir parça yerleştirin.
19. Böylece arter kaldırdı ve kırılgan damar ayrılmış dizenin her iki ucunu Forseps ile kaldırın.
20. Öte yandan iyi Forseps ile microcoil kenarına tutarak, bir microcoil yanında kaldırdı arter (Şekil 2.1) yerleştirin.
21. Kaldırdı arter, microcoil arter etrafında sarmak için microcoil ip kullanarak döndürme. Arter bobin bobin arter (Şekil 2.2) etrafında döndürmek daha etrafında döndürmek daha kolaydır.
22. (Bobinleri 5 döner var) arter 3 veya 4 döner döner sonra bobin diğer kenarına kadar tutulan site değiştirin. Atardamarın etrafından Forseps ile sarılmış bobin kenarı tutun. Sitenin hangi öbür Sargının arter dize asansörleri değiştirin. Arter bobin etrafında döndürme böylece bobin tamamen (5 döner) arter (Şekil 2.3, 2.4) tamamladı.
23. Dize kaldırmak.
24. Diğer üç arterler için aynı yordamı gerçekleştirin.
25. Sık sık uygulanan ılık salin rahim için çok önemli olduğunu unutmayın; Aksi takdirde, fetusa ölüm oranı artar ve hipotermi nöroprotektif olabilir.
26. Yavaşça rahim boynuz karın boşluğuna dönün. Forseps ile belgili tanımlık karın duvarı kesme kenarına kaldırma bu yordamı daha kolay yapabilirsiniz.
27. Dikiş karın kas ve sonra Dikiş dikiş (ipek dikiş 4.0) ile karın cildi. Her dikiş sonra yani kesintiye uğramış tek Dikiş dikiş bağla.
28. İyot dezenfektan çözüm ve cerrahi kesi çevresinde batırılmış gazlı bez uygulayın.
29. Subkutan 0,5 mg/kg vücut ağırlığı, analjezik Meloksikam yönetmek.
30. 30 dk ısıtılan bir kafes içinde kurtarma sağlar. Onay hayvanlar tam olarak uyanık ve kafes, hareket için eve kafes döndürür.

Sonuçlar

Yani, rahim, besleme arter ikili rahim ve yumurtalık arter herkese halkaları uygulandıktan sonra tüm fetusa hipoperfüzyon karşılaştırılabilir düzeyde tabi tutulmaktadır. Halkaları uygulamanın 0,24 mm bir iç çapı ile böylece kan akımı plasenta ve fetus için hafif bir düşüş neden bu arter hafif stenoz neden olur (şekil 3; yaklaşık %30 plasenta, ön stenoz düzeyi görmek 1 için başvuru ayrıntıları). Baraj doğan yavruların IUGR...

Tartışmalar

Yumurtalık ve uterin arter her iki rahim boynuzları microcoil stenoz tutarlı ve tekrarlanabilir intrauterin hipoperfüzyon tüm plasenta ve fetusa üretir. Hipoperfüzyon düzeyini halkaları farklı iç çapları ile kullanarak değiştirilebilir. Fare pups halkaları 0,24 mm iç çapında bir baraj arter stenozu gerçekleştirildikten doğuştan IUGR ve erken doğum (referans 1 ayrıntılı bilgi için bkz:) göstermektedir. Yavrular işaretler ve prematüre çocuklarda gözlenen belirtiler benzer nöroanatomik ve d...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Stereomicroscope
Isoflurane anesthesia machine
Anesthesia induction box
Heating pad
Diaper 30x40 cm
Depilatory foam or shaver
Iodine disinfectant solution
Gauze 10x20 cm
Surgical drape 45x45 cm with a round opening 5 cm in diameter
Spray bottle with ethanol for disinfection
Cotton swab
Forceps with large blunt tips
Forceps with angled fine tips
Scissors
Surgical scalpel, blade size is 27mm long (no.10, Axel, AS ONE Corporation, Osaka, Japan)
Surgical suture needle
Metal microcoils; inner diameter 0.24 mm, made from gold-coated steel (SAMINI Co. Ltd., Shizuoka, Japan)
Silk suture 4-0
Sterile saline (0.9% sodium chloride)
Heating water bath
Plastic syringes (50ml) and needles (18G)