JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Burada, kurulan hücre hatları anaerobik uzun vadeli ekimi sağlar yeni bir yöntem açıklanmaktadır. Test edildi en fazla yaşam süresi 17 gün var. Bu yöntem sitotoksik ajanlar test ve anoxically hücreleri çoğaltma Fizyoloji keşfetmek için uygundur.

Özet

En mukozal yüzeyler tümörler ve kök hücre nişler degradelerin yanı sıra, anoksik vücudun coğrafi alanlardır. Önceki çalışmalar gösteriyor ki kuluçka normoxic (%5 CO2 havada) içinde veya hipoksik (düşük oksijen düzeyleri) koşulları takip bir anoksik kuluçka (ücretsiz oksijen yokluğu) sonuçlarına göre sınırlı canlılık (2-3 gün). Roman bir metodoloji sağlayan bir anoksik hücre ekimi (en az 17 gün; en uzun süre test için) geliştirilmiştir. En önemli bir özelliği Bu metodoloji, oksijensiz sisteme giriliyor sağlamaktır. Bu medya ve reçeteye göre sarf tüpler, yemekler, şişeler ve pipetler bir anaerobik gaz karışımı (H2, CO2, N2) ile malzeme anoksik (oksijen olmayan) ortamına equilibrate izin vererek takip gaz giderme tarafından elde edilir kullanım öncesinde. Ne zaman elde photomicrographs elde edilen filmler eserler içermediğinden emin olmak için ek bakım uygulanmalıdır. Oksijen yokluğunda, hücre morfolojisi önemli ölçüde değişmiş. İki farklı morphotypes tüm hücreler için anaerobik yetiştirilen belirtilmiştir. Yeteneği büyümeye ve oksijen yokluğu memeli hücreleri korumak için Hücre fizyolojisi, polymicrobial etkileşimleri ve Roman kanser ilaç geliştirme biyosentetik yollar karakterizasyonu analizlerine uygulanabilir.

Giriş

Solid tümör, kök hücre nişler ve bu mukozal yüzeylerde astar hücrelerden düşük oksijen düzeylerinde, kanda oksijen azlığı1,2,3,4de dahil olmak üzere ortamlarda adlı biri yok. Normal fizyolojik Birleşik Devletleri, hipoksi, kanda oksijen azlığı (oksijen olmaması)5,6ötesinde oksijenasyonu değişir. Atmosferik oksijen olumsuz memeli hücre çoğaltma etkiler ve o vitro hücre büyümesini tükenmiş oksijen koşullar altında optimize edilebilir gerçekleşme 1970'lerde bildirildi. Richter vd. 7 1-%3 oksijen düzeyleri (hipoksi) kaplama verimliliği ile karşılaştırıldığında atmosferik oksijen (% 20) gelişmiş gösterdi. İnsan diploit hücre ömrü hipoksik kültür koşulları8' de genişletilir.

Vivo, hipoksik koşullar ortaya oksijen depoları tükenmiş (Örneğin, yoğun egzersiz sırasında), olduğunda neyin ATP üretimi fermantasyon (anaerobik solunum) için gelen aerobik solunum kas iskelet ile açık olduğundan laktik asit9son ürünü. Patolojik olarak, kanserli tümörleri, iç içinde kitle için zavallı vaskülarizasyon nedeniyle anoksik hipoksik10tümördür. Tümör iç sınırlı perfüzyon etkisi bağımsız olarak zorunlu anaerobik1tarafından kolonize tümör iç tarafından doğrulanır. Mechanistically, tümör hücre hayatta hipoksi hipoksi-indüklenebilir faktörü 1-alfa Gen ifadesinin yalnızca bağımlı olduğu düşünülmektedir (HIF1-alfa), ilk spontan yanıt hipoksi4,11 olduğu , 12. HIF1-Alfa HIF1bağlamak Isı şok proteinleri tarafından hipoksik koşullarda indüklenen-Alfa organizatörü ve upregulate Gen transkripsiyonu12. Bu ısı şok proteinleri tümör hipoksik microenvironment görülen çeşitli fenotipleri indüksiyon yardım inanılıyor. Bu fenotipleri hücre zarı Glikoz taşıyıcı artan bir ifadesidir ve glikoliz (Warburg etkisi)13oranı sergi. Mitokondriyal Oksidatif fosforilasyon fermantasyon laktat anahtarından sonucudur.

Anoksik hayatta kalma glikoz hayatta kalma fenomen14,15desteklemek için alternatifler de kullanabilir. En iyi okudu memeli yaklaşık 20 dakika oksijen ile fruktoz tahrik glycolytic fermantasyon yolu14olmadan yaşayabilir kör fare örnektir. Alternatif bir uyum içinde belirli balık oluşur (Örneğin,'önemli ölçüde daha uzun hayatta kalabileceği sazan [Carassius sp.], zaman glikoliz etanol ile terminal yan ürün kullanarak dönemleri)15. Her iki durumda da, fermantasyon oksijen yokluğunda yaşama etkinleştirme metabolizma kullanıyor. Geçerli anoksik hayatta kalmak için bu kadar uzun HIF1hipotezdir-Alfa hipoksi, mitokondrial solunum sırasında aktif oksijen ihtiyacını ortaya çıkar olmadan anaerobik16altında. Ayrıca, hücreleri hücre hayatta kalma17' ye zararlı olarak kanıtlamak olabilir oksidatif stres önlemek bu yana fermantatif bir yol kullanımı hipoksik/anoksik hayatta kalmak için tümör hayatta kalma artırır öne ise. Bu postülatı cardiomyocytes, hipoksi tümör hücre17tarihinde yerleştirilen oksidatif stresi azaltır gösteren bir çalışmada tarafından desteklenmektedir.

Bugüne kadar bir fermantatif yol anoksik memeli hücre hayatta kalmak için temel doğası literatürde, kusura bakma ama, bir yetersizlik kültür memeli hücreleri oksijen 3 günden uzun olmaması için büyük ölçüde kökleşmiş. Ancak, bakteriler glikoliz anaerobik hayatta kalmak için bir alternatif oluşur. Bazı bakteriler, azot veya sülfat (arasında diğer bileşikleri) yokluğunda sitokrom oksidaz sistemi oksijen18elektron alıcısı olarak hizmet verebilir. Her ne kadar son evrensel ortak atadan uzaklaşan beri paralel olarak bakteriyel ve ökaryotik evrim oluştu, bu mitokondri 1.542 milyon yıl önce okyanuslarda19 oxygenation hücrelere enerji sunuyorlardı tahmin edilmektedir . Hücreler zaman oksijen yokluğu 3 gün daha uzun süreler için işlev olabilir varsaymak makul çünkü araştırmacılar izole mitokondri elektron alıcısı olarak nitrit ile oksijen yokluğu ATP üretebilir göstermiştir 20 , 21 , 22 , 23. Bu çalışmada açıklanan metodoloji anaerobik memeli hücre büyüme çok sayıda hücre hatları için bir yardımcı program vardır.

Protokol

1. çeşitli memeli hücre satırlarını anaerobik kültür için ortam hazırlamak

  1. Anoksik hücre kültür25tam PS-74656 orta yapmak.
    1. 17.25 g nitrit 50 ml distile deiyonize su ile çözülerek steril nitrit hisse senedi çözüm (5 M; 100 x) yaptıktan sonra bu sterilize etmek için filtre.
    2. Nitrit hisse senedi çözüm düşük glikoz DMEM (glikoz 1 g/L) 50 mL başına 0.5 mL 110 mg/L L-glutamine, 584 mg/L sodyum pyruvate ve % 10 fetal Sığır serum ile ekleyin (FBS; ısı-inaktive olur).
      Not: FBS konsantrasyonu % 10 toksik büyük kullanımı. Not, bir kanser hücre satır test nitrit (MDA-MB-231, meme kanseri hücre satır) ile media için düşük tolerans vardı ve böylece, nitrit, yokluğunda büyüdü. Buna ek olarak, PS-74656 orta test edildi tüm hücre satırlarını büyüme desteklenen rağmen (n = 9), belirli hücre hatları (Örneğin, Vero hücreleri) sergilenen daha yüksek hücre konsantrasyonları ve yüksek glikoz (4,5 g/L) DMEM ile daha yüksek bir canlılık içinde PS-74656 25.
    3. Orta 20 mL steril 50 mL konik santrifüj tüpü yerleştirin. Kap sıkın değil; gevşek olmalıdır.
    4. Orta de-gaz tüp bir vakum çan kavanoza koyarak bir yaklaşık 45 ° açılı orta yüzey alanı en üst düzeye çıkarmak için.
    5. Bir vakum pompası veya eşdeğeri, oda sıcaklığında kullanarak bir vakum uygulanır. Kabarcıklar artık (24-48 h) gözlenir kadar vakum korumak.
    6. Kavanozdan tüpü çıkarması ve mühürleme hava giriş Orta içine en aza indirmek için tüp kap, hemen kapatın.
    7. Tüp ticari anaerobik odasına koyun.
    8. Tüp kapağı gevşetin ve atmosfer bu en az 24 saat için odasında anaerobik gaz karışımı ile equilibrate için tüp izin vermek.
      Not: Bu kullanılana kadar orta odasında kalır. Tüp işleminizi, floş hızlandırmak için steril transfer pipet kullanarak anoksik gaz karışımı ile en az 3 x H2, CO2ve N oluşan anoksik gazı ile doldurulmuş2.
    9. Tüm borular (10-15 dk) tüp mühürleme ve odasında yerleştirmeden önce yukarıda açıklandığı gibi anaerobik odasında yerleştirilen degas. Kullanmadan, 1.5-2 mL transfer pipetler kullanarak anaerobik gaz karışımı ile temizleme veya en az 3 x ile anoksik temizlenen pipet İpuçları gaz.
    10. Odasında anaerobik iken, steril degassed mikro-santrifüj tüpü için orta 100 µL kaldırmak ve bir oksijen sondası odası içinde kullanarak çözünmüş oksijen için test edin.
      Not: Oksijen elektrot kullanmadan üreticinin Protokolü önce kalibre edilmiş. Düzgün bir şekilde degassed ve denge anaerobik gaz karışımı medya okumaları 0.
      Dikkat: 0.3 ppm oksijen okumaları, orta equilibrate için daha fazla zaman gerekli olduğundan anaerobik odası medyada kuluçkaya devam.

2. anoksik çeşitli memeli hücre satırlarını tarımı

  1. Belirlenen gün -1
    1. Hücreler (37 ° C, % 5 CO2) % 90 izdiham hücreleri yeterli sayıda üç 24-şey tabak (% 80 izdiham) sağlamak anoksik ve normoxic kültür kontrolü için bir T150 şişeye büyümeye.
      Not: Bu çalışma için HeLa 229 ve Vero hücreleri kullanılmıştır. Bu iletişim kuralı ayrıca test ve büyüme ve yedi diğer hücre hatları25bakımı için başarılı oldu.
    2. Orta balonun aspirasyon tarafından kaldırmak ve HBSS 10 mL ile yıkayın.
    3. Orta tripsin 5 mL ile değiştirin. Hücreleri görsel olarak plastik ayırmak kadar şişeye kışkırtmak. Tripsin çoğunu Aspire edin sonra şişeye yapışık hücreleri çıkarmak için dokunun. Yüksek glikoz DMEM 10-15 mL ekleyin (4,5 g/M glikoz, 110 mg/L L-glutamine, % 10 FBS, gentamisin 50 µg/mL) tripsin devre dışı bırakabilirsiniz için.
    4. Tüm hücre kümeleri bozulduğu kadar 25 mL pipet kullanarak hücreleri triturate.
    5. Hücreleri saymak ve standart hemasitometre ve trypan mavi boya hariç tutma yöntemini veya otomatik eşdeğer kullanarak canlılığı belirlemek.
    6. Yüksek glikoz DMEM hücrelerde askıya alma 105 hücre/mL x 2,24 hücre yoğunluğu için yukarıda belirtildiği gibi.
    7. 24-iyi doku kültürü plaka wells için hücre süspansiyon 1 mL ekleyin (2,24 x 105 hücreleri/iyi; % 80 izdiham). Anoksik kültür ve başka bir denetim normoxic kültür için tohum 1 plaka.
    8. Normoxic koşulları (%5 CO2) için 24 saat içinde 37 ° C'de hücreler kuluçkaya.
      Not: Hücreleri çeşitli iyi ölçekli levha kaplama. Bakım tamamen atmosferik gaz temizlemek için icra sürece ancak hücreleri şişeler anoksik büyüme için tohum oksijen getirilmesi riskini sisteme çalışır.
  2. Belirlenen gün 0
    1. Normoxic kuluçka 24 saat sonra plakaları anoksik büyüme için anaerobik odasına (ticari anaerobik odası; yerleştirin. Şekil 1).
    2. Hemen hangi anaerobik odasına 24 h için iklime alıştırılacağı antibiyotik ücretsiz de-gazla PS-74656 orta orta değiştirin. Nemli bir havlu ile bir kapta plaka yerleştirin ve gevşek nem korumak için kapatın.
      Not: Tabakları normoxic büyüme için aynı şekilde tüm tedaviler atmosferik koşullar altında yapılır özel durum ele alınır.
  3. Belirlenen gün 1
    1. Gün 1, anaerobik Kuluçka kuluçka %10 H2, % 10 CO2ve % 80'i N2standart anaerobik gaz karışımı içeren ticari anaerobik odasında 24 saat sonra başlar.
    2. Hücreleri çeşitli süreler için kuluçkaya.
    3. Zaman içindeki renk değişimi için anaerobik orta izlemek.
      Not: Kırmızı-turuncu pembe bir renk kayması zaman orta değiştirmek için sinyal gönderir. Bu gerçekleşmesi için 2 hafta sürebilir. Bir renk vardiya orta kırmızı-turuncu sarı bir bakteriyel kontaminasyon varlığını gösterir.
    4. Orta için pembe kırmızıdan değiştiğinde, runagate hücreleri tarafından aspirasyon kaldırın.
    5. Yer degassed ve anaerobik gaz runagate hücrelerde emişli harcanan ortamıyla microfuge tüpler equilibrated, tüpler mühür güvenli ve sonra onları (326 gx; 10 dakika oda sıcaklığında) santrifüj kapasitesi emin yaparken yakın. Hemen iyi emişli ortamı yeni degassed PS-74656 orta 1 mL ile değiştirin.
    6. Microfuge tüp pelleted hücrelerle açmadan önce anaerobik odası yerleştirin. Harcanan orta Aspire edin ve taze degassed PS-74656 orta ve 1 ml microfuge tüp toplam hacmi ile değiştirin.
    7. Hücreleri tüm tüpünden 24-iyi doku kültürü plaka bir kuyuda dönün.

3. fenotipik hücre farklılaşması anaerobik kültürlü hücrelerinin mikroskopisi tarafından değerlendirilmesi

  1. Anaerobik odası ise, plaka anaerobik gaz karışımı ile boşaltılan resealable kutusuna yerleştirin ve kutusunu kapatın.
    Not: Nem ve plaka kurumasını önlemek için nemli kağıt havlu kutusu içermelidir. Onlar ince olduğundan Mikroskopi için sandviç paketi en iyi iş.
    1. Hücreleri mikroskop altında gözlemlemek için tamamen çanta mühür ve odasından kaldırın.
    2. Dikkatle plastik torba plaka üzerinde streç, bir ters faz kontrast mikroskobu ile fotoğraf makinesi eki kullanarak hücreleri incelemek ve photomicrographs farklı büyütme oranlarında al.
    3. Plaka mühürlü çantada odasına dönün ve kuluçka 2.3.3. adımda anlatıldığı gibi devam etmemiz gerekiyor.
    4. Süspansiyon içinde olan runagate hücreler ayrı ayrı analiz için 2.3.5. adımda anlatılan adımları izleyin.
      Not: Bu hücreler daha sonra aerobik test etmek için kullanılabilir veya bu belirli nüfusu testleri için anaerobik odasına döndü.

Sonuçlar

Bu iletişim kuralı gücünü verdiği destek, uzun ömürlü ve birden çok hücre satırı büyüme ve bir derin değiştirme ve ıraksak evrim süreçleri sonucu hücre morfolojisi25vardır tanıma yatıyor. Bu çalışmanın en önemli unsuru transfer ve sıkı anaerobiosis altında hücrelerin bakımı sağlamaktır. Bu bir anaerobik odası (Şekil 1) iletişim kuralının en üst düzeye çıkarmak için düzenlenen ve hücreler...

Tartışmalar

Bu yöntem için uzun bir süre oksijen yokluğu kültürlü ilk memeli hücreleri temsil eder. Geçerli gözlem dayalı, anoksik büyüme özelliği üzerinden fermantatif olmayan bir yol nereye fenotip sapma anaerobik büyüme sonuçlandı memeli hücre hatları28arasında evrensel gibi görünüyor. Bu test tüm hücre hatlarında gözlendi. Anaerobik ekimi ile artan oranlarda hücreleri yuvarlak oldu, süspansiyon gibi nüfus geliştirilen ve çoğaltmak başardık. Orta hücre tipi i...

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Yazarlar Midwestern Üniversitesi araştırma Office ve sponsorlu programlar onların destek için teşekkür ederiz.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Whitney A35 anaerobic chamberDon Whitley Scientific Microbiology InternationalThe ability to remove the front of the chamber makes it easy to put instruments inside without concern about getting them through the portals.
CO2 incubatorFisher Scientific3531
Tissue Culture HoodLabconcoDO55735
pipet aidDrummond4-000-100
sterile transfer pipetsSanta Cruzsc-358867
50 cc sterile conical centrifuge tubesDOT451-PG
vaccum jarNalgene 111410862889BTA-Mall 5311-0250
DMEM high glucose (4.5 g/L)CellGro10-017-CM
DMEM low glucose (1 g/L)CellGro10-014-CV
FBSVWR1500-500
HBSSVWR20-021-CV
trypsinVWR25-052-CI
gentamicinGibco15750-060
sterile pipetsCellTreat229210B, 229205B
Tissue culture flask (T75 or T150)Santa Cruzsc-200263, sc-200264
24 well tissue culture treated dishesDOT667124
glad ziplock sandwich bagsZiplocCostco
inverted phase microscope (10, 20 40x objectives with camera mont)Nikon EclipseTS100
trypan blueInvitrogenT10282
hemocytometerInvitrogenC10283
Countess Automated Cell CounterLife TechnologiesAMQAF1000
Rainin microtiter pipetsMettler ToledoRainin Classic Pipette PR-100
microtiter tipsSanta Cruz Biotechnologysc-213233 & sc-201717 
test tube rack (50cc tubes)The Lab DepotHS29050A
sodium nitriteSigmahttps://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigald/237213?lang=en&region=US
clear boxes with lidsRosti MepalRubber maid
paper towelsIn House
cell scraperCellTreat229310
PBSIn house prepared
70% EthanolFisher Scientific64-17-5
microcentrifuge tubes sterileSanta Cruzsc-200273
biohazard bags with holder (desktop)Heathrow ScientificHS10320
Nitrile GlovesVWR89428
oxygen electrodeeDAQEPO354
pH meterJenway3510
pH paper/ pHydrionSigma AldichZ111813

Referanslar

  1. Cummins, J., Tangney, M. Bacteria and tumours: causative agents or opportunistic inhabitants?. Infectious Agents and Cancer. 8 (1), 11 (2013).
  2. Liao, J., et al. Enhanced efficiency of generating induced pluripotent stem (iPS) cells from human somatic cells by a combination of six transcription factors. Cell Research. 18 (5), 600-603 (2008).
  3. Park, I. H., Lerou, P. H., Zhao, R., Huo, H., Daley, G. Q. Generation of human-induced pluripotent stem cells. Nature Protocols. 3 (7), 1180-1186 (2008).
  4. Semenza, G. L. HIF-1: mediator of physiological and pathophysiological responses to hypoxia. Journal of Applied Physiology. 88 (4), 1474-1480 (2000).
  5. Biedermann, L., Rogler, G. The intestinal microbiota: its role in health and disease. European Journal of Pediatrics. 174 (2), 151-167 (2015).
  6. Cui, X. Y., et al. Hypoxia influences stem cell-like properties in multidrug resistant K562 leukemic cells. Blood Cells, Molecules, and Diseases. 51 (3), 177-184 (2013).
  7. Richter, A., Sanford, K. K., Evans, V. J. Influence of Oxygen and Culture Media on Plating Efficiency of Some Mammalian Tissue Cells. JNCI: Journal of the National Cancer Institute. 49 (6), 1705-1712 (1972).
  8. Packer, L., Fuehr, K. Low oxygen concentration extends the lifespan of cultured human diploid cells. Nature. 267, 423 (1977).
  9. Warburg, O. On the origin of cancer. Science. 123 (3191), 309-314 (1956).
  10. Döme, B., Hendrix, M. J. C., Paku, S., Tóvári, J., Tímár, J. Alternative Vascularization Mechanisms in Cancer. The American Journal of Pathology. 170 (1), 1-15 (2007).
  11. Jewell, U. R., et al. Induction of HIF-1α in response to hypoxia is instantaneous. The FASEB Journal. 15 (7), 1312-1314 (2001).
  12. Lee, J. W., Bae, S. H., Jeong, J. W., Kim, S. H., Kim, K. W. Hypoxia-inducible factor (HIF-1)alpha: its protein stability and biological functions. Experimental & Molecular Medicine. 36 (1), 1-12 (2004).
  13. Pagoulatos, D., Pharmakakis, N., Lakoumentas, J., Assimakopoulou, M. Etaypoxia-inducible factor-1alpha, von Hippel-Lindau protein, and heat shock protein expression in ophthalmic pterygium and normal conjunctiva. Molecular Vision. 20, 441-457 (2014).
  14. Park, T. J., et al. Fructose-driven glycolysis supports anoxia resistance in the naked mole-rat. Science. 356 (6335), 307 (2017).
  15. Johnston, I. A., Bernard, L. M. Utilization of the Ethanol Pathway in Carp Following Exposure to Anoxia. Journal of Experimental Biology. 104 (1), 73 (1983).
  16. Takahashi, E., Sato, M. Anaerobic respiration sustains mitochondrial membrane potential in a prolyl hydroxylase pathway-activated cancer cell line in a hypoxic microenvironment. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 306 (4), C334-C342 (2014).
  17. Mandziuk, S., et al. Effect of hypoxia on toxicity induced by anticancer agents in cardiomyocyte culture. Medycyna Weterynaryjna. 70 (5), 287-291 (2014).
  18. Arai, H., Kodama, T., Igarashi, Y. The role of the nirQOP genes in energy conservation during anaerobic growth of Pseudomonas aeruginosa. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (10), 1995-1999 (1998).
  19. Müller, M., et al. Biochemistry and Evolution of Anaerobic Energy Metabolism in Eukaryotes. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 76 (2), 444-495 (2012).
  20. Gupta, K. J., Igamberdiev, A. U. The anoxic plant mitochondrion as a nitrite: NO reductase. Mitochondrion. 11 (4), 537-543 (2011).
  21. Gupta, K. J., Igamberdiev, A. U. Reactive Nitrogen Species in Mitochondria and Their Implications in Plant Energy Status and Hypoxic Stress Tolerance. Frontiers in Plant Science. 7 (369), (2016).
  22. Kozlov, A. V., Staniek, K., Nohl, H. Nitrite reductase activity is a novel function of mammalian mitochondria. FEBS letters. 454 (1-2), 127-130 (1999).
  23. Nohl, H., Staniek, K., Kozlov, A. V. The existence and significance of a mitochondrial nitrite reductase. Redox Report. 10 (6), 281-286 (2005).
  24. Lawson, J. C., Blatch, G. L., Edkins, A. L. Cancer stem cells in breast cancer and metastasis. Breast Cancer Research and Treatment. 118 (2), 241-254 (2009).
  25. Plotkin, B. J., et al. A method for the long-term cultivation of mammalian cells in the absence of oxygen: Characterization of cell replication, hypoxia-inducible factor expression and reactive oxygen species production. Tissue and Cell. 50 (Supplement C), 59-68 (2018).
  26. Sarmento, B., et al. Cell-based in vitro models for predicting drug permeability. Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 8 (5), 607-621 (2012).
  27. Collins, S. J., Gallo, R. C., Gallagher, R. E. Continuous growth and differentiation of human myeloid leukaemic cells in suspension culture. Nature. 270 (5635), 347-349 (1977).
  28. Plotkin, B. J., et al. A method for the long-term cultivation of mammalian cells in the absence of oxygen: Characterization of cell replication, hypoxia-inducible factor expression and reactive oxygen species production. Tissue and Cell. 50, 59-68 (2018).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Biyolojisay 137kanda oksijen azlanaerobiosisfenotipik varyasyonunmemeli h cre hatlarHeLa h creleriVero h creleriuzun s reli k lt r

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır