Bir fare oyalama Osteogenesis modeli

Özet

Biz özel yapım bir şıkkı kullanılarak geliştirilmiş bir fare tibial oyalama osteogenesis modeli mevcut. Bir fare kullanımı bir analizi hedef olarak araştırma ilerlemek için avantajlıdır.

Özet

Oyalama osteogenesis () iskelet doku rejenerasyonu hücre transplantasyonu olmadan içerir bir cerrahi işlemdir. Bir modeli aşağıdaki üç aşamadan oluşur: gecikme süresi aşamasından sonra osteotomi ve yerleşimini dış şıkkı; yavaş yavaş ve sürekli olarak ayrılmış kemik uçları neyin deli oyalama faz; ve konsolidasyon faz. Özel yapım bu şıkkı yapmak için kullanılan iki eksik akrilik reçine yüzük ve bir genişleme vida oluşur. İşlemi bir kalıp silikon izlenim malzeme ile yapım ve ısmarlama şık oluşturma başlatıldı. Diş reçine silikon izlenim malzemeden yapılmış kalıp dökülür ve ısmarlama şıkkı için gerekli eksik reçine halkaları oluşturmak için polimerize için izin verildi. Bu halkalar şeffaf reçine kullanarak bir genişleme vida ile tespit edildi. Bu yaklaşım ile oluşturulan özel şık fareler tibia bağlıydı. Tibia uzağından, 25 G iğneler bir çift kullanarak aygıt 27 G iğneler bir çift klemple, tespit edildi ve akrilik reçine. 5 gün sonra gecikme süresi, oyalama, 0.2 mm/12 h bir oranda başlatıldı. Uzatma 3.2 mm toplam bir boşluk ortaya çıkan 8 gün boyunca devam edildi. Fareler 4 hafta oyalama sonra kurban edildi. Oyalama boşluğu kemik oluşumu radyografi ve histoloji kullanılarak doğrulandı.

Giriş

Oyalama osteogenesis () bir iskelet bozuklukları, ekstremite uzunluk tutarsızlıklar, kemik defektleri ve uzuv deformiteleri¹gibi çeşitli için kurulan tedavi yöntemidir. Bu benzersiz tedavi stratejisi "Ilizarov tarafından önerilen gerginlik stres prensibi" temel alır. Olgun kemik kurulan²olana Yöntem birkaç gün gecikme süresi, birkaç hafta için etkin oyalama ve konsolidasyon için birkaç ay için gerektirir.

Yerel hipoksik koşulları tıkanıklık nedeniyle kan akışı^3,4 ve mekanik stimülasyon^5,6 iyileşme sürecinde özellikle önemlidir. Hipoksi indüklenen angiogenez oksijen, besin, çözünür faktörler ve hücreleri yoluyla kan akışını yerel olarak doku onarımı için gerekli taşır. Uzatma işlemi tarafından mekanik stimülasyon mezenkimal kök hücre, kemik oluşumu, kalsifikasyon ve remodeling farklılaşma gibi biyolojik reaksiyonları neden olur. Seri tedavi sadece da yumuşak dokular, sinir, kas, kan damarları ve cilt dokular, kök hücre nakli için gerek kalmadan da dahil olmak üzere sert doku oluşumunu sağlar. Bu nedenle, bir modeli çeşitli dokularda yenilenme analiz etmek için mükemmel bir model olarak kabul edilir.

Tavşan ve köpek temel araştırma yapmak için en çok kullanılan hayvanlar vardır; Ancak, bu hayvanlar için birkaç analiz araçları mevcuttur. Daha ayrıntılı bir analiz bir fare modeli kullanımını kolaylaştırır. Nakavt fareler kullanarak deneyler için özellikle uygundur. Ancak, bir fare bir deneysel hayvan olarak kullanırken, bir uzantısı aygıt oluşturulmalıdır. Burada, biz mevcut bir fare tibial model özel yapım bir şık bir diş laboratuvar araç ve bir önceki çalışmada kullanılan tekniği kullanılarak oluşturulan kullanılarak geliştirilmiş.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Tüm deneylerin hayvan bakım ve kullanım Komitesi Kuruluşumuzun tarafından onaylanmış protokoller uyarınca gerçekleştirilmiştir. Önce yordamı tüm aletleri sterilize.

1. özel şık oluşturmak için hazırlanması bir kalıp

1. Parafin mumu (145 mm x 74 mm) bir levha ile şık, Evans balmumu carver kullanarak bir parçası olan iki eksik yüzük (dış çap, 20 mm; iç çapı, 10 mm), olun.
   1. 4 aynı adet olun. Gaz yakıcı ile ısıtılan bir balmumu spatula kullanın. Dört yüzük bir kalınlık, 5 mm. sağlamak alan genişleme vida ve iğne, 8 x 2 mm ve 5 mm x 2 mm sırasıyla Evans balmumu carver (Şekil 1A, 1B) ile yığın.
2. Balmumu desen silikon izlenim malzeme embed ve reçine halkaları (Şekil 1C) için bir kalıp oluşturun.
3. Silikon kür sonra izlenim malzemeleri (yaklaşık 5 dk oda sıcaklığında), balmumu desen temizleyin.

2. özel şık imalatı

1. Vazelin ince ve eşit olarak silikon kalıp için geçerlidir. 3 g polimerizasyon diş reçine mix ve hemen silikon kalıp içine dökün. 5 min için oda sıcaklığında (RT) ayarlayın.
2. Polimerli reçine yüzük kalıptan çıkarın ve bir karbür bar ve burr (yaklaşık 1 dakika) kaldırmak için bir diş micromotor Lehçe. İki reçine yüzük her ısmarlama şıkkı için gereklidir.
   1. Reçine halkalar (Şekil 1D) gerekli sayıda oluşturmak için yordamı yineleyin.
3. Yaklaşık 2 mm reçine Yüzüklerin yardımcı programı balmumu ile düzeltmek için ve tamamen şeffaf reçine ile genişleme vida dışına güvenli bir boşluk bırakın. 5 min için reçine RT. ayarla Polimerizasyon tamamlandıktan sonra genişleme vida düğmesi (Şekil 1E) kaldırın.

3. cerrahi Protokolü

1. 8 haftalık erkek fare kullanın.
2. Anestezi mayi iğne medetomidine hidroklorid vasıl 0.3 mg/g, 4 mg/kg midazolam ve butorphanol tartarat 5 mg/kg vücut ağırlığı ile neden.
   1. Dikkatle tıraş ve cerrahi alan % 10 iyot solüsyonu ile dezenfekte edip sonra % 0.5 lidokain hidroklorür, sağ alt ekstremite yönetmek.
3. Bacak No. 15 neşter ile daha düşük bir boyuna cilt kesi (yaklaşık 15 mm uzunluğunda) sağ olun. Açık açık tüm kapaklarini kaldırmak değil dikkat çekici temel kasları ayırın. Fibula kolayca ulaşmak için dışarıdan yaklaşım. Fibula makasla kesme.
4. Ayak bileği dar ince steril forseps ile kavramak ve steril 27 G iğne topuk yaklaşık 5 mm'den kemik bir delik açmak için kullanın. İğne deri, kemik ve cilt bu sırayla nüfuz. İğne nüfuz eder, böylece iğne 15 mm ipucu ve kök nipper ile kesilmiş.
   1. Aynı şekilde, yaklaşık 2-3 mm proksimal başka bir delik açın. Ayak bileği tutun ve diz altında iki 25 G iğneler aynı şekilde geçirin. Sonra iğneler nüfuz, ipuçları ve kökleri nipper (Şekil 1F) ile kesti.
5. Öyle ki uzantısı yönüne paralel ısmarlama şıkkı yerleştirin. İğneler ve aygıt Aygıt oluklar doldurmak için yeterli polimerizasyon diş reçine ile düzeltmek. Polimerizasyon (yaklaşık 5 dk) tamamlamak bekleyin (Şekil 1G).
6. Çevre dokular zarar vermemeye dikkat et. Diaphysis tuzlu çözüm (1-2 mL) uygulanırken bir çok ince kesme diski kullanarak Tibia orta kesim.
7. 4-0 naylon dikiş yarayla kapatın.
8. Buprenorfin (0.1 mg/kg), subkutan enjeksiyon hemen ameliyat sonrası analjezi için ver. Buprenorfin ameliyat sonrası gün boyunca 7 ve gerektiği bundan sonra her 12 h devam.

4. oyalama Protokolü

Not: Gecikme süresi ve oyalama oranı üzerinde çeşitli raporlar vardır, ancak temsilcisi iletişim kuralları burada gösterilir.

1. 5 gün sonra gecikme süresi, oyalama, 0.2 mm/12 h bir hızda başlatın. Uzantıları, hızlı büyümenin vida bağlı PIN kullanmak. Uzantısı vida (Şekil 1E) bağlı sarı ok yönünde hareket ettirmek toplu iğne.
2. Anestezi sırasında uzantısı gerekli değildir. Küçük parmak ve palm ile kuyruk tutun ve işaret parmağı ve başparmak ile uzantısı aygıtını düzelt.
3. Uzantısı (1/4 dönüş için 0.2 mm) gerçekleştirin. 3.2 mm toplam bir boşluk neden olur 8 gün boyunca uzatma devam edin.

5. analiz

1. Radyografi Analizi: uzantısı tamamlanmasından sonra genel anestezi altında bilgisayarlı tomografi ile kemik rejenerasyon %2.0 isoflurane kullanarak değerlendirmek.
   Not: Bakım Uzantısı aygıt konumu ile ilgili olarak alınması halinde, bunu bile bağlı aygıt ile basit radyografi ile değerlendirmek mümkün.
2. Histolojik Analizi: aparatı dikkatli bir şekilde çıkarın çok kırık oyalama sitesi örnekleme sırasında neden olarak değil. Örnek % 10 tarafsız tampon formalin oda sıcaklığında 24 h için fix. Morse'un çözüm (% 10 sodyum sitrat, %20 formik asit), gecede 4 ° C'de decalcify

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Şekil 1A ve 1B eksik halkalar (dış çapı, 20 mm iç çapı, 10 mm; kalınlığı, 5 mm) parafin ile mevcut. İki balmumu desen silikon izlenim malzeme içinde gömülü ve bir kalıp reçine halkaları (Şekil 1C) için kuruldu. Polimerli reçine hemen bu kalıp içine dökülür ve reçine halkalar (Şekil 1D) elde edilmiştir. Özel yapım bir şıkkı iki ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Büyük bir hayvanı deneysel bir model olarak kullanıldığında, bir hazır uzatma cihazı kullanılabilir ve iyi fiksasyonu elde edilir ve uzatma işlemi ve uzantısı miktarını değerlendirmek kolaydır. Ancak, bir fare deneysel bir model olarak kullanıldığında, bazı veya tüm ekipman geliştirmek gereklidir. Isefuku ve ark. ve Tay vd. cihazın yaptı ve bir fare modeli^7,8yaratılmıştır. Carvahjo ve ark. kabul hazır geni...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Paraffin wax	YAMAHACHI DENTAL MFG. CO.	-	For preparation a mold for resin rings
Labocone putty	GC Corporation	-	For preparation a mold for resin rings
Utility wax	GC Corporation	-	For preparation a mold for resin rings
Expansion screw	Ortho Dentaurum	600-301-30	Component of custom-made distractor
Unifast III	GC Corporation	-	Immediate polymerization resin Component of custom-made distractor
Ortho Crystal	NISSIN	-	Transparent resin Component of custom-made distractor
25 G needle	TERUMO	NN-2516R	For custom-made distractor
27 G needle	TERUMO	NN-2719S	For custom-made distractor
ICR mouse	Chubu Kagaku Shizai Corporation	-	Experimental animal
Somnopentyl	Kyoritsu Seiyaku	-	Pentobarbital sodium salt
Isoflurane	FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation	099-06571	Isoflurane inhalation solution