Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
* Bu yazarlar eşit katkıda bulunmuştur
Burada, deneysel bir miyokard enfarktüsü modelini, kardiyak yeniden şekillenme ve fonksiyonu incelemek için bir ekokardiyografi prosedürünü ve pikrosirius kırmızı lekeli ve rodamin lekeli bölümlerde fibroz ve hipertrofiyi ölçme prosedürlerini ve ayrıca Masson'un trikrom ile boyanmış dilimlerde enfarktüs boyutunu ve genleşme indeksini açıklıyoruz.
Kardiyovasküler hastalık, Batı ülkelerinde en yaygın ölüm nedenidir ve akut miyokard enfarktüsü (MI) en yaygın formdur. Bu makale, galektin 3'ün (Gal-3) bir deney hayvanı MI modelinde kardiyak iyileşmenin zamansal evrimi ve yeniden şekillenmesindeki rolünü incelemek için bir protokolü açıklamaktadır.
Açıklanan prosedürler arasında, erkek C57BL / 6J (kontrol) ve Gal-3 nakavt (KO) farelerinde kalıcı bir koroner ligatür ile deneysel bir MI modeli, in vivo kardiyak yeniden şekillenme ve sistolik fonksiyonu incelemek için bir ekokardiyografi prosedürü, enine kesit alanı (MCSA) ile miyosit hipertrofisinin incelenmesi için pikrosirius kırmızı lekeli ve rodamin konjuge lektin lekeli kesitler ile interstisyel miyokard fibrozunun histolojik bir değerlendirmesi, ve Masson'un trikrom ve trifenil tetrazolyum klorür ile boyanmış dilimlerde planimetri ile enfarktüs boyutunun ve kardiyak yeniden şekillenmenin (yara inceli, septum kalınlığı ve genleşme indeksi) nicelleştirilmesi. Dört-3 MI'lı KO fareleri, kardiyak yeniden şekillenme bozukluğu ve yara izi incelme oranında ve genişleme indeksinde bir artış gösterdi. MI'nın başlangıcında, miyokard fonksiyonu ve kardiyak yeniden şekillenme de ciddi şekilde etkilendi. MI'dan 4 hafta sonra, enfarktüslü Gal-3 KO farelerinde fibrozun doğal evrimi de etkilenmiştir.
Özetle, MI'nın deneysel modeli, Gal-3 ve diğer hayvan modellerinin genetik delesyonu ile farelerde kardiyak onarımın ve yeniden şekillenmenin zamansal evrimini incelemek için uygun bir modeldir. Gal-3 eksikliği, kardiyak onarımın dinamiklerini etkiler ve MI'dan sonra kardiyak yeniden şekillenme ve fonksiyonun evrimini bozar.
Miyokard enfarktüsü (MI), kardiyovasküler hastalıkların en yaygın şeklidir. MI'dan sonra miyokard, MI enfarktüs bölgesinin iyileşmesi, ventriküler yeniden şekillenme (VR) ve miyokard disfonksiyonu1 dahil olmak üzere seri morfolojik ve fonksiyonel değişikliklere uğrar. MI'nın iyileşmesi, fibrotik bir skar oluşumu ile sonuçlanan derin inflamatuar infiltrasyon ile ilişkili dinamik ve iyi düzenlenmiş bir süreçtir 2,3. Farelerde MI'nın deneysel modeli şu anda patolojik koşullar 4,5 altında kardiyak yeniden şekillenmeyi incelemek için kullanılmaktadır ve kalıcı bir koroner ligatürü indüklemek için tekrarlanabilir ve etkili bir prosedür geliştirmek için kesin cerrahi protokolün farkındalığı esastır. Bu yöntem, MI'nın iyileşmesini ve sol ventrikül yeniden şekillenmesinin (LVR) zamansal evrimi ve MI ile ilişkili kardiyak disfonksiyondaki önemini incelemek için gereklidir.
Galektinler, hücre içi ligandlarda, zar reseptörlerinde ve hücre dışı glikoproteinlerde spesifik karbonhidratları tanıyan bir lektin grubudur. Galectin 3 (Gal-3), hücre yüzeyindeki glikokonjugatlardaki N- ve O-glikanların tanınması ve çapraz bağlanması yoluyla etki eden bu ailenin bir üyesidir ve bağışıklık sistemi6'da yaygın olarak eksprese edilir. Önceki çalışmalar, Gal-3'ün kardiyovasküler hastalıklarda inflamasyon ve fibrozun düzenleyicisi olarak rolünü araştırmıştır 7,8,9,10,11,12. İyileşme sırasında inflamasyonun düzenleyici faktörlerini hedeflemek son derece önemlidir, çünkü inflamasyon yeniden şekillenmenin evrimini önemli ölçüde etkileyebilir, MI sonrası ventriküler yeniden şekillenmenin zamansal evrimini incelemek için bir protokol tanımlamayı amaçladık ve Gal-3'ün genetik mutasyonunun MI'da iyileşmenin zamansal evrimini nasıl değiştirdiğini ve farelerde kardiyak yeniden şekillenmeyi ve işlevi nasıl etkilediğini belirlemek için adımlar ve yöntemler.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
NOT: Bu protokolde açıklanan tüm deneyler, Buenos Aires Üniversitesi Hayvan Bakım ve Araştırma Komitesi (CICUAL) tarafından, Ulusal Araştırma Konseyi (ABD) Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzunun Güncellenmesi Komitesi ile uyumlu olarak onaylanmıştır13. Deneyler için, ameliyat için daha iyi manipülasyona izin veren 30-35 g ağırlığında erkek, yaşa uygun C57BL / 6J ve Gal-3 KO fareleri (8-10 haftalık) kullanın. Hayvanların suya ve yiyeceğe erişmesine izin verin ad libitum. Gal-3 KO fareleri, kontrol C57BL / 6J fareleri ile aynı biyokaynak tesislerinde bir C57BL / 6J arka planı üzerinde yetiştirildi.
1. Cerrahi alan ve aletler
2. Anestezi ve entübasyon
3. Çalışma tasarımı
4. Ekokardiyografi
NOT: Fare ekokardiyogramları için, duvar çaplarının ve boşluk boyutlarının uygun şekilde görselleştirilmesi için 10 MHz'in üzerindeki doğrusal dönüştürücüler kullanılmalıdır. Bu işlem anestezi altında 1.15 mL/kg intraperitoneal (IP) avertin ile veya bilinçli hayvanlarda yapılabilir. Bununla birlikte, ikincisi, manipülasyonun neden olduğu stres ve kaygı nedeniyle MI'lı farelerde kafa karıştırıcı sonuçlara yol açabilir.
5. Histoloji değerlendirmesi
6. Kardiyak yeniden şekillenmeyi değerlendirmek için enfarktüs boyutunun ve planimetrinin kantitatif olarak belirlenmesi
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
MI sonrası sağkalım ve nekropsi
4 haftalık takip boyunca, C57 farelerinin% 17'si (4/23) ve Gal-3 KO farelerinin% 40'ı (8/20) ölü bulundu. Nekropsi yapıldı; ölü Gal-3 KO fareleri, C57 farelerinden daha büyük kalpler gösterdi (Şekil 1) ve C57 farelerinin% 38'i, Gal-3 KO farelerinin% 32'si ile karşılaştırıldığında, doğrudan kalp yırtılması ile ilişkili makroskopik göğüs pıhtılarına...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Kalıcı koroner arter ligatürü ile MI'nın deneysel modeli, kardiyak onarımın çok çeşitli patofizyolojik mekanizmalarını incelemek ve yeniden modellemek için kullanılır 5,14,17. Bu makale, kardiyak onarımın zamansal evrimini ve bunun MI sonrası ventriküler yeniden şekillenme üzerindeki etkilerini incelemek için şu anda bu laboratuvarda kullanılan farklı yöntemleri özetle...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Yazarların beyan edebilecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Yazarlar, Ana Chiaro'nun teknik yardımını minnetle takdir ediyorlar. Bu çalışma, Arjantin Bilim ve Teknolojiyi Teşvik Ajansı (PICT 2014-2320, 2019-02987 ve PICT 2018-03267'den VM'ye) ve Buenos Aires Üniversitesi'nden (UBACyT 2018- 382 20020170100619BA'dan GEG'e) alınan hibelerle desteklenmiştir.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
8-0 silk suture | Ethicon | ||
C57BL/6J mice | Department of Bioresources of the Faculty of Veterinary of the University of Buenos Aires, Argentina | ||
Forceps | |||
Hardvard 386 respirator | Hardvard company | ||
Heating pad | maintain animal's temperature during surgery | ||
Image Pro-Plus 6.0 | Media Cybernetics | Image Analysis Software | |
Ketamine | Holiday | ||
Masson Trichrome | BIOPUR | ||
Picrosirius red | BIOPUR | ||
Retractors | |||
Rodent Ventilator Model 683 | Harvard Apparatus | Mechanical ventilator | |
Scissors | |||
Stereoscopic magnifying glass | Arcano | ||
Vivid 7 machine (General Electric Medical Systems, Horten, Norway) | General Electric | Any tracking software can be utilized with this protocol | |
WGA no. RL-1022, Vector Laboratories, Burlingame | Vector Laboratories | ||
Xylazine | Pro-Ser |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır