JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Burada, orthotopic insan birincil beyin tümörü taşıyan immünyetmezligi farelerde hazırlık ve allojenik insan lenfosit stereotaksik yönetim için bir iletişim kuralı mevcut. Bu çalışmada bir kanıtı-of-concept fizibilite ve hücresel immunotherapies intrabrain teslim antitümör etkinliği için sağlar.

Özet

Glioblastoma multiforme (GBM), Yetişkin, en sık ve agresif birincil beyin kanseri genellikle kötü prognoz ile ilişkilidir ve kıt etkili tedaviler son on yılda önerilmiştir. Roman tedavi edici stratejiler tasarlamak için umut verici adaylar arasında hücresel immunotherapies son derece invaziv ortadan kaldırmak için hedef almış ve kemoterapi-olup tümör hücreleri, büyük olasılıkla bu kanser bir hızlı ve ölümcül nüks dahil. Böylece, tümör çevresinde insan Vϒ9Vδ2 T lenfositler gibi allojeneik GBM reaktif bağışıklık hücre effectors administration(s) verimli sunmak için eşsiz bir fırsat temsil eder ve son derece konsantre doğrudan içine terapötik ajanlar beyin maligniteler sitesi. Burada, orthotopic insan birincil beyin tümörü taşıyan immünyetmezligi farelerde hazırlık ve allojenik insan lenfosit stereotaksik yönetim için bir iletişim kuralı mevcut. Bu çalışmada fizibilite ve allojenik insan lenfosit intrabrain tümör yataklar içinde stereotaksik enjeksiyonları itimat bu hücresel immunotherapies antitümör etkinliğini preklinik bir kanıtı-of-concept sağlar.

Giriş

(Kim IV tümörü grade) GBM erişkinlerde en sık ve agresif birincil beyin kanseri var. Cerrahi ve radyo-kemoterapi birleştirir agresif tedaviler rağmen GBM son derece kötü prognoz (medyan sağkalım 14.6 ay ve % 2-yılı-ölüm > 73)1ile ilişkili olarak kalır. Bu kaç etkili tedavi gelişmeler üzerinde son on yılda2doğrulandıktan kanıtlamaktadır. Daha etkili tedavi stratejileri3,4,5tasarımı için adaylar arasında immunotherapies6 Şu anda incelenmiştir izlemek ve son derece invaziv ve radyo/kemoterapi dayanıklı tümör ortadan kaldırmak için hücreleri, hızlı ve ölümcül tümörün nüks7anahtar katkılarından dolayı şüpheli. Çeşitli potansiyel immünolojik hedefleri belirlendi ve için önerilen immunotherapies, doğal içeren veya değiştirilmiş αβ veya ϒδ T lenfositler GBM özgü tümör antijenleri veya stres kaynaklı molekülleri8,9gibi olduğunu, 10. Seçili GBM reaktif bağışıklık hücre effectors yönetmek için olasılık efektör lenfositler yüksek miktarlarda kalıntı malignite siteye doğrudan sunmak için eşsiz bir fırsat temsil eder. Bu strateji desteklemek için biz son zamanlarda orthotopic birincil insan GBM xenografts sadakatle taşıyan immünyetmezligi fareler üzerinde temel modelleri beyin tümörleri GBM hastaların9,11' deki gelişimi özetlemek göstermiştir. Ayrıca, bu modeller adoptively transfer edilen allojeneik insan Vϒ9Vδ2T lenfosit güçlü antitümör etkinliğini göstermek için kullanılmıştır.

Bu iletişim kuralı GBM, allojeneik T lenfositler evlat edinen transferinde dayalı gibi beyin tümörlerinin stereotaktik immunotherapies ulaşmak için kritik deneysel adımları açıklar. Makale gösterir: (i) gibi insan Vϒ9Vδ2T lenfosit; tedavi allojeneik bağışıklık efektör T lenfositler amplifikasyon (ii) enjeksiyon için bu efektör T lenfositler hazırlanması; (iii) içinde beyin tümörü yakınındaki stereotaksik yönetim için yordam. Bu makalede ayrıca bu hücresel effectors davranışını içgörü sonra stereotaksik enjeksiyon sağlar.

Burada sunulan tedavi yaklaşımı 20 x 106 efektör hücreleri başına doz her beyin tümörü taşıyan immünyetmezligi fare için enjeksiyon temel alır. Bağışıklık hücreleri büyük miktarlarda üretmek için bir ilk vitro genişleme adım gereklidir. Bu nedenle, belirsiz hücre açılımları phytohemagglutinin (PHA-L) kullanarak gerçekleştirilir ve allojenik besleyici hücreler ışınlanmış: periferik kan mononükleer hücreler (PBMCs) sağlıklı bağış ve Epstein Barr virüsü EBV dönüştürülmüş B-lymphoblastoid hücre vitro enfeksiyon EBV içeren kültür Marmoset B95-8 hücre satırından 1 µg/mL cyclosporin-A. huzurunda süpernatant ile PBMCs elde satırları (BLCLs),

GBM reaktif efektör bağışıklık hücreleri karşılaştırılır ve vitro deneyleri9' dan seçilmiş. Bu efektör hücreler aktif hale gelir ve standart iletişim kuralları kullanarak kendi doğası göre (Örneğin, insan Vγ9Vδ2 T lenfositler9 veya insan anti-herpes virüsü αβ T lenfositler12) > %80, rutin olarak en az bir saflığı ile güçlendirilmiş sitometrik analiz tarafından kontrol. Aşağıda verilen hücre genişletme yordam çeşitli insan lenfosit alt kümeleri için geçerlidir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Aşağıdaki yordam içeren hayvan konular (anlaşma #00186.02; Pays de la Loire [Fransa] bölgesel Etik Komitesi) Kurumsal kurallarına göre gerçekleştirilen. İnsan PBMCs bilinçli sağlıklı bağış (Etablissement Français du Sang Nantes, Fransa) toplanan kan gelen izole edildi. Tüm adımlar steril koşullarda gerçekleştirilir.

1. non-spesifik sitotoksik efektör T lenfositler genişlemesi

  1. Hazırlamak ve besleyici hücreler, 35 Gy ışınlatayım. 2 x 105 - 4 x 105 efektör hücreleri, uyarılması için 10 x 106 PBMCs ve 1 x 106 BLCLs üç farklı ve sağlıklı bağışçılardan hazırlayın.
  2. Besleyici hücreler ve % 10 FCS ısı inaktive, 2 mM L-glutamin, penisilin (100 IU/mL) ve streptomisin (0.1 µg/mL) ve 300 IU/mL rekombinant IL-2 takıma RPMI 15 mL efektör hücrelere resuspend.
  3. PHA-L 1 µg/mL nihai bir konsantrasyon eklemek, dikkatlice karıştırın ve hücre süspansiyon 96-şey U popolu plakaları bir kuyu başına 150 µL dağıtmak.
  4. 37 ° C'de ve oksijen bir atmosferde % 5 CO2 kuluçkaya.
  5. Büyük hücreli kültür wells formunda kümeler kadar günlük plaka kontrol (~ 7 gün).
  6. Hücreleri 1 x 106 hücre/mL taze kültür ortamında, bir kültür şişesi içine aktarın.
  7. (2 bir hafta x) sayarak toplam cep numarasını belirlemek ve taze kültür ortamında 1 x 106 hücre/mL proje.
    Not: Efektör bağışıklık hücreleri dinlenme State (genellikle 3 hafta sonra ilk amplifikasyon uyarıcı) tedavi yönetim için hazır olmalıdır. Saflık ve reaktivite bu efektör hücreler in vivo enjeksiyonları (Örneğin, vitro deneyleri ile) önce kontrol edilmelidir.

2. pre-operative efektör hücreleri hazırlık

  1. Efektör hücre sayısı kontrol ettikten sonra 50 mL tüp efektör hücrelerde Santrifüjü (300 x g 5 min için) tarafından toplamak.
    Not: aşırı hücre (Örneğin, 50 x 106) için herhangi bir kaybı telafi etmek için hazır olun.
  2. Dikkatle süpernatant kaldırmak ve 15 mL steril PBS ve 300 x g de 5 dk santrifüj yıkama gerçekleştirmek için hücrelerde resuspend.
  3. Dikkatli bir şekilde ve tamamen süpernatant kaldırın ve sonra hücre pelet 1 mL steril PBS resuspend.
  4. Santrifüjü 300 x g 5 min için de için 1.5 mL microtube resuspended hücrelerde aktarın.
  5. Yavaş yavaş pipetting tarafından dikkatli bir şekilde ve tamamen süpernatant kaldırın.
  6. Hücre Pelet fare başına steril PBS 8 µL resuspend.
    Not: Bu kritik bir adımdır.
  7. Hücre süspansiyon hacmi bir micropipette kullanarak ölçün. Gerekirse, steril PBS (PBS 15 µL doz başına 20 x 106 hücreler) ve dikkatlice karıştırın.
  8. , 15 ve 20 μL (imperatively < 20 µL) arasında fare başına son birimdir micropipette, kullanarak kontrol edin.
  9. Buz hücrelerdeyse stereotaksik enjeksiyon kadar tutun.
    Not: daha 3 h timepoints test değil.

3. stereotaksik enjeksiyon

  1. Ekipman kurulumu
    1. Bir araya getiren ve küçük bir hayvan stereotaksik kare kafa içi enjeksiyonları (Örneğin, şırınga boyutu, istenen birim ve enjeksiyon oranı) doğruluğunu sağlamak için üreticinin yönergelerine göre kalibre.
      Not: Yavaş infüzyon hızı (Örneğin, 2-3 µL/dak) önerilir.
    2. Mikrobiyal emanet dolabı (MSC) kısırlık araçlarının bakımını ve fareler korumak için altında malzeme bulaşan yükleyin.
      Not: yer "izotermal blok" 37 ° C'de bir su banyosunda Bu sistem, ameliyat sırasında fareler hipotermi sınırlar. Yastıkları, sonrası yordam bakımı için gerekli olan Isıtma sürekli sıcaklık izleme sırasında kullanılmalıdır.
  2. Pre-operative hayvan hazırlık
    1. Bir fare ketamin (10 mg/mL) ve xylazine (0.1 mg/mL) 10 µL/g fare vücut ağırlığının, mayi enjeksiyonu ile anestezi.
    2. Tam anestezi ve analjezi Hayvan emin olmak için bir ayak çimdik testi gerçekleştirin.
      Not: Herhangi bir hareket derin olmayan analjezi bir göstergesidir ve bu durum ortaya çıkarsa, bir kaç dakika daha işlem tekrarlanmadan önce gereklidir.
    3. Sonra fare düzgün anestezi, makas (arasında iki kulak, burun kadar) cerrahi sitesinden kürk kaldırmak için kullanabilirsiniz.
  3. Pre-operative hücre hazırlık
    1. Dikkatli bir pipet hücrelerle topaklanma herhangi bir hücreyi önlemek için önce her iğne (birkaç kez) resuspend.
    2. Dikkatle gerekli hücre süspansiyon birim (15-20 µL) kabarcıklar aspirasyon önlemek için 22-G microsyringe çizin.
      Not: Bu hücre-yükleme adım içine microsyringe enjekte birimleri'deki en aza indirmek önemlidir. Hücreler arasında yordamlar topaklanma herhangi bir hücreyi engellemek ve efektör hücreleri yönetim kohort çift sayıda sağlamak için tek tek her enjeksiyon için yeniden yükleyin.
    3. O zaman, belgili tanımlık tenkıye adapte şırınga pompa yerleştirin.
  4. Yordam bakım
    1. Cerrahi sitesi povidone-iyot %5 çözüm en az 3 batırılmış temizleme bezi ile dezenfekte x.
    2. Yağlama oftalmik merhem herhangi bir kornealar kurutma önlemek için fareyi'nın gözlerinin içine yerleştirin.
    3. Pozisyon stereotaksik karede sıcak izotermal blok imzalat fare fare ısısını ameliyat sırasında korumak ve mortalite sınırlamak için steril bir plastik film ile kaplı.
      Not: Fare burun ve diş uygun şekilde işlem sırasında yeterli solunum akışını sağlamak için diş çubuğunun üzerinde konumlandırılmış olmalıdır.
    4. Fare diş çubuğunun üzerinde konumlandırılmış bir kez sıkıca fare kulaklar kafa hareketsiz altında kulak çubuklarını sıkın.
      Not: kulak zarı zarar vermemeye veya solunum uzlaşmaya dikkat et.
    5. 1-2 cm ensizyon sagittal cilt kafatası kafatası ortaya çıkarmak için posterior anterior üst kısmı boyunca steril makasla olun.
    6. Sagittal ve koronal sütür (Bregma) ( Şekil 1' de gösterilen) enjeksiyon önce stereotaksik yerelleştirme için simge olarak hizmet verecek kesişimi tanımlayın.
    7. Bu noktada yukarıda microsyringe bir yer.
    8. 2 mm sağ yanal ve 0,5 mm Bregma ön microsyringe taşıyın.
    9. Bir microdrill kullanarak, önceden belirlenen koordinatları steril bir matkap ile kafatası içinde küçük bir delik açmak. Beynin herhangi bir travmatik yaralanmayı önlemek için yüzeysel kalması için dikkatli olun.
      Not: Bu protokol için kurulan bir tümör (bir hafta sonra tümör hücre enjeksiyon) içinde bağışıklık hücreleri enjekte edildi. Deri yeniden (skar) ve enjeksiyon olmalıdır (delik genellikle hala enjeksiyon sonra 2 hafta kadar mevcut) tümör hücre implantasyonu için kullanılan aynı koordinatlarda gerçekleştirilir. Koordinatları beyin parankimi13,14tümör ve efektör hücrelere enjekte için seçildi.
  5. Enjeksiyon bağışıklık efektör hücrelerin
    1. Dikkatle microsyringe delinmiş deliğe yerleştirin ve yavaş hareket, beyin zarı içinde aşağı 3 mm ve sonra geriye doğru 0,5 mm son derinliğe kadar efektör hücreleri enjekte önce 2.5 mm iğne iletmek.
    2. 2-3 µL/dak efektör hücre enjeksiyon çalıştırın ve enjeksiyon süresi boyunca fareler izleme.
    3. Enjeksiyon işlemi tamamlandıktan sonra yalnızca 1 mm için iğne geri çekilin ve yavaş yavaş tamamen çekilmesi infüzyon sitesinden herhangi bir sızıntı önlemek için microsyringe, önce bir dakika için microsyringe tutmak.
      Not: hayvan stereotaksik aygıttan kaldırılmasını, hemen enjeksiyon donanımları yaklaşan deneyler için temiz.
  6. Ameliyat sonrası bakım ve takip fare
    1. Hayvan stereotaksik çerçevesinden kaldırın ve hemen povidone-iyot %5 çözüm kesi sitede uygulamak ve uygun bir cerrahi sütür ile cildi kapatmak.
    2. %2 lidokain jel doğrudan yaraya uygulayın ve buprenorfin 0.15 µg/g tarafından Subkutan Enjeksiyon sonrası yordam analjezi için yönetmek.
    3. Yer geri onun kafes bir ısıtma yastığı yukarıda imzalat fare 37 ° C için uygun fare vücut ısısını korumak için ve herhangi bir hipotermi önlemek için ayarlayın.
      Not: Ayrı konut gerekli değildir.
    4. Anesteziden tamamen iyileşti kadar fareyi izlemek ve konut odasına aktar.
      Not: birkaç beklenmedik komplikasyonlar (< %5 enjekte farelerin) meydana gelmiş gibi bugüne kadar bu protokolü de desteklenir.
    5. Her gün fareler izlemek ve azalan herhangi bir sağlık işaretleri (Örneğin, Kambur duruş, hareketliliğin, secde veya önemli vücut kilo kaybı [≥ % 15]) gözlendiğinde onları ötenazi.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Bu çalışma içinde beyin tümörü taşıyan fareler stereotaksik enjeksiyonları tümör yatağın içinde gerçekleştirilen temel hücresel bağışıklık efektör hücrelerin evlat edinen transferlerin strateji açıklar.

Herhangi bir büyük enjeksiyon birimle ilişkili beyin hasarı riskini en aza indirmek için efektör hücre süspansiyon (15-20 µL PBS, 20 x 106 hücreler) konsantre gerekir. Bu hücre top...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Bir evlat edinen transferini yerli seçilen veya mühendislik bağışıklık efektör hücreleri temsil eden verimli tümör hücreleri dönüştürülmüş15karşı ayrıntıları sınırlayıcı dikkat çekici infiltrative beyin kanser gibi tedavisi için umut verici bir yaklaşım, 16,17,18. Ancak, beyin oluşur, merkezi sinir sistemi, kan - beyin bariyerini varlığını ve klasik lenfati...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Yazarlar personeli sitometresi tesisi (Cytocell) ve Üniversite Hastanesi hayvan tesis (UTE) Nantes hayvan yetiştirme ve bakım, hücresel ve tissular çekirdek tesis Nantes Üniversitesi (MicroPICell) görüntüleme için görüntüleme için Nantes teşekkür uzman teknik yardım. Bu eser INSERM, CNRS, Université de Nantes, Institut National du kanser (Inca #PLBio2014-155), Ligue Nationale contre le kanser (AO Bölgelerarası 2017) ve Avrupa konsorsiyumu dönemi-Net Transcan2 tarafından finanse edildi (Immunoglio). Takım Fondation pour la Recherche Medicale (DEQ20170839118) tarafından finanse edilmektedir. Bu eser IGO LabEX bağlamında gerçekleşmiştir ve IHU Cesti programları, desteklenen Ulusal Araştırma Ajansı Investissements d'Avenir yolu ile tarafından programları ANR-11-LABX-0016-01 ve ANR-10-IBHU-005, anılan sıraya göre. IHU Cesti projesi de Nantes Metropole ve Pays de la Loire bölgesi tarafından desteklenmektedir. Yazarlar Chirine Rafia el yazması düzeltmek yardım sağlamak için teşekkür ederiz.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
PBMCsfrom 3 different healthy donors
BLCLsfrom 3 different donors
Roswell Park Memorial Institute medium (RPMI)Gibco31870-025
FCSDutscherS1810-500
L-glutamineGibco25030-024
penicillin/streptomycinGibco15140-122
IL-2Novartisproleukin
PHA-LSigmaL4144
Stereotaxic frameStoelting Co.51600
Mouse adaptator for stereotaxic frame  Stoelting Co.51624
microsyringe pump injector WPIUMP3-4
NanoFil SyringeWPINF34BV-2
NSG miceCharles RiverNSGSSFE07S
KetamineMerialImalgène 1000
XylazineBayerRompur 2%
ScissorsWPI201758
ForcepsWPI501215
OmniDrill 115/230VWPI503598
Vicryl 4-0EthiconVCP397H
XylocaineAstrazeneca3634461

Referanslar

  1. Stupp, R., Roila, F. Malignant glioma: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up. Annals of Oncology. 20 Suppl 4, 126-128 (2009).
  2. Weller, M., Cloughesy, T., Perry, J. R., Wick, W. Standards of care for treatment of recurrent glioblastoma--are we there yet? Neuro-Oncology. 15 (1), 4-27 (2013).
  3. Chen, S. H., Shine, H. D., Goodman, J. C., Grossman, R. G., Woo, S. L. Gene therapy for brain tumors: regression of experimental gliomas by adenovirus-mediated gene transfer in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (8), 3054-3057 (1994).
  4. Choi, P. J., Tubbs, R. S., Oskouian, R. J. Emerging Cellular Therapies for Glioblastoma Multiforme. Cureus. 10 (3), e2305(2018).
  5. Zhu, L., et al. Targeting and Therapy of Glioblastoma in a Mouse Model Using Exosomes Derived From Natural Killer Cells. Frontiers in Immunology. 9, 824(2018).
  6. Chung, D. S., Shin, H. J., Hong, Y. K. A new hope in immunotherapy for malignant gliomas: adoptive T cell transfer therapy. Journal of Immunology Research. 2014, 326545(2014).
  7. Vauleon, E., Avril, T., Collet, B., Mosser, J., Quillien, V. Overview of cellular immunotherapy for patients with glioblastoma. Clinical and Developmental Immunology. 2010, (2010).
  8. Brown, C. E., et al. Regression of Glioblastoma after Chimeric Antigen Receptor T-Cell Therapy. The New England of Journal of Medicine. 375 (26), 2561-2569 (2016).
  9. Jarry, U., et al. Stereotaxic administrations of allogeneic human Vgamma9Vdelta2 T cells efficiently control the development of human glioblastoma brain tumors. Oncoimmunology. 5 (6), e1168554(2016).
  10. Dutoit, V., et al. Exploiting the glioblastoma peptidome to discover novel tumour-associated antigens for immunotherapy. Brain. 135 (Pt 4), 1042-1054 (2012).
  11. Joalland, N., et al. IL-21 Increases the Reactivity of Allogeneic Human Vgamma9Vdelta2 T Cells Against Primary Glioblastoma Tumors. Journal of Immunotherapy. 41 (5), 224-231 (2018).
  12. Clemenceau, B., et al. Effector memory alphabeta T lymphocytes can express FcgammaRIIIa and mediate antibody-dependent cellular cytotoxicity. The Journal of Immunology. 180 (8), 5327-5334 (2008).
  13. Abdelwahab, M. G., Sankar, T., Preul, M. C., Scheck, A. C. Intracranial implantation with subsequent 3D in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas. Journal of Visualized Experiments. (57), e3403(2011).
  14. Jarry, U., et al. Treg depletion followed by intracerebral CpG-ODN injection induce brain tumor rejection. Journal of Neuroimmunology. 267 (1-2), 35-42 (2014).
  15. June, C. H., O'Connor, R. S., Kawalekar, O. U., Ghassemi, S., Milone, M. C. CAR T cell immunotherapy for human cancer. Science. 359 (6382), 1361-1365 (2018).
  16. Baruch, E. N., Berg, A. L., Besser, M. J., Schachter, J., Markel, G. Adoptive T cell therapy: An overview of obstacles and opportunities. Cancer. 123 (S11), 2154-2162 (2017).
  17. Bryant, N. L., et al. Characterization and immunotherapeutic potential of gammadelta T-cells in patients with glioblastoma. Neuro-Oncology. 11 (4), 357-367 (2009).
  18. Pereboeva, L., Harkins, L., Wong, S., Lamb, L. S. The safety of allogeneic innate lymphocyte therapy for glioma patients with prior cranial irradiation. Cancer Immunology, Immunotherapy. 64 (5), 551-562 (2015).
  19. Bailey, S. L., Carpentier, P. A., McMahon, E. J., Begolka, W. S., Miller, S. D. Innate and adaptive immune responses of the central nervous system. Critical Reviews in Immunology. 26 (2), 149-188 (2006).
  20. Louveau, A., et al. Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels. Nature. 523 (7560), 337-341 (2015).
  21. Menei, P., et al. Local and sustained delivery of 5-fluorouracil from biodegradable microspheres for the radiosensitization of glioblastoma: a pilot study. Cancer. 86 (2), 325-330 (1999).
  22. Menei, P., et al. Stereotaxic implantation of 5-fluorouracil-releasing microspheres in malignant glioma. Cancer. 100 (2), 405-410 (2004).
  23. Salot, S., et al. Large scale expansion of gamma 9 delta 2 T lymphocytes: Innacell gamma delta cell therapy product. Journal of Immunological Methods. 326 (1-2), 63-75 (2007).
  24. Bennouna, J., et al. Phase-I study of Innacell gammadelta, an autologous cell-therapy product highly enriched in gamma9delta2 T lymphocytes, in combination with IL-2, in patients with metastatic renal cell carcinoma. Cancer Immunology, Immunotherapy. 57 (11), 1599-1609 (2008).
  25. Singh, S. K., et al. Identification of human brain tumour initiating cells. Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

mm noloji ve enfeksiyonsay 139kanserglioblastomaimm noterapievlat edinen transferstereotaxylenfositler

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır