Seçim ve No-seçim biyoanalizler Pupation tercih ve Ectropis grisescens başarısı ortaya çıkması

Özet

Burada, Ectropis grisescens olgun larva toprak faktörler (Örneğin, substrat tipi ve nem içeriği) karşılık olarak pupation tercih araştırmak için bir protokol mevcut seçim biyoanalizler kullanarak. Biz de hayır-seçim biyoanalizler pupation davranışları etkileyen faktörleri belirlemek için bir protokol ve yaşayanlar, mevcut E. grisescens.

Özet

Birçok böcek ve larvaları ve yetişkin yerden canlı olarak aşağıda yer YavruIar. Ne zaman onlar toprak içinde YavruIar ömürleri birbiri aşamalara göre daha az dikkat nasıl çevresel faktörler etkiler bu böcekler ödendi. Çay Lüper, Ectropis grisescens Warren (Lepidoptera: Geometridae), çay bitkilerin şiddetli bir zararlı olduğunu ve büyük ekonomik kayıplar Güney Çin'de neden oldu. Açıklanan protokoller çoktan seçmeli biyoanalizler araştırmaya nişan al, ister son biçim olgun E. grisescens larva ayırımcılık substrat tipi ve nem içeriği gibi toprak değişkenleri ve, hayır-seçim belirlemek biyoanalizler, pupation davranışlar substrat tipi ve nem içeriğine etkisini ve ortaya çıkışı başarısı E. grisescens. Sonuçları E. grisescens pupation ekoloji anlayışı geliştirmek ve toprak-yönetim taktikleri anlayışlar E. grisescens nüfus bastırmak için getirebilir. Buna ek olarak, bu biyoanalizler pupation davranışları üzerinde çeşitli faktörlerin etkileri ve toprak pupating zararlıları yaşayanlar çalışmaya değiştirilebilir.

Giriş

Böceklerin larva ve yetişkin aşamalara göre pupa aşaması son derece hızlı bir şekilde tehlikeli durumlardan kaçış değildir pupa sınırlı telefon yeteneği nedeniyle karşı savunmasızdır. Aşağıda yer pupating böcekler farklı gruplar tarafından kullanılan ortak bir strateji olduğunu (Örneğin, Diptera siparişlerindeki^1,2,3,4, Coleoptera⁵, Hymenoptera⁶, Thysanoptera⁷ve Lepidoptera^8,9,10,11,12) onları birbiri yırtıcı ve çevresel tehlikeleri korumak için. Çoğu şiddetli tarım ve orman zararlıları^{1,2,3,4,5,6,7,8 ,9,10,11,12}. Bu toprak pupating böcekler olgun larva genellikle onların ana bırak, yere düşmek, uygun bir site bulmak, toprağa yuva ve bir pupa odası pupating^8,10için oluşturmak için dolaşmak.

Çay Lüper, Ectropis grisescens Warren (Lepidoptera: Geometridae), bir en önemli defoliator zararlıları çay Camellia sinensis L.¹³bitki olduğunu. Her ne kadar bu tür ilk 1894'te tanımlanmıştır, bu yanlışlıkla Ectropis obliqua Prout belirlenmiştir (Lepidoptera: Geometridae) geçmiş yıl^14,15. Morfoloji, biyoloji ve dağılım iki kardeş türler arasında farklılıklar bazı son çalışmalar^14,15,16' tarif edilmistir. Örneğin, Zhang vd. ¹⁵ rapor E. eğik esas olarak Çin ' in üç ilde (Anhui, Jiangsu ve Zhejiang) sınırlarında oluştu ise E. grisescens göre çok daha geniş bir dağıtım E. oblik. Bu nedenle, E. grisescens tarafından neden olduğu ekonomik kayıplar büyük ölçüde göz ardı edilir ve kapsamlı bir şekilde gözden geçirilmesi ihtiyacı ve^{16,17,18,19 yenilenen bu haşere bilgisine} . Önceki çalışmalarımız gösterdi o E. grisescens toprak içinde YavruIar için tercih ama toprak değil elde edilebilir (no-pupation-substrat koşullar)^11,12olduğunda da YavruIar.

Bu İnceleme (1) E. grisescens pupation tercih yanıt olarak substrat tipi gibi faktörler ve nem ve çoktan seçmeli biyoanalizler kullanarak içerik (2) abiyotik faktörlerin etkisini belirlemek belirlemek için adım adım bir yordam sağlar pupation davranışları ve no-seçim biyoanalizler kullanarak E. grisescens başarısı ortaya çıkması. Tüm bu biyoanalizler iyi kontrollü laboratuvar koşullar altında yapılmaktadır. Ayrıca, bu biyoanalizler pupation davranışları diğer faktörlere etkisi ve çeşitli toprak pupating böceklerin yaşayanlar değerlendirmek için uyarlanmış.

Protokol

1. nem-seçim biyoanalizler E. grisescens Pupation tercihi belirlemek için

1. E. grisescens olgun son biçim larva elde etme
   1. Taze sürgünler (30-40 cm uzunluğunda) çay bitkiler (Camellia sinensis L.) kesti. 25-30 sürgünler bir 250 mL üçgen şişesi yerleştirin. Şişeye musluk suyuyla doldurun. 3-4 şişeler (ile çay sürgünler) plastik havzasında koymak (üst tarafı: 51 cm çapında; alt yüzünde: 40 cm çapında; yüksekliği: 16 cm).
   2. 1.000-2.000 larvaları (ikinci-beşinci biçim) E. grisescens laboratuvar koloni yaprakları çay sürgünlerin her itirazları üzerine yayın. Bu larvaların kontrollü laboratuvar koşulları, korumak [ışık 14 h photoperiod takip karanlık tarafından 10 h (1410: L:D), 60-%90 bağıl nem (RH) ve 24-28 ° C]. Dikkatli bir şekilde taze yaprakları üzerine larva transfer el ile her 1-2 d. Her gün dışkı ve enkaz altındaki havzaları çıkarın.
   3. Çay sürgünler yapraklarından düşmek ve aktif havza dibinde dolaşırken olgun son biçim larva seçin. Yeterli larva biyoanalizler için kullanılabilir olmasını sağlamak için en az 240 olgun larva elde edilir.
      Not: Sadece aktif göçebe larva deneyler için seçin. Bunlar YavruIar için hazır olmadığı için yapraklarda, kal larva seçmeyin. Ayrıca, onlar aktif bioassay Arena sonra serbest bırakılması için uygun koşullar aranamaz çünkü prepupae sınırlı telefon faaliyetleri ile seçmeyin.
2. Yüzey hazırlama
   1. Toplamak ve substrat 4 tür tanımlar (Örneğin, kum, kumlu kerpiç 1, kumlu 2 kerpiç ve alüvyon kerpiç)²⁰Hidrometre yöntemi kullanarak. Toprak ve kum kurutma makinesi > 3 d 80 ° C fırın, sterilize kuru ve o zaman tamamen toprak ve kum 50 ° c substrat örnekleri kuru ağırlığının artık zamanla değişmez kadar birkaç hafta için.
   2. Ahşap dibekler ve harçlar ile Kuru toprak zemin. Kum ve topraklı toprak bir 3 mm elekten elemek ve onları yapışmalı plastik torbalarda saklayın.
   3. Her substrat farklı nem içeriğini hesaplamak (kum, kumlu kerpiç 1, kumlu 2 kerpiç veya alüvyon kerpiç) olarak²izler:
      
   4. Distile su gerekli miktarda kuru toprak veya 5 hazırlamak için kum içeren yapışmalı Plastik torbalar Ekle %-, %20-, %35, %50, %65 ve % 80 nem substrat. Distile su ve toprak veya kum iyice karıştırın.
3. Bioassay arena hazırlık
   1. Polipropilen kaplar eşit bölün (Yakası: 20,0 cm uzunluğunda x 13.5 cm genişliğinde, alt tarafı: 17,0 cm uzunluğunda 10,0 cm genişlik, yükseklik x: 6,5 cm) su geçirmez Polivinil klorür (PVC) levhalar ile 6 odaları içine (Yükseklik: 3.5 cm). PVC levhalar düzeltmek ve sıcak tutkal kullanarak çatlaklar mühür.
      Not: Tamamen su Permeasyon önlemek için herhangi bir çatlak mühür.
   2. Her test için substrat aynı tip farklı nem içeriği ile kullanarak 6 odaları doldurmak (%5-, %20-, %35-%50-, %65 ve % 80 nem) (Şekil 1a).
      Not: Yalnızca her testte 1 substrat farklı nem içerik türünü kullanın. Rastgele 6 nem içeriği ile belgili tanımlık substrate içeren chambers sırasını atayın.
   3. 4-6 adet taze çay yaprakları Polipropilen kaplar (Şekil 1b) kapaklarının iç yüzeyi kapsayacak şekilde bandı küçük parçalar kullanarak yapıştırın.

Şekil 1: bioassay Arena seçim testler için örnekleri. (bir) su geçirmez Polivinil klorür (PVC) yaprak eşit Polipropilen kaplar 6 chambers bölmek için kullanılır. PVC levhalar ile sıcak tutkal sabit değildir ve herhangi bir çatlak dikkatli kapalı. Bu örnekte, kumlu kerpiç 2 farklı nem içeriği (% 5, % 20, % 35, % 50, % 65 ve % 80 nem) ile rasgele atanmış siparişler odasında doldurmak için kullanılır. (b) taze çay yaprakları kapakları iç tarafında yapıştırılır nerede olgun Ectropis grisescens larva gösterime girecek. (c) PVC levhalar eşit 4 türleri ile dolu 4 chambers, Polipropilen kaplar bölmek için kullanılır (kum, kumlu kerpiç 1, kumlu 2 kerpiç ve alüvyon kerpiç) yüzeylerde % 50 nem de. Bu rakam Wang ve ark. değiştirildi ¹¹. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

4. Bioassay ayar ve veri kaydı
   1. (1.1.3. adımda elde) 30 olgun son biçim larva Polipropilen konteyner kapağı üzerinde yapıştırılan taze çay yaprakları üzerine yayın. Dikkatlice kapağı devirmek ve sıkıca Polipropilen konteyner kapağı.
   2. Tekrar her 8 x sınayın. 14:10 (L:D) photoperiod ve 26 ° c bir çevre odası ayarda bioassay arenalarda korumak
   3. 5 günde, pupa her odası toprak yüzeyinde saymak. Ayrıca, biyoanalizler ortadan kaldırmak ve pupa substrat içinde saymak.
      Not: Sadece üzerinde veya içinde belgili tanımlık substrate canlı pupa sayısı. Pupa canlılığı forseps kullanarak pupa dokunduktan sonra karın hareketleri gözlemleyerek kontrol edin.
5. Veri analizleri
   1. Her test için her çoğaltma her odasında buldum pupa yüzdesini hesaplamak. Kucera ve Malmgren²¹tarafından sağlanan yöntemini kullanarak günlük oranı yüzde veri aktarımı.
   2. Pupa (dönüştürülmüş verileri) bir tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanarak her odasında yüzdesi karşılaştırın. Önem düzeylerini ayarlamak α = 0,05 her test için.

2. substrat-seçim biyoanalizler E. grisescens Pupation tercihi belirlemek için

1. Adımları yineleyin olgun son biçim larva elde etmek için 1.1 ve 1.2 farklı nem içeriği ile yüzey hazırlamak için adım. Bu sefer, sadece % 20, % 50 ve % 80 nem substrat ihtiyaç vardır.
2. Bioassay Arena hazırlanması
   1. 1.3.1 adım, eşit Polipropilen kaplar PVC levhalar kullanılarak 4 odaları bölmek için benzer. PVC levhalar düzeltmek ve sıcak tutkal kullanarak çatlaklar mühür.
   2. Her test için odaları 4 türleri ile doldurmak rasgele aynı nemi (% 20, % 50 veya % 80 nem) ile var (kum, kumlu kerpiç 1, kumlu 2 kerpiç ve alüvyon kerpiç) yüzeylerde atanmış siparişler (Şekil 1 c). 1.3.3 kapakları hazırlamak için adımları yineleyin.
3. Biyoanalizler ayarlayın ve verileri kaydetmek ve verileri çözümlemek için 1,5 adım 1.4 arasındaki adımları yineleyin.

3. No-seçimi toprak tavşan çukuru davranış ve E. grisescens ortaya çıkması başarısını belirlemek için biyoanalizler

1. Adımları yineleyin olgun son biçim larva elde etmek için 1.1 ve 1.2 (kum, kumlu kerpiç 1, kumlu 2 kerpiç ve bereketli alüvyon) 4 yüzeylerde 3 nem içeriği (% 20, % 50 ve % 80 nem), hazırlamak için adım.
2. Bioassay ayarı
   1. Plastik bir kap içine belgili tanımlık substrate eklemek (üst tarafı: 11,5 cm çapında; alt yüzünde: 8,5 cm çapında; Yükseklik: 6,5 cm) 3 cm derinliğe. Toplamda 12 tedaviler (4 substrat tipi ve 3 nem içeriği kombinasyonları) olacak emin olun. Her tedavi 7 tekrar x.
   2. 15 olgun son biçim larva her bioassay arena substrat üzerine yayın. Kapakları sıkıca kapsayan konteyner mühür. Biyoanalizler 14:10 (L:D) photoperiod ve 26 ° c, bir çevre odası ortamda korumak
      Not: Taze çay yaprakları seçim biyoanalizler belirtildiği gibi kapakları üzerinde yapıştırmak gerek yok olacak.
3. Veri kayıt ve analiz
   1. 3 günde, her çoğaltma substrat yüzeyinde herhangi bir ölü larva ve pupa saymak. Belgili tanımlık substrate aşağıdaki gibi gelip kazdı E. grisescens bireyler yüzdesini hesaplamak:
      
   2. Artık yetişkin için 15 ortaya kadar her gün gelişmekte olan yetişkin kaydedin ö hesaplamak ortaya çıkması başarı aşağıdaki gibi:
      
   3. Bireylerin gelip kazdı ve tek yönlü ANOVA kullanarak tedaviler arasında ortaya çıkması başarı yüzdesi karşılaştırın. Önem düzeylerini ayarlamak α = 0,05.

Sonuçlar

Nem-seçim biyoanalizler önemli ölçüde üzerinde daha fazla E. grisescens bireyler pupated veya %5 ve % 35 nem içinde kum % 80 nem kum (Şekil 2a) karşılaştırıldığında gösterdi. Ancak, önemli ölçüde daha fazla bireyler üzerinde ya da bir ara nem oranı (2b rakamlar - 2d) vardı toprak (kumlu kerpiç 1 ve 2 ve silt kerpiç) içinde YavruIar tercih etti.

Tartışmalar

Pupation tercihleri farklı toprak değişkenleri için yanıt birkaç zararlıları^6,9,22,23' te inceledik. Örneğin, Bactrocera tryoni (Froggatt) olgun larva tercih çalışma için (Diptera: Tephritidae) farklı toprak nem şartlar arasında Hulthen ve Clarke²² 9 konteynerler dolu içeren bir 3 x 3 Latin kare tasarım ayarla. toprak % 0, % 75 veya % 100 alan...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Triangular flask	Bomex Chemical (Shanghai) Co., LTD	99	250 mL
Plastic basin	Chahua, Fuzhou, China	100	upper side: 51 cm in diameter; bottom side: 40 cm in diameter; height: 16 cm
Zip lock bags	Glad, Guangzhou, China	126/133
Polypropylene containers	Youyou Plastic Factory, Taian, China	139/155/160/161/190	upper side: 20.0 cm [L] × 13.5 cm [W], bottom side: 17.0 cm [L] × 10.0 cm [W], height: 6.5 cm
Waterproof polyviny chloride sheet	Yidimei, Shanghai, China	141
Tape	V-tech, Guangzhou, China	VT-710
Oven drier	Kexi, Shanghai, China	KXH-202-3A
Environmental chamber	Life Apparatus, Ningbo, China	PSX-280H