Üç Günlük Gelişmekte Olan Civciv Embriyosu Kullanılarak Hook İskemi-Reperfüzyon Modelinin Üretimi

Özet

Bu makalede, I/R gelişimini ve tedavisini daha iyi anlamak için omurilik iğnesi özelleştirilmiş kanca kullanılarak 3 günlük civciv embriyosunda iskemi-reperfüzyon (I/R) modellemesi açıklanmaktadır. Bu model basit, hızlı ve ucuzdur.

Özet

Miyokard enfarktüsü, inme ve periferik vasküler hastalık gibi iskemi ve reperfüzyon (I/R) bozuklukları hastalık ve ölümün önde gelen nedenlerinden birkaçıdır. Birçok in vitro ve in vivo model şu anda hastalık veya hasarlı dokularda I/R mekanizmasını incelemek için mevcuttur. Bununla birlikte, bugüne kadar, I/R mekanizmalarının daha iyi anlaşılmasını ve daha hızlı ilaç taramasını sağlayacak ovo I/R modelinde hiçbir şey bildirilmemiştir. Bu makalede, I/R gelişim ve tedavi mekanizmalarını anlamak için 3 günlük civciv embriyosunda omurilik iğnesi özelleştirilmiş kanca kullanılarak yapılan I/R modellemesi açıklanmaktadır. Modelimiz DNA, RNA ve protein seviyelerindeki anomalileri araştırmak için kullanılabilir. Bu yöntem basit, hızlı ve ucuzdur. Mevcut model bağımsız olarak veya mevcut in vitro ve in vivo I/R modelleri ile birlikte kullanılabilir.

Giriş

İskemi-reperfüzyon dokusu hasarı kalp krizi, iskemik inme, travma ve periferik vasküler hastalık dahil olmak üzere bir dizi patoloji ile bağlantılıdır1,2,3,4,5. Bunun nedeni öncelikle hastalığın ilerlemesinin kapsamlı bir şekilde anlaşılmaması ve etkili bir araştırma modelinin bulunmamasıdır. İskemik yaralanma, dokunun belirli bir bölgesine kan akışı kesildiğinde meydana gelir. Sonuç olarak, iskemik doku sonunda nekrotize edilir, ancak oran dokuya bağlı olarak değişir. Bu nedenle, kan akışının geri yüklenme....

Protokol

Era's Lucknow Tıp Koleji ve Hastanesi Kurumsal Hayvan Etik Komitesi, bu deneylerin Hayvanlar Üzerinde Deneylerin Kontrol ve Gözetimi Komitesi (CPCSEA) uyarınca yapılması için resmi bir onay gerek olmadığını belirten yazılı bir feragatname yayınladı. Bununla birlikte, embriyonik sıkıntı potansiyelini en aza indirmek için Standart Çalışma Prosedürleri izlendi.

1. Tampon hazırlama (Tablo 1)

1. Ringer'ın çözümünü hazırlayın
   1. Ringer'ın çözümünü hazırlamak için, 0,72 g NaCl (123 mM), 0,017 g _CaCl2 (1,53 mM), 0,037 g KCl (4,96 mM) 70 mL steril damıtılmış _H2O'da son hacim 100 mL çözün. pH'ı 7,4'e....

Sonuçlar

Modelimizin etkinliğini değerlendirmek için Doppler Kan Akışı Görüntüleme tekniği kullanılmıştır. Kısacası, yarattığımız başarıyı belirlemek için kontrol grubundan gelen verileri RVA grubundan gelen verilerle karşılaştırdık. Şekil 4A , kontrol hayvanıyla ilişkili tipik bir akıyı tasvir ederken, Şekil 4B bir RVA'dan elde edilen sonuçları tasvir eder. Sayısal 1-8, I/R aşamalarıyla ilişkili çeşitli olayları temsil eder. K.......

Tartışmalar

İskemi-reperfüzyon araştırmalarının amacı, hücre ölümünü önleyen ve iyileşmeyi teşvik eden terapötik stratejiler ^{oluşturmaktır29,30}. I/R araştırmalarındaki mevcut kısıtlamaların üstesinden gelmek için güvenilir ve tekrarlanabilir bir I/R modeli üretmek için hook I/R civciv embriyo modeli tasarladık. Bilgimize göre, bizimki, stres sinyallerini (örneğin, oksidatif ve enflamatuar stres) incelemenin yanı sıra, rutin I /R deneyleri i.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
(-80°C) freezer	Haier, China	-
1.5mL Centrifuge tube	TARSONS, India	500010X
100mm Petri dish (sterile)	Tarsons, India	460050
18G Needle (18G×1.5 (1.25×38mm)	Ramsons, India	13990
1mL Syringe	DISPO VAN	-
26G Needle (26G×1/2 (10.45x13mm)	DISPO VAN, india	30722D
37°C egg incubator with adjustable percentage humidity	Gentek, India	GL-100
37°C laboratory incubator	SCIENCE TECH, India	CB 101-14
3-Methyladenine (3-MA)	Sigma Aldrich, USA	M9281
3mL Pasture Pipette	TARSONS, India	940050
50mL Beaker	TARSONS, India	-
5mL Syringe	DISPO VAN, India	IP53
70% ethanol	Merck Millipore, United States	64-17-5
Adhesive tape/Cello tape	Sunrise, India	-
Ambra1 primers	Applied Biosystems, Foster city, USA	Hs00387943_m1
Anti-mouse IgG	Cell Signaling Technology, USA	7076S
Anti-Rabbit IgG	Jackson Immuno Research Laboratories, USA	711-035-152
Atg7	R&D Systems, USA	MAB6608
Atg7 primers	Applied Biosystems, Foster city, USA	Hs00893766_m1
Autoclave Bag	Tarsons, India	550022
Autoclave Machine	Local made, Lucknow, India	-
Beclin-1	Proteintech, USA	66665-1-Ig
Beta Actin	ImmunoTag, USA	ITT07018
Bovine Serum Albumin	Himedia, Mumbai, India	TC194
Calcium Chloride	Himedia, Mumbai, India	GRM534
Catalase	ImmunoTag, USA	ITT5155
Cleaning wipes	Kimberly-Clark, India	370080
Cleaved Caspase3	ImmunoTag, USA	ITT07022
di-Sodium hydrogen phosphate heptahydrate	Himedia, Mumbai, India	GRM39611
Doppler blood flowmeter	Moors instrument, United Kingdom	moorVMS-LDF1
Egg rack	-	-
Egg rack	-	-
GAPDH	ImmunoTag, USA	M1000110
GAPDH primers	Applied Biosystems, Foster city, USA	Hs02758991_g1
Glycine	Himedia, Mumbai, India	MB013
Kidney tray	HOSPITO	-
LC3A/B	Cell Signaling Technology, USA	4108S
Methanol	Rankem laboratories, Mumbai, India	M0252
Micromanipulator	Narishige, Japan	M-152
N-acetyl-L-cysteine (NAC)	Sigma Aldrich, USA	A7250
Naringenin	Sigma Aldrich, USA	67604-48-2
NF-kβ	Thermo Fisher Scientific, USA	51-0500
NLRP3	ImmunoTag, USA	ITT07438
Nose plier	Local made, Lucknow, India	-
Ocular forceps	Stoelting, Germany	52106-40
Ocular iris	Tufft Surgical Instruments, Jaipur, India	Hard Age Vannas Micro Scissors Angled 8CM / 3 1/8"
OHP marker pen	Camlin, India	-
ORP-150	ImmunoTag, USA	ITT08329
Pointed sharp edge scissor	Stoelting, Germany	52132-11
Potassium Chloride	Himedia, Mumbai, India	MB043
Potassium phosphate monobasic anhydrous	Himedia, Mumbai, India	MB050
Protease Inhibitor	Abcam, United States	Ab65621
SOD-1	ImmunoTag, USA	ITT4364
Sodium Chloride	Fisher Scientific, Mumbai, India	27605
Sodium dodecyl sulphate	Himedia, Mumbai, India	GRM886
Spinal needle 25GA; 3.50 IN (90.51 X 90mm)	Ramson, India	GS-2029
Stereo Zoom surgical microscope	Olympus, Japan	SZ2-STU3
Syringe discarder	BIOHAZARD	882210
Toothed forceps	Stoelting, Germany	52102-30
Tris Base	G Biosciences, United States	RC1217
Tris Hydrochloric Acid	Himedia, Mumbai, India	MB030
Tween 20	G Biosciences, United States	RC1227
White Leghorn Chicken 0-day eggs	-	-
Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK	MP Biomedicals, LLC, USA	FK009