Method Article
* Bu yazarlar eşit katkıda bulunmuştur
X-ışını bilgisayarlı tomografisi için tasarlanmış x-ışınına özgü boyama yöntemi kullanılarak mikroskobik doku yapılarının 3boyutlu görüntülenmesi için bir protokol sunulmuştur.
X-ışını mikroCT ve nanoCT ile hücre sitoplazmasını hedefleyen belirli bir X-ışını lekesi birleştiren laboratuvar tabanlı bir yöntem gösteriyoruz. Açıklanan protokolün uygulanması kolay, hızlı ve daha büyük yumuşak doku örnekleri için uygundur. Sunulan metodoloji, önemli doku yapılarının üç boyutlu olarak karakterizasyonunu sağlar ve tüm fare böbreği üzerinde gösterilmiştir. Çok ölçekli yaklaşım tüm fare böbreğinin görüntülenmesine olanak tanır ve nanometre aralığına kadar daha yüksek çözünürlüklerle elde edilen daha fazla ilgi hacminin seçilmesini destekler. Böylelikle, ilgili histolojik ışık mikroskobu görüntüleri gibi benzer bir detay düzeyine sahip yumuşak doku morfolojisi çoğaltılır. Doku yapılarının 3Boyutlu konfigürasyonuna dair daha derin kavrayışlar histolojik yöntemlerle daha fazla araştırmaya engel olmadan elde edilir.
Yumuşak doku örneklerinin tam karakterizasyonu 3D doku mikroyapısı hakkında bilgi gerektirir. Yumuşak doku örnek analizleri için geçerli altın standart histopatolojidir. Numunenin doku ve hücresel morfolojisi optik mikroskopi1kullanılarak seçilen ilgi bölgelerinde (ROI) 2Boyutlu olarak incelenir. Ancak bu yöntemin çeşitli dezavantajları vardır. Örneğin hazırlanması zaman alıcı, karmaşık, yıkıcı ve eserlere yatkındır. Üretilen mikroskobik slaytlar kesit düzlemine paralel olarak sadece 2B bilgi sağlar. Genellikle incelenen histolojik bölümlerin sayısı, zaman kısıtlamaları nedeniyle sınırlıdır2,3.
Son yıllarda, 3D histoloji alanı gelişti. Burada, istenilen herhangi bir mekansal düzlemden sanal doku dilimleri erişilebilir. Bu, 3D doku mimarisi ve farklı patolojiler ile ilişkili yapısal değişiklikler daha derin bir anlayış sağlar örnek boyunca yapıların izlenmesi için izin verir. 3B hacim verilerinin üretilebilmek için çeşitli yöntemler geliştirilmiştir. Işık veya elektron mikroskobu4,5,6,7,8, episkobik 3D görüntüleme gibi blok yüz görüntüleme yöntemlerine kadar seri bölüm tabanlı yaklaşımlardan veya blok yüz tarama elektron mikroskobu7,8,9. Ancak, belirtilen tüm yöntemler, daha fazla araştırma için izin vermez tamamen örnek bölümleme veya imha içerir. Elde edilen çözünürlük, geleneksel histolojide açıklandığı gibi kesitleme işleminin eserlere yatkın olmasına son derece bağlıdır. Bu yöntemler hizalama yapıtlarından da muzdarip.
Mikroskobik ve nanoskobik bilgisayarlı tomografi (mikroCT ve nanoCT) gibi 3D X-ışını görüntüleme teknikleri doku örneğini tahrip etmeden 3D yüksek çözünürlüklü veri üretmeyi arzular. Şimdiye kadar, yumuşak doku zayıf X-Ray zayıflama kontrast ve bir laboratuvar ortamında yüksek çözünürlüklere sınırlı erişim mikroskobik doku yapılarının 3D görme için kullanımını bozulmuştur. Laboratuvar tabanlı, yüksek çözünürlüklü X-ışını CT doğru son gelişmeler 1 μm10,11,12,13altında çözünürlükler için izin verir.
Konvansiyonel zayıflama tabanlı X-ışını görüntülemesinde yumuşak dokuda kontrast eksikliği, X-ışını zayıflama kontrastını artıran boyama ajanları ile telafi edilir. Osmiyum tetroksit (OsO4),iyot potasyum iyodür (IKI) veya fosfotungstik asit (PTA) gibi diğer görüntüleme tekniklerinden bilinen boyama ajanları genellikle14,15,16,17, 18,19,20,21,22,23,24,25. (i) spesifik biyolojik hedefleme, (ii) homojen ve tam boyama, (iii) kolay işleme, (iv) difüzyon halkaları, (v) büyük ve yoğun doku boyama gibi eserler oluşturmadan dokunun hızlı penetrasyonuna izin veren boyama ajanları ve (vi) mikroskobik doku yapılarının 3Boyutlu görüntülenmesi için x-ışını BT'sini oluşturmak için histopatoloji ile tam uyumluluk gereklidir. Bu çalışmada,26'dabelirtilen gereksinimleri karşılayan eozin bazlı sitoplazmaya özgü x-ışını lekesi ile X-ışını BT görüntülemesi için yumuşak doku örneklerinin nasıl hazırlandığı gösterilmektedir.
Çok ölçekli görüntüleme yaklaşımı, genel bir mikroCT ölçümü ve daha yüksek çözünürlüklü araştırmalar için ilgi hacimlerinin (VOI) seçimi yoluyla boyama kalitesinin değerlendirilmesini sağlar. Boyama kalitesi (i) bütünlük, (ii) difüzyon halkalarının görünümü, (iii) kontrast geliştirme, (iv) çizgiler ve (v) homojenlik gibi BT yapıtlarının görünümü gibi boyama parametreleri üzerinde durularak analiz edilir. 100 nm'ye kadar çözünürlüklere ulaşmak için geometrik büyütme yi kullanan laboratuvar tabanlı nanoCT kurulumu, (alt)-hücresel seviye10,27'deyumuşak doku morfolojisini görselleştirir. NanoCT dilimlerinin histolojik ışık mikroskobu görüntüleriile karşılaştırmalı bir analizi, doku mimarisinin 2B mikroskobik düzeyde benzer ayrıntılarla çoğaltılmasını doğrulayarak dokunun histopatolojik karakterizasyonunu sağlar. Örnek. Bu ayrıntılı video protokolü farkındalığı artırmak ve zoologlar, biyologlar ve sağlık gibi geniş bir bilim topluluğunun ilgisini olan tahribatsız 3D yumuşak doku görüntüleme aracı olarak bu metodolojinin potansiyelini vurgulamak için tasarlanmıştır Profesyonel.
Dikkat: Lütfen kullanmadan önce ilgili tüm malzeme güvenlik veri sayfalarına (MSDS) başvurun. Protokolde kullanılan kimyasalların bir çoğu akut toksik ve kanserojendir. Mühendislik kontrolleri (duman kaputu, eldiven kutusu) ve kişisel koruyucu ekipman (güvenlik gözlükleri, eldivenler, laboratuvar önlüğü, tam uzunlukta pantolon, kapalı ayak ayakkabı) kullanımı da dahil olmak üzere boyama protokolünü uygularken lütfen tüm uygun güvenlik uygulamalarını kullanın.
Kullanılan Hayvanlar:
Hayvan konutları, 2010/63 Avrupa Birliği yönergeleriuyarınca Münih Teknik Üniversitesi Klinikum rechts der Isar'da gerçekleştirilmiştir. Organ kaldırma klinikum rechts der Isar, Münih, Almanya (iç referans numarası 4-005-09) bir iç hayvan koruma komitesi nden onaylanmıştır. Tüm prosedürler ilgili yönerge ve yönetmeliklere uygun idi. Tüm laboratuvarlar, OECD'nin iyi laboratuvar uygulamaları ilkelerine uygun olarak denetlenir.
1. Eozin boyama protokolü
2. X-ışını mikroCT görüntüleme
NOT: X-ışını mikroCT ölçümleri, genel bt ölçümleri (görüntü alanı içindeki numunenin tamamını niçin görüntülenebilme (FOV)) ve yüksek çözünürlüklü CT ölçümlerinin performansı (odaklama yeteneği) sunan bir mikroCT tarayıcısı ile yapılmıştır. aynı numunenin istenilen bir ilgi hacminde (VOI) 1 μm'ye kadar iner.
3. X-ışını nanoCT görüntüleme
NOT: X-ışını nanoCT tarayıcısı şirket içinde geliştirilmiştir. Lenssiz cihaz nanofocus X-Ray kaynağı ve tek foton sayma dedektörü ile donatılmıştır. 100 nm'ye kadar çözünürlüğe sahip 3B veriler10oluşturulabilir. Genellikle, X-ışını optik olanlar da dahil olmak üzere nanoCT sistemleri ticari olarak mevcuttur ve açıklanan nanoCT tarayıcı ile sınırlı değildir.
Şekil 1, tombullama sonrası kontrast geliştirmesini vurgulayan düşük çözünürlüklü mikroCT verilerinin CT dilimlerini ve ses oluşturma yı gösterir. Şekil 2, tüm fare böbreğinin yerel tomografisinden elde edilen yüksek çözünürlüklü mikroCT verilerinin CT dilimlerini ve ses oluşturmasını gösterir. Şekil 3, ilgili histolojik kesitlere göre nanoCT verilerinin CT dilimlerini gösterir. Şekil 4, hücresel düzeyde yapısal ayrıntıları vurgulayan nanoCT verilerinin CT dilimini ve hacim oluşturmayı gösterir. Düşük çözünürlüklü mikroCT ölçümü tüm organın genel bir bakış sağlar ve yüksek çözünürlüklü mikroCT ölçümü için ilgi hacimleri (VOI) belirlemek için yardımcı olur. Bu çok ölçekli yaklaşım sayesinde, nanoCT için VOI belirlenir. NanoCT hücresel düzeyde yumuşak doku örneğinin çok ayrıntılı bir görünümünü sağlar. Karşılık gelen histolojik bölüm ile karşılaştırmalı çalışma histopatoloji ile tam uyumluluk vurgulamaktadır. Burada multimodal görüntüleme yaklaşımı her iki yöntemle elde edilen sonuçları doğrular.
Şekil 1. CT dilimleri ve düşük çözünürlüklü mikroCT verilerinin ses işleme. (a,b) Aynı fare böbreğinin sırasıyla boyama dan önce ve sonra genel görüntüleri, eozin bazlı boyama protokolünün uygulanmasından sonra elde edilen kontrast geliştirmesini vurgular. Her iki mikroCT veri seti de özdeş kazanım parametreleri kullanılarak elde edildi. Her iki veri kümesindeki voxel boyutu 12 μm'dir. (b)'de elde edilen kontrast geliştirme aşağıdaki anatomik yapısal bölgelerin tanımlanmasını sağlar: Dış medullanın dış çizgilerinde daha fazla ayrım ile Korteks (I), dış medulla (IIa) ve dış medullanın iç çizgileri (IIb), iç medulla (III), papilla (IV) ve renal pelvis (V). (c) Tüm fare böbreği boyunca sanal bir sagital kesiti gösteren mikroCT verilerinin hacim işlemesi. Bu rakam Busse ve Müller ve ark.26'dandeğiştirilmiştir.
Şekil 2. Geliştirilen ozin tabanlı boyama protokolünün uygulanmasından sonra aynı fare böbreğinden elde edilen yüksek çözünürlüklü mikroCT verilerinin CT dilimi ve hacim işlemesi. (a)Sol köşede, görüntülenen yüksek çözünürlüklü görüntü için YG 'yi (mavi kutu) vurgulayan genel microCT görüntüsü gösterilir. Aşağıdaki anatomik yapısal bölgeler tanımlanabilir: Korteks (I), dış medulla (IIa) dış şeritler ve dış medulla iç şeritler daha fazla ayrım ile (IIa), iç medulla (III), küçük kaliks (IV) ve damarlar (V ve VI). (b) Voxel boyutu 3,3 m ile elde edilen yüksek çözünürlüklü mikroCT verilerinin faiz hacmi. Medulla bölgesi ve tüm böbreğin lokal tomografisinden elde edilen bir damar aracılığıyla sanal bir bölüm gösterilmiştir. Bu rakam Busse ve Müller ve ark.26'dandeğiştirilmiştir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3. Geliştirilen eozin bazlı boyama protokolünün uygulanmasından sonra aynı fare böbreğinden elde edilen histolojik kesitlere (c,d) göre nanoCT verilerinin CT dilimleri (a,b). (a) Boyama, diseksiyon ve CPD sonrası aynı fare böbrek örneğinin nanoCT görüntüsü Şekil 1 ve Şekil 2'degörülen bölgenin (IIb) ayrıntılı yapılarını göstermektedir. Bu Henle döngü kalın yükselen uzuvlar olarak bilinir. (b) Hücre çekirdeğinin net bir şekilde görüntülenmesiiçin yaklaşık 7 m sanal dilim kalınlığıile(a)gösterilen aynı nanoCT veri kümesinden elde edilen minimum yoğunluklu projeksiyon dilimi. (c) Hücre çekirdeklerinin ve fırça sınırının net görselleştirmesi ile Henle'nin halkasının kalın yükselen uzuvlarını gösteren temsili histolojik bölüm. Histolojik bölüm yaklaşık 7 μm kalınlığa sahiptir ve parafin bloğuna uygulanan eozin bazlı boyama ve katıştırma sonrasında aynı fare böbrek örneğinden elde edilmiştir. (d) Mor hücre çekirdeklerini vurgulayan sayaç lekesi hematoksilin uygulaması ile temsil histolojik bölümü. (c)bendinde gösterilen bölüme yakın histolojik bölümün yaklaşık 7 μm kalınlığında hazırlanması. Bu rakam Busse ve Müller ve ark.26'dandeğiştirilmiştir.
Şekil 4. NANOCT verilerinin CT dilimi ve hacim işlemesi. (a) Henle'in halkasının kalın yükselen uzuvları olarak bilinen yapıları gösteren aynı fare böbrek örneğinin nanoCT görüntüsü. Bu, Şekil 1 ve Şekil 2'de görülen ve yaklaşık 400 nm voxel boyutuna sahip küçük bir böbreğin küçük bir parçasından elde edilen bölgenin (IIb) ayrıntılı bir görünümüdür. Örneğin hazırlanması boyama, diseksiyon ve CPD. (b) Henle döngülerinin kalın artan uzuvlarının 3Boyutlu yapısını görselleştiren nanoCT verilerinin hacim işlemesini içeriyordu. Bu rakam Busse ve Müller ve ark.26'dandeğiştirilmiştir.
Şu anda, eozin hücre sitoplazması etiketlemek için standart histolojik protokol olarak kullanılır. Boyama maddesi yumuşak doku mikroskobik dilimlerine %0,1 (w/v) sulu çözelti olarak uygulanır (genellikle 2-10 μm kalınlığında kesilmiş)33. Bu standart histolojik protokolün tüm fare böbreği gibi 3D doku örneklerine uygulanması zayıflama kontrastı gelişmiş BT görüntüsüne neden olmaz. Bir yandan, bu laboratuvar tabanlı mikroCT sistemlerinin tipik kullanılan X-ışını enerjileri için yumuşak dokunun düşük içsel zayıflama özellikleri atfedilebilir. Genellikle, yumuşak doku ağırlıklı olarak karbon oluşur, hidrojen, oksijen ve azot34, ve bu nedenle, kontrast geliştirme neden olmaz. Öte yandan, boyama için kullanılan eozin düşük konsantrasyonu sınırlayıcı faktör oldu. Bir eozin molekülü dört bromür atomu (Z = 3534ile yüksek atom numarası elemanı brom) barındırsa da, X-ışını BT görüntülemesi için gerekli duyarlılık düzeyleri karşılanmadı.
Düşük zayıflama kontrastı bu meydan okuma aşmak için, eozin çeşitli konsantrasyonları araştırıldı. Bir sınırlama burada sulu bir çözeltide% 30 (w / v) suda eozin maksimum çözünürlüğü vardır. Yumuşak doku içinde en iyi zayıflama kontrast geliştirme Lambert-Bira Kanunu'na göre beklenen en yüksek eozin konsantrasyonu ile gözlendi. Bu nedenle son boyama protokolü en yüksek konsantrasyonla gerçekleştirilmiştir.
Kontrast geliştirmeyi daha da iyileştirmek için yumuşak dokunun moleküler düzeyde en iyi şekilde nasıl hazırlanacağı sorusu pH ayarı ile yanıtlandı. Burada, fiksasyon sırasında veya boyama dan önce yumuşak doku örneğinin asitlenmesi çok önemli bulunmuştur. Bu da Hong ve ark.35tarafından gösterilmiştir. Asit tarafından hücre sitoplazması içinde boyama ajanının daha yüksek birikimi, hücre sitoplazmasında bulunan protein ve peptidlerin amino asit yan zincirlerinin protonlanması sonucu oluşan gelişmiş iyonik etkileşimler ile elde edilmiştir. Lekesiz bir yumuşak doku örneğine kıyasla kontrast geliştirmesini vurgulayan temsili bir sonuç Şekil 1a,b'degösterilmiştir. Burada korteks, medulla, papilla ve renal pelvis gibi önemli anatomik bölgeleri görselleştiren bir fare böbreğinin yapısal bir genel görünümü elde edilmiştir.
Sunulan boyama protokolü uygulamak kolaydır ve yalnızca üç adım içerir. Gerekli reaktifler kolayca erişilebilir. 24 saatlik genel boyama süresi, bir laboratuvar ortamında yumuşak doku örneklerinin(Şekil 1c, Şekil 2b ve Şekil 4b) 3Boyutlu görüntülemesini sağlayan bir bütün organ boyama için hızlıdır. hücresel seviyeye kadar birden fazla ölçekler. Gerekli boyama çözeltisinin genel boyama süresi ve hacmi, numunenin yapısına bağlı olarak bazı adaptasyonlar gerektirebilir unutulmamalıdır. Bununla birlikte, eozin bazlı boyama protokolü tüm organ boyama için uygundur, bu da tüm organların yüksek çözünürlüklü mikroCT görüntülemesini sağlar. MikroCT ölçümleri sırasında numunenin nemli tutulmasında kullanılan çözücü etanol nedeniyle büzülme objeleri gözlenmemiştir. Orijinal örnekten alınan küçük doku parçalarının araştırılmasına olanak tanıyan nanoCT görüntüleme için ek hazırlık adımları gereklidir. Gelecekteki histopatolojik uygulamalara ilişkin olarak, genel bakış taramaları şekil 2a'da gösterildiği gibi ROI'ların belirlenmesine olanak sağlayan değiştirilmiş anatomik bölgeler ve yapılar hakkında değerli bilgiler sağlayacaktır. Bunlar mikroCT(Şekil 1c ve Şekil 2b)veya nanoCT (Şekil 4b) ile 3Boyutlu olarak incelenebilir ve histoloji ile 2B olarak değerlendirilebilir (Şekil 3).
Protokolün bir diğer gücü de H&E boyama prosedürüne göre histopatolojiile tam uyumluluk ta görülmektedir. Uygulanan eozin konsantrasyonu histolojik boyama çözeltisine göre çok daha yüksek olmasına rağmen, eozin bazlı boyama işleminin toplu numunelere uygulanması daha fazla histolojik araştırmayı engellemez(Şekil 3). Yaklaşık 400 nm(Şekil 3a)sanal kalınlığı olan nanoCT dilimi, ilgili yumuşak doku örneğinden elde edilen histolojik kesitle(Şekil 3c)zaten çok iyi karşılaştırır. 7-10 μm'lik histolojik bir bölümün yaklaşık kalınlığı göz önüne alındığında, yaklaşık 7 μm'lik sanal kalınlığa karşılık gelen nanoCT verilerinin minimum yoğunluklu projeksiyon dilimlerinin(Şekil 3b)üretilmesi, histolojik bölümle daha iyi karşılaştırma(Şekil 3c). Burada, hücre çekirdekleri açıkça eozin özellikle hücre sitoplazmasında protein ve peptidler lekeler olarak non-zayıflatma alanı olarak ortaya33.
Standart histolojik boyama prosedürüne göre boyama sırası tersine çevrilmiş olsa da, standart histolojik yöntemlerle daha fazla karşı boyama uygulaması mümkündür. Bt için geliştirilen eozin bazlı boyama protokolü ile ilk başlayarak, ardından hematoksilin ile bu eozin bazlı histolojik kesitlerin karşı boyama, tam uyumluluk sağlar ve beklenen formu gösteren yüksek kaliteli boyama sonuçları görünüm. Mayer'ın ekşi hematoksin ile hücre çekirdeğine özgü boyama mor hücre çekirdeklerini vurgulayan histolojik bölüme uygulandı(Şekil 3d). Histolojik sayaç boyama uygulaması şu anda H-lekesi ile sınırlıdır. Periyodik asit Schiff'in tabanı, Elastica van Gieson veya Gomori gümüşü gibi diğer standart histolojik sayaç boyamalarının yanı sıra immünohistolojik tekniklerle uyumluluğun da test edilmesi gerekmektedir.
Eozin bazlı boyama protokolü (i) hücre sitoplazmasına özgü hedefleme, (ii) homojen ve tam boyama, (iii) kolay uygulama, (iv) difüzyon halkaları gibi eserler oluşturmadan dokunun hızlı penetrasyonu, (v) büyük ve yoğun yumuşak doku örnekleri ve (vi) H&E lekesi açısından histopatoloji ile tam uyumluluk. Bu gereksinimler, yumuşak dokunun hücresel düzeye kadar yüksek çözünürlüklü X-ışını BT görselleştirmesi için önemlidir. Son zamanlarda geliştirilen nanoCT cihazları ile birlikte12,36,37, kontrast ve geleneksel histolojik verilere çözünürlük karşılaştırılabilir sanal histolojik dilimlerin zararsız nesil mümkün hale getirilir. Bu kombine yaklaşım mikroskobik doku yapılarının 3Boyutlu görselleştirme için değerli bir araç olarak X-Ray BT kurulmasını sağlayacaktır.
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Dr. Enken Drecoll'a histolojik tartışmalar ve Excillum AB, İsveç'teki son derece yardımsever ekibi için teşekkür ederiz. DFG Mükemmellik Kümesi Münih Gelişmiş Fotonik Merkezi (MAP) ve DFG Gottfried Wilhelm Leibniz Programı aracılığıyla finansal desteği kabul ediyoruz. Ayrıca, bu araştırma projesi Marie Skłodowska-Curie Hibe Anlaşması No altında Avrupa Birliği Horizon 2020 araştırma ve yenilik programından fon almıştır. H2020-MSCA-IF-2015-703745-CONSALT.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
50-ml centrifuge tube by Falcon | VWR | 734-0453 | |
Formaldehyde solution, 37% | Carl Roth | CP10.2 | acid-free, stabilized with ~10% MeOH |
Glacial acetic acid | Alfa Aesar | 36289.AP | |
Eosin Y disodium salt | Sigma-Aldrich | E4382 | certified by Biological Stain Commission |
Phosphate Buffered Saline (PBS) | Merck | L1825 | Dulbecco's formualtion, w/o calcium and magnesium |
Sample Tubes by Nalgene | Carl Roth | ATK5.1 | |
Rocking Shaker ST5 | CAT | 60281-0000 | |
Cellulose tissue paper | VWR | 115-0600 | |
Forceps, by USBECK Laborgeräte | VWR | 232-0096 | |
Microcentrifuge tubes by Eppendorf | VWR | 211-2120 | safe-lock, 2.0 ml |
Ethanol absolute by Baker Analyzed | VWR | 80252500 | |
Disposable safety scalpel by Aesculap | VWR | AESCBA210 | |
Petri dish by Sterilin | VWR | 391-2019 | |
Plastic pasteur pipette | Carl Roth | EA68.1 | graduated, 1 ml |
Desiccator by Duran | VWR | SCOT247826954 | |
Silicone grease by Bayer | Sigma-Aldrich | 85404 | high-vacuum |
Carbon dioxide cylinder with standpipe | Linde | 3700113 | 10 kg, short |
micro-porous treatment capsule | PLANO GmbH | 4614 | pore size 78 µm (B) |
Bal-Tec CPD 030 | Bal-Tec AG | CO2 as drying agent | |
Stemi 2000-C stereomicroscope with KL 1500 LCD | Zeiss | this stereomicroscope has been updated(1) | |
Zeiss Xradia Versa 500 | Zeiss | this microCT scanner has been updated(2) | |
Avizo Fire 8.1 | Thermo Fisher Scientific | ||
PILATUS detector as part of the nanoCT scanner | Dectris | single-photon counting detector(4,5); there are commercially availble nanoCT systems available (6,7) | |
nanofocus X-ray source as part of the nanoCT scanner | Excillum | high-flux nanofocus X-ray transmission tube(3); there are commercially availble nanoCT systems available(6,7) | |
(1) Germany, Z. ZEISS product information: ZEISS stereomicroscopes https://www.micro-shop.zeiss.com/de/de/system/Stereomikroskope/1006> (September 06, 2019). | |||
(2) Germany, Z. ZEISS product information: ZEISS Xradia 510 Versa https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/x-ray-microscopy/zeiss-xradia-510-versa.html> (April 10, 2019). | |||
(3) Nachtrab, F. et al. Development of a Timepix based detector for the NanoXCT project. Journal of Instrumentation 10 (11), C11009, (2015). | |||
(4) Kraft, P. et al. Performance of single-photon-counting PILATUS detector modules. Journal of Synchrotron Radiation 16 (3), 368-375, (2009). | |||
(5) Kraft, P. et al. Characterization and calibration of PILATUS detectors. IEEE Transactions on Nuclear Science 56 (3), 758-764, (2009). | |||
(6) Germany, Z. ZEISS product information: ZEISS Xradia 810 Ultra https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/x-ray-microscopy/xradia-810-ultra.html> (April 9 2019). | |||
(7) Company, G. E. GE product information: Phoenix nanotom m, https://www.gemeasurement.com/sites/gemc.dev/files/geit-31344en_nanotom_m_0517.pdf> (April 10, 2019). |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır