Farelerde kolon anastomoz oluşturulması

Özet

Anastomoz kaçağı ya da ameliyat sonrası arıza bir önemli ameliyat sonrası morbidite ve mortalite nedenidir. Bir kolon anastomoz oluşturmak için bizim ameliyat anastomoses şifa mekanizmaları çalışmak için güvenilir ve tekrarlanabilir bir yöntemdir.

Özet

Bağırsak anastomoses seçmeli ve acil işlemlerinde yaygın olarak yapılmaktadır. Öyle olsa bile, anastomoz kaçağı kolon ameliyatları çok korkulan bir komplikasyonlar ve cerrahi anastomoses, ilâ % 26 ile böyle bir sızıntı olan hastalar için % 39'olmanın ölüm meydana gelebilir. Şu anda, bir yetersizlik anastomoz şifa hücresel mekanizmaları ayrıntılı veri kalır. Önleyici stratejileri ve tedavi şekilleri anastomoz kaçağı için büyük ölçüde daha iyi bir uygun anastomoz iyileşmesi anlayış tarafından potentiated.

Bir fare modeli önceki çalışmalar fare anastomoz en klinik olarak insan durumda hayvan diğer modeller ile karşılaştırıldığında benzer olduğunu göstermiştir olarak idealdir. Biz daha fazla gösterim amacıyla anastomoz iyileşme sağlayacak farelerde kolon anastomoz kolayca tekrarlanabilir bir fare modeli sunuyoruz.

Giriş

Bağırsak cerrahi anastomoz çok korkulan komplikasyonu anastomoz arıza veya sızıntı var. Anastomoz kaçağı, hangi dökülme intraluminal İçindekiler karın boşluğuna neden olur, yaşamı tehdit eden ve can intra abdominal sepsis için hızlı bir şekilde kurşun; şok fiyatlar % %0,3 5.5 için ince bağırsak anastomoses takip değişir ve % 0,5 ve kolon anastomoses^1,2için % 26 arasında yükselmeye. Kaçakları takip mortalite oranları yüksek hızlı başlangıçlı sepsise ve ölüme intraabdominal kirlenme³takip hızlı ilerlemesi nedeniyle % 39 olarak olabilir. Önleyici stratejileri ve tedavi yaklaşımları şu anda tam olarak anlaşılamamıştır patofizyolojisi üzerinde temel alır.

Şu anda, anastomoz iyileşmesi kez daha yaygın olarak okudu kutanöz yara iyileşmesi için hangi nispeten yoksul bir faks olduğunu gösteriyor karşılaştırılır. Şifa örtüşen aşamaları, ilk gecikme faz ile başlayan bir dizi oluşur. Gün 0-4 sonra intestinal anastomoz oluşturulması sırasında gecikme faz yaranın hücresel enkaz temizler bir akut enflamatuar yanıt tarafından tanımlanır. Daha sonra gün içinde 3-4, fibroblastic yayılması ve kolajen üretimini simgeliyor fibrophasia faz. Son olarak, 10 gün sonra kollajen yeniden uzun bir süre ve olgunlaşma aşamasında bilinir. Not anastomoz gücü oldukça düşüktür ve cerrahi olarak yerleştirilmiş zımba dışsal desteğinde bağlıdır veya kollajen yatırdığınız⁴kadar dikiş önemlidir. Rolünü anlama ve zamanlama her katman bağırsak duvarının anastomoz yara iyileşmesi ve makrofajlar gibi elucidating vekil işaretleri gibi inflamatuar aracılı hücre türleri anastomoz hata tahmin için katılımı çalış veya başarı olabilir büyük morbidite, mortalite ve iki nokta üst üste işlemleri⁵takip sağlık harcamaları azaltmak.

Fare modeli yaramak insan anastomoz⁶taklit içinde önceki çalışmalarda gösterilmiştir. Orada iken fare kolon anastomoz modeli, özellikle Komen vd tarafından açıklanan yöntemi popüler, kanıtlanmış ve iyi çalışılmış örnekleri ⁷, ileocecal veya colocolonic anastomoz teknikleri⁸artan bu modeller lehine. Önceki çalışmalarda insan hastaların kaçak oranlarındaki ileocecal, colocolonic ve anatomik Mekanlar farklı, daha fazla deneysel modeller ihtiyacını vurgulayarak kolorektal anastomoses arasında anlamlı bir fark gösterdi. Ek, halk kullanılan yöntemleri-kasten bir anastomoz kaçağı oluşturur bir model geliştirmeyi amaçlayan yerine normal anastomoz yara⁹şifa için gereken hücresel mekanizmaları aydınlatmak. Fare modelleri geçmişte denedi ancak anastomoz yırtılması oranları ve/veya sızıntı (Yani, apse oluşumu) insan ve fare^6,7önemli ölçüde daha düşük belirtileri vardır. Ayrıca, daha fazla genetik olarak değiştirilmiş deneysel satırlar fareler daha farelerde kullanılabilir. Bu fare modeli daha az bir anastomoz modeli için kullanışlıdır. Buna ek olarak, domuz ve köpek modelleri fare modeli^6,7' den daha az klinik araştırma oldu.

Güvenli, teknik olarak basit ve kolayca ve hızlı bir şekilde tekrarlanabilir yordamı kolon anastomoses anastomoz yara iyileşme^{10 underreported mekanizması içine daha fazla araştırma kolaylaştırmak gerektiğini bir fare modeli oluşturulması için önerdiğimiz} .

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Aşağıdaki iletişim kuralı Oklahoma Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi kurumsal hayvan bakımı ve kullanmak Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış ve araştırma hayvanlar kullanımı ile ilgili tüm kurumsal etik kuralları ile uyumludur. Ayrıca, tüm deneyler ile ilgili deneysel hayvan araştırma kurumsal, eyalet ve federal düzenlemelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

Not: Bu iletişim kuralı için biz 12 ila 72 haftalık kadın ve erkek congenic-yetiştirilen C57BL6/J fareler kullanılır. Bu yordam için kullanılan tüm fareler bariyer tesisinde en az bir hafta önce yerel biome uyum sağlama işlemi için tutuldu. Hayvanlar için operasyonun süresini beslemeye izin verildi ve biz ne oral mekanik barsak hazırlık ne de rektal önce yordamı kızarma kullanılır.

1) Anastomoses oluşturulması

1. Otoklav cerrahi aletler, sıcak tuzlu sulama çözüm ve iyice % 70 etanol ile operatif yüzeylerin temiz.
2. Anestezi ikna etmek için fareyi bir vaporizatör için bağlı bir indüksiyon kutusuna yerleştirin. Fareler yatıştırıcı kadar % 2-3 isoflurane 1-2 L/dak teslim.
3. Hayvan hipotermi önlemek için bir ısıtma yastığı gibi ısınma bir aygıta yerleştirin.
4. Subkutan bir enjekte zaman dozu 0.1 mg/kg buprenorfin (30 g fare için 3 µg) ameliyat sonrası analjezi için ve bir kez doz 10 mg/kg enrofloksasin ameliyat öncesi antibiyotik profilaksisi için.
   Not: öncesi ve ameliyat sonrası antibiyotik bu işlem için gerekli olmayan olsa kurumsal yönergeleri ve hayvan bakım ve bizim kurumda tesisimiz, bunların kullanımı tavsiye Komitesi kullanın.
5. Fare burun çevresinde anestezik burun konisi yerleştirin. Operasyon boyunca dikkatle hayvan solunum hızı izlemek ve anestezik akış hızı gerektiği gibi ayarlayın. Dakikada 30-40 nefes, solunum hızı korumak.
6. Depilatory bir ajan tarafından takip bir saç kesme makinesi karın tüm deri yüzeyinden saç kaldırmak için kullanın. Su ya da % 70ini etanol ile ıslak gazlı bezle iyice depilatory aracısını kaldırın. İyice hayvan kurulayın.
7. Karın prepping önce fare bacaklarda ısıtma yastığını veya operatif yüzey ameliyat sırasında değişen fare önlemek için her bacak sonunda teyp. Karın klorheksidin ile dezenfekte. Traş alanının kenarları saçının yanı sıra tüm traş alanı bulunmaktadır. Steril örtü fare (Şekil 1A) üzerine yerleştirin.
   1. Draping önce küçük bir oval veya dikdörtgen pencere hazırlandı karın ortaya çıkarmak için örtüsü kesti.
      Not: Pencerenin tüm karın fare maruz ancak ekstremitelerde, kuyruk, baş ve göğüs kapak gerekir. Bizim işlemleri (Şekil 1B) için bir 4 x 3 cm² pencere kesmek.
   2. Küçük bir yarık belgili tanımlık oval veya dikdörtgen pencere yordamı (Şekil 1 c) sırasında rektum erişmesine izin vermek için doğru alt kenarından örtüsü orta çizgi boyunca olun.
8. Bir cilt kesi yapmak. Alt karın orta çizgi başlatın ve dikey olarak xiphoid için makas ile cilt deşmek. Sadece cilt deşmek ve karın duvarı kas (Şekil 2A) kesme önlemek.
9. Karın duvarının orta hat forseps ile kavramak ve uzak karın içeriğini kaldırın. Dikkat çekici değil intraabdominal yapıları yaralama, orta hat karın fasya uzunluğu dikey olarak keskin makas ile deşmek. Cilt kesi (Şekil 2B) uzunluğu genişletir.
10. Bağırsak maruz kaldığında, çekum ve ince bağırsak bulun ve azalan ve sigmoid kolonu da duyurmak Sol taraflı iç organlar döndürün. Jöle yağlama ile künt sonda ipucu ceket ve dikkatli bir şekilde azalan/sigmoid kolon (Şekil 3) tanımlanmasına yardımcı olmak için rektum içine sonda ilerlemek.
    Not: genellikle insanlar farklı olarak, fare çekum karın sol üst kadranda bulunur. Bu adımda sonda ile bağırsak duvarı sorgulamaktı değil için dikkat ediniz. Bağırsak duvarı delikli, yordamı sona erdirmek ve fare ötenazi.
    1. Çekum dişli veya keskin forseps ile açgözlü kaçının. Bunun yerine, eğimli aplikatör veya iç organlar döndürmek için nazik parmak manipülasyon pamuk atravmatik forseps kullanın.
    2. Kullanım maruz bağırsak yordam nemli tutulur emin olmak için steril serum fizyolojik ısıttı.
    3. Kolon orta çizgi sol tarafta olacak ve bıçaklanmasından retroperitoneum aracılığıyla için takılı. Kimlik sonra kısmen colotomy kolaylaştırmak için künt sonda geri alıyorum.
11. Sigmoid kolon enine colotomy gerçekleştirin.
    1. Yavaşça sigmoid kolon pelvik koya üstün atravmatik forseps (Şekil 4A) ile kavramak.
    2. Keskin mikro-makas kullanırken, bir kesim arasında sigmoid kolon kolon ve iki nokta üst üste genişliği % 80-90 arasında uzanan yönünü dikey olun. Bu iki nokta üst üste cerrahi alan dışında bir ucunu retraksiyon önlemek ve onarım (Şekil 4B) kolaylaştırmak yardımcı olacaktır.
    3. Mezenterik damar visseral döndürme veya colotomy seyri sırasında yaralandı, hafifçe basınç için gazlı bez veya pamuk uçlu bir aplikatör ile 2 dakikaya kadar tutun. Bu saatten sonra kanama devam ederse, bir sekiz rakamı şeklindeki,-8-0 monofilament dikiş kanama noktasının çevresinde koyun.
       Not: bağırsak nekroz veya yaralanma sonra bu belirtileri gösteriyorsa, yordamı sonlandırır ve kurumsal hayvan kullanım Komitesi tarafından onaylanmış bir insana ilişkin yöntemini kullanarak fare ötenazi.
12. Sigmoid colotomy onarın.
    1. Castroviejo iğne sürücüyü kullanarak, kolostomi onarmak için 5-6 basit kesintiye uğramış 8-0 nonabsorbable Polipropilen dikiş yerleştirin. Dikiş birbirinden 1 mm ile 0,5 mm ısırıkları yerleştirin.
       1. Her dikiş ile mukoza daha biraz daha fazla serosa alarak onarım bağırsak kenarlarını haddeleme önlemek için dikkat ediniz. 5 mm uzun kuyrukları bırakın. Değil yanlışlıkla catch çevreleyen bağırsak için dikiş (Şekil 4 c) iyi bak.
          Not: Bu, dikiş başlamak için yararlı olduğunu yakınındaki colotomy colotomy sona mesenteric-çoğu kısmını kaydetme, mezenterik kenarlığını.
       2. Onarım ilerledikçe son dikiş yerleştirilmeden önce onarım yayılmasını önceden trans-anal künt uçlu diseksiyon sonda. Bu çok dar bir onarım önlemek ve anastomoz yapışıklıkları oranlarda azaltmak yardımcı olacaktır.
13. Isıtılmış salin ile dolu bir 10 mL şırınga kullanarak, karın birkaç kez sulamak. Yüzey fare altında sırılsıklam duruma gelirse, fare kuru veya kuru yüzeye hipotermi önlemek için fareyi.
    1. Aşırı sulama kadar emmek için belgili tanımlık kesme yerleştirilir steril bir gazlı bez kullanın.
    2. Son sulama, karın steril serum fizyolojik ile doldurun. Dikkatli bir şekilde yağlanmış 18 G angiocatheter rektum ilerlemek ve 0.5-1 ile açıldığı cm³ hava. Bu anastomoz herhangi bir sızıntı ile başka bir kesintiye uğramış polipropilen sütür anastomoz yayılmasını steril sonda kullanarak tamir edilebilir daha gösterecektir.
    3. Angiocatheter kaldırma önce kullanarak kolon boşaltmak.
14. Kanama yok etkin olduğundan emin olun. Varsa, doğrudan kanama devam ederse yukarıda açıklandığı gibi 1-2 dk. yer kan durdurucu sargı dikiş için kanama amacı üzerine hafif basınç uygulayın.
15. Yavaşça medialized iç organlar normal anatomik konumuna (Şekil 5A) döndürmek.
16. Belgili tanımlık karın kesme (Şekil 5B) kapatın.
    1. 4-0 absorbe örgülü dikiş kullanarak, belgili tanımlık kesme üst kısmında başlama ve bitirme belgili tanımlık kesme aşağı yönü de karın duvarı kas tabakası boyunca çalışan dikiş yerleştirin. Bir kravat yüklemek ve 5 mm uçlar bırakarak dikiş kesti.
       Not: yanlışlıkla karın duvarı kapatma bağırsaklarda dahil değil.
    2. 4-0 monofilament dikiş ile cilt (Şekil 5C) kapatmak için yineleyin.
17. Tüm hayvan sıcak ve kuru, ameliyat sonrası hipotermi önlemek için olduğundan emin olun.
18. Anesteziden kurtarır hayvan dikkatle izleyin. 0.1 mg/kg buprenorfin her 72 h prosedür sonra 2-3 gündür ağrı kontrolü için yönetmek.  İyileşme döneminde fareler dikkatle her gün apse veya periton kan zehirlenmesi belirtileri için incelenmesi gerekir.  Acı ve sıkıntı için ameliyat sonrası gözlem içermelidir: duruş, yeme veya içme, doğru değil damat, yara, normal iyileşme kesi, sitede eksikliği etrafında aşırı iltihap eksikliği türünü hunching dahil olmak üzere hareket kısıtlanması veya normal değil iç içe geçirme.  Herhangi bir bu davranışlar gösteren herhangi bir hayvan hemen CO₂ boğulma en az 10 dk ikili torakotomi tarafından takip tarafından euthanized.
19. 0.1 mg/mL enrofloksasin 7 günü intra abdominal enfeksiyon ve sepsis çalışması ile ilgili fekal kontaminasyon nedeniyle önlemek için ameliyat için fareyi'nın içme suyu ile karıştırın.

2) anastomoz doku hasat

1. Anastomoz doku bilincin önce kurumsal hayvan kullanım Komitesi tarafından onaylanmış bir insana ilişkin yöntemini kullanarak fare ötenazi.
   Not: Kurumsal ilkesini temel alarak, bir karbon dioksit odası ile 2 L/min 5 min için % 100 karbon dioksit gazı infüzyon ikili torakotomi gerçekleştirmeden önce yerleştirerek bizim hayvanlara ötenazi.
2. Karın % 70 etanol tarafından takip klorheksidin ile sterilize.
3. Özgün ensizyon keskin makas ile yeniden deşmek. Önceki belgili tanımlık kesme alt kutbunda başlatmak ve bu kesim Superior xiphoid (Şekil 6A) genişletir.
4. Makas, kullanılarak kesme kas katmanına ve periton boşluğu girdikten sonra belgili tanımlık kesme alt ve üst kesim genişletmek. Olabilir gibi bağırsak kesi veya anastomoz sitesini yapıştırılır bağırsak karın girerken yaralanmasına veya anastomoz etkilemesini önlemek için dikkat ediniz.
5. Dikkatli bir şekilde onarılan sigmoid kolon (Şekil 6B) açığa sol mediyal visseral rotasyon gerçekleştirmek. Büyük olasılıkla belgili tanımlık onarmak çevreleyen bağırsak bağırsak yapışıklıklar olacak. Yavaşça ve açık açık bu yapışıklıklar onarım sitesinden incelemek. Anastomoz bozmaya değil çok dikkat edin.
   1. Onarım siteyi onarım için kullanılan polipropilen sütür kuyruk bularak tanımlar. Makas kullanarak ve 1 cm onarım için proksimal başlayarak, kemiği inen kolon transect. 1 cm distal anastomoz site için bu adımı yineleyin.
6. Sigmoidal segment kolon kolon arka kenarına ekli bıçaklanmasından dan iyi makas (Şekil 7) ile keskin diseksiyon tarafından kaldırın.
7. İki nokta üst üste numune mezenterik kenarlığını tanımlamak ve mezenterik sınır boyuna bir moda uzunluğu boyunca kesin için iyi makas kullanın. Bu daha önce kaldırılan silindirik örneği (Şekil 8) iki nokta üst üste kare veya dikdörtgen bölümünü oluşturur.
8. İki nokta üstüste iki nokta üstüste segment kaldırılmasını önce anti-mezenterik kenarlığını ayırma için bir işaretleme kalemi kullanın. Kaldırıldıktan sonra iki nokta üst üste işareti karşısında uzunluğu boyunca bir boyuna kesim yapmak. Tamir, embed ve örnek doku histolojisi ve/veya immunostaining için gerektiği gibi kesti.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

7 ameliyat günü, anastomoz de iyileşti. Anastomoz zaman noktaları önce ve sonra yedi gün daha iyi anastomoz iyileşmesi aşamaları göstermek hasat edilebilir. Şekil 9' da histolojik analiz (fibrotik kollajen trichrome boyama tarafından görüntülenmiştir) gösterir yanıt aracılı düz kas Alfa-aktin olumlu myofibroblasts tarafından. Ancak, histolojik analizler sonuçlarından fareler, özellikle yeniden epithelialization ve myofibroblasts anast...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Başarısını sağlamak ve bu yordamı ile ilişkili morbidite/ölüm en aza indirmek için birkaç temel adım vardır. İlk olarak, bağırsak dokusu dikkatli işleme emin olun ve ne zaman iki nokta üst üste ortaya çıkarmak için iç organlar dönen çekiş yaralanma önlemek için dikkat ediniz. Bağırsak veya bıçaklanmasından üzerinde aşırı gerginlik yaralanma bağırsak veya damarlara ve neden bağırsak nekroz anastomoz sitesinden yapabilirsiniz. Ayrıca, sharp forceps veya forseps dişleri olan bağı...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
C57BL6/J mice	Jackson Labs	#00664
Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24"	Fisher Scientific	14-206-62
Polylined Sterile Field, 18" x 24"	Busse Hospital Disposables	696	Cut a rectangular hole
Isothesia isoflurane	Henry Schein	50033
Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4"	Fisher Scientific	22-415-469
Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube	Dechra Veterinary Products	NDC 17033-211-38
Nair depilatory cream	Church & Dwight Co.	22339-05
Buprenex buprenorphine  0.3 mg/ml	Reckitt Benckiser Pharma Inc	NDC 12496-0757-5
1 cc insulin syringe, 27 G	Becton Dickinson	329412
Chloraprep Shampoo	Medline	APL82287
Webcol alcohol prep swabs	Covidien	6818
BioGel PI surgical gloves	Mölnlycke Health Care	ALA42675Z
Micro Forceps with teeth	Roboz	RS-5150
Fine scissors- sharp	Fine Science Tools	14060-09
Straight serrated forceps	Fine Science Tools	11050-10
Castro-Viejo needle driver	Fine Science Tools	12565-14
0.9% Sodium Chloride Irrigation	Baxter	BHL2F7121	Warm to 37 °C prior to use
10 ml syringe	Becton Dickinson	309604
4-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", PS-2 needle	Henry Schein	6546037
Blue monofilament suture 24” BV-1 needle	Henry Schein	8305H	Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures.
Cole-Parmer Microscissors, Standard Grade, Straight, 4".	Cole- Parmer	EW-10818-06
Medline Sterile lubricating jelly	Medline	MDS032273H