JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Beyin sekretomunu, merkezi sinir sisteminin gelişiminde ve normal işleyişinde çok önemli bir rol oynar. Bu yazıda, ex vivo beyin dilimi kültürlerinden beyin sekretomunun izolasyonu için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

Özet

Beyin sekretomunu, sinir sisteminin hücre dışı matrisinde proteolitik bölünme ile hücre yüzeyinden aktif olarak salgılanan veya dökülen proteinlerden oluşur. Bu proteinler, diğerlerinin yanı sıra, merkezi sinir sisteminin gelişimi ve normal işleyişinde geniş bir rol yelpazesini kapsayan büyüme faktörü reseptörlerini ve transmembran proteinleri içerir. Beyin omurilik sıvısından sekretomu çıkarmak için mevcut prosedür karmaşık ve zaman alıcıdır ve bu proteinleri deneysel hayvan beyinlerinden izole etmek zordur. Bu çalışmada, fare beyin dilimi kültürlerinden beyin sekretomunu izole etmek için yeni bir protokol sunuyoruz. İlk olarak, beyinler ex vivo olarak izole edildi, dilimlendi ve kültürlendi. Kültür ortamı daha sonra süzüldü ve birkaç gün sonra santrifüjleme ile proteinleri izole etmek için konsantre edildi. Son olarak, izole edilen proteinler sodyum dodesil-sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) kullanılarak çözüldü ve daha sonra western blot ile saflık karakterizasyonu için incelendi. Beyin sekrettomunun ex vivo beyin dilimi kültürlerinden bu izolasyon prosedürü, sekretomun otizm spektrum bozuklukları gibi çeşitli nörogelişimsel hastalıklar üzerindeki etkilerini araştırmak için kullanılabilir.

Giriş

Sinir sisteminin hücre dışı matrisi, "sekretom" adı verilen, hücre yüzeyinden aktif olarak salgılanan veya dökülen proteinlerden oluşur. Beyin sekretomunu, merkezi sinir sisteminin gelişimi ve normal işleyişinde geniş bir rol yelpazesini kapsayan büyüme faktörü reseptörleri ve transmembran proteinler1 gibi proteinler içerir. Özellikle mikroglia ve astrositler de dahil olmak üzere glial hücreler tarafından salgılanan çok sayıda protein, merkezi sinir sistemindeki nöroinflamasyon da dahil olmak üzere çok çeşitli glial durumları yansıtır2. Protein sekretomunun hem nöroprotektif hem de nörotoksik etkilere sahip olduğu gösterilmiştir. Örneğin, sinaptik kavşakların3 yapısını ve işlevini düzenleyen post-sinapslarda bulunan bir transmembran protein olan nöroligini kodlayan genlerin, otizm spektrum bozuklukları için bir risk faktörü olduğu bulunmuştur. Nöroligin, transmembran proteinlerin ektodomainlerinin hücre yüzeyinden sekretom4,5 şeklinde zardan bölünme yoluyla salındığı ektodomain dökülmesi adı verilen bir süreçten geçer.

Beyin omurilik sıvısında beyin içindeki sekretomda bulunan birçok protein tespit edilebilir; Bu nedenle, bu sıvının proteomik analizi, nörolojik hastalıkların yeni fizyolojik ve patolojik mekanizmalarının ve biyobelirteçlerinin tanımlanmasına yardımcı olabilir 6,7. Beyin sekretom proteinlerinin fizyolojik işlevlerinin çoğu bilinmemektedir ve daha fazla araştırma gerektirir. Beyin sekretomunu çıkarmak için etkili bir prosedürün oluşturulması bu çalışmalar için kritik öneme sahiptir. Bununla birlikte, beyin omurilik sıvısından sekretomu çıkarmak için mevcut prosedür karmaşık ve zaman alıcıdır ve bu proteinleri deneysel hayvan beyinlerinden izole etmek zordur8. Bu yazıda, sekretomu fare beyin dilimlerinden izole etmek için yeni bir protokol sunuyoruz.

İn vitro olarak kültürlenen beyin dilimleri, normal ve sağlam sinaptik devreleri, reseptör dağılımını, verici iletimini ve diğer fizyolojik fonksiyonları koruyarak beyin dokusu ile aynı hücre tiplerini ve üç boyutlu hücre yapısını içerir. Model, hücre büyümesinin ve hayatta kalmasının sürdürülmesini sağlamak için beyin dilimleri uygun bir kültür ortamına yerleştirildiğinde farelerde sinir hücrelerinin büyümesini ve işleyişini taklit eder. Bu çalışmada, fare beyin dilimleri nörosekretuar proteinleri9 salgılamaya devam etti ve izole edilen beyin diseke edildi ve steril koşullar altında bir filtre ekine yerleştirildi. Filtre ekleri, kültür ortamını içeren 6 oyuklu plakalara yerleştirildi. Nöronlar ve glial hücreler tarafından salgılanan proteinlerin, ekin zarına nüfuz edebileceği, ancak hücrelere nüfuz edemediği göz önüne alındığında, beyin sekretomu bu nedenle koşullu kültür ortamından toplanabilir.

Bu makale, (i) beyin dilimlerinin izolasyonu, (ii) beyin dilimlerinin toplanması, (iii) koşullu ortamdan beyin dilimi kültürlerinin toplanması, (iv) western blot analizleri ve (v) proteomik analiz için temel prosedürleri açıklamaktadır (Şekil 1).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Bu protokol onaylanmıştır ve Güney Bilim ve Teknoloji Üniversitesi Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (SUSTech-JY202112006) tarafından belirlenen hayvan bakımı yönergelerini takip etmektedir. Bu çalışmada yetişkin erkek ve dişi C57BL / 6J fareleri (6-8 haftalık, 22-30 g) kullanıldı. Fareler, 22-25 ° C'de, 12 saat ışık ve 12 saat karanlıktan oluşan bir sirkadiyen döngüde, yiyecek ve suya ad libitum erişimi ile barındırıldı. Protokolün adımları aşağıdaki gibi sıralanmıştır.

1. Beyin dilimlerinin izolasyonu

  1. Cerrahi aletleri hazırlayın: oftalmik bükme cımbızı, beherler (250 mL, 500 mL), filtre kağıdı, makas, tıraş bıçağı, tek taraflı bıçak ve fırça kalemi. Bu aletleri soğuması için kırılmış buzla dolu bir köpük kutuya yerleştirin.
  2. %95O2 ve %5 CO2 içeren karışım gazının vanasını açın. Gaz borusu kafasını ultra saf su dolu bir kabın içine yerleştirerek temizleyin.
  3. Aşağıdaki bileşenleri kullanarak buz gibi soğuk diseksiyon tamponunu hazırlayın: 225 mM sükroz, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH2PO4, 26 mM NaHCO3, 11 mM D-glikoz, 5 mM L-askorbik asit, 3 mM sodyum piruvat, 7 mM MgSO4 ve 0.5 mM CaCl2. PH'ı 7.3-7.4'e ayarlayın.
  4. Kültür çözeltisini aşağıdaki bileşenlerle hazırlayın: 122 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH2PO4, 26 mM NaHCO3, 11 mM D-glikoz, 7 mM MgSO4 ve 0.5 mM CaCl2. PH'ı 7.3-7.4'e ayarlayın, ardından süzün ve kültür çözeltisine% 10 penisilin-streptomisin çözeltisi (P / S) ekleyin.
  5. Fareleri kurban etmeden önce kültür solüsyonunu ve diseksiyon solüsyonunu 30 dakika oksijenlendirin. Dilimin yarısını almak için tıraş bıçağını kırın ve ardından dilimleyiciye monte edin. Dilimleyicinin tabanını ve alet tutucusunu takın.
  6. Fareleri servikal çıkık ile veya% 2 -% 3 izofloran kullanarak uyuşturmak için feda edin.
    1. Boyundaki kafatasını kesmek için makas kullanın. Tüm kafatasını ortaya çıkarmak için kafatasının ortasındaki cildi kesin.
    2. Kafatasını medyan çizgi boyunca kesmek için oftalmik makas kullanın ve kafatasını ayırmak için kavisli göz forseps kullanın.
    3. Son olarak, kafatasının tabanına ulaşmak için kavisli forseps kullanın ve taban sinirini kesin; Artık beynin tamamı çıkarılabilir.
  7. Beyni hızla buz gibi bir diseksiyon tamponuna yerleştirin. Alt kısım da dahil olmak üzere beynin fazla kısımlarını kesmek için keskin, sterilize edilmiş, tek taraflı bir bıçak kullanın.
  8. Uygun yapıştırıcı kullanarak beyin dokusunu tanka yapıştırın. Dilimleme solüsyonunu tanka dökün, beyin dokusunun kaplandığından emin olun ve oksijenlenmeye devam edin.
  9. Dokuyu 300 μm kalınlığında bölümlere ayırmak için vibratom parametrelerini ayarlayın. Bu çalışmada kullanılan dilimleyicinin hızı ve frekansı sırasıyla 0,3 mm/s ve 70 Hz idi.
  10. Beyin dilimlerini çıkarmak için bir fırça kullanın ve bunları kültür solüsyonuyla birlikte bir tabağa koyun. Daha sonra, 1.5 mL kültür çözeltisi içeren 6 oyuklu plakalarda her 30 mm, 0.4 μm gözenek boyutunda doku kültürü ekine iki ila dört dilimi, dilimlerin birbirine girmesine izin vermeyecek bir mesafede aktarın.
  11. Dokuları 37 ° C,% 5 CO2 ve% 95 nemde 14 saat inkübe edin.

2. Beyin dilimi toplama

  1. Kültür ortamını lamel den aspire edin ve beyin dilimini bir fırça ile nazikçe 1.5 mL'lik tüpe aktarın.
  2. Tüpe 1 mmol/L fenilmetilsülfonil florür (PMSF) içeren 200-400 μL Hanks' dengeli tuz çözeltisi (HBSS) ekleyin. Bir doku öğütücü kullanarak homojen bir çözelti oluşturmak için titizlikle salınır ve karıştırılır. Bu çalışmada kullanılan frekans ve zaman sırasıyla 800 Hz ve 60 s idi.
  3. Süspansiyonu 700 ° C'de 10 dakika boyunca 4 x g'da santrifüjleyin. Ardından, süpernatanı yeni bir 1.5 mL santrifüj tüpüne toplayın.
  4. Süpernatana 20-40 μL %20 Triton X-100 ekleyin ve numuneyi 1 saat boyunca 4°C'de sallanan bir çalkalayıcı ile döndürün.
  5. Süspansiyonu 13.000 x g'da 4 ° C'de 20 dakika santrifüjleyin ve süpernatanı toplayın. Tüm beyin dilimi örneklerini bir bikinkoninik asit (BCA) protein tahlil kiti kullanarak 2 μg/μL'lik bir protein konsantrasyonuna normalleştirin.
  6. Süpernatanı 5x sodyum dodesil sülfat (SDS) yükleme tamponunda (%10 SDS, 10 mM ditiotreitol [DTT], 250 mM Tris-HCl [pH 6.8], %30 [h/h] gliserol ve %0.05 [a/h] bromofenol mavisi boya) içinde karıştırın ve numuneyi 95 °C'de 5 dakika kaynatın.
  7. Hazırlanan numuneleri -20 °C'de dondurun. Daha sonra elektroforez ve western blotlama yöntemleriyle tespit edilmeye tabi tutulacaklar.

3. Beyin dilimi kültürü şartlandırılmış ortamın (CM) toplanması

  1. Kültür ortamını 14 saat sonra aspire edin ve CM'yi 0.22 μm'lik bir filtre kullanarak filtreleyin.
  2. Şartlandırılmış ortamı, 4 ° C'de 50 dakika boyunca 9.000 x g'da 10 kDa ultrafiltrasyon santrifüj tüpü ile 100 μL'ye kadar konsantre edin. BCA protein tahlil kitini kullanarak tüm ortam numunelerini 0.8 μg/μL'lik bir protein konsantrasyonuna normalleştirin.
  3. Şartlandırılmış ortamı 5x SDS yükleme tamponunda süzün ve 95 °C'de 5 dakika kaynatın.
  4. Hazırlanan numuneleri -20 °C'de dondurun. Daha sonra elektroforez ve western blotlama yöntemleriyle tespit edilmeye tabi tutulacaklar.

4. Western blot analizleri

  1. Sodyum dodesil-sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) jelini daha önce tarif edildiği gibi hazırlayın10. Beyin dilimini ve orta numuneyi prekast SDS-PAGE jellerine yükleyin. Numuneleri başlangıçta 30 dakika boyunca 80 V'luk sabit bir voltajda ve ardından 70 dakika boyunca 120 V'luk sabit bir voltajda ayırın.
  2. Proteinleri poliviniliden diflorür (PVDF) membranlarına aktarın ve tris-tamponlu salin-Tween 20'de (TBST; 150 mM NaCl, 20 mM Tris, %0.1 Tween-20, pH 7.4) %5 sığır serum albümini (BSA) ile bloke edin.
  3. TBST'ye aşağıdaki gibi birincil antikorlar ekleyin: fare anti-sAPP-α (1: 5.000 antikor seyreltme oranı), tavşan anti-kümeleyin (1: 5.000 antikor seyreltme oranı), fare anti-MAP2 (1: 5.000 antikor seyreltme oranı), fare anti-GAPDH (1: 5.000 antikor seyreltme oranı) ve fare anti-aktin (1: 5.000 antikor seyreltme oranı) ve bir rocker üzerinde 4 ° C'de gece boyunca inkübe edin.
  4. Membranı TBST ile her biri 15 dakika boyunca üç kez yıkayın.
  5. TBST tamponuna aşağıdaki gibi uygun bir ikincil antikor ekleyin: m-IgGκ BP-HRP (1: 5.000 seyreltme), fare anti-tavşan IgG-HRP (ikincil antikor seyreltme oranı 1: 5.000). 1-2 saat inkübe edin.
  6. Membranı TBST kullanarak her biri 15 dakika boyunca üç kez yıkayın.
  7. Uygun bir görüntüleme sistemi kullanarak membranları tarayın ve görüntüleyin.

5. Proteomik analiz

  1. Bu çalışmada, kültür ortamını (CM) adım 3.1'e göre toplayın ve ardından 4 ° C'de 40 dakika boyunca 9.000 x g'da 3 kDa'lık bir konsantrasyon tüpü kullanarak 80 μL'lik bir nihai hacme konsantre edin. CM numunesini buz üzerinde saklayın ve kütle spektrometresi analizini bekleyin.
  2. Önceki makaleler 11,12,13'te açıklanan protokolleri izleyerek numuneler için proteomik tespit ve analiz yöntemlerini gerçekleştirin.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Beyin dilimlerinde hücre dışı proteinlerin salgılanmasını ölçmek için, beyin dilimi örneklerinin protein konsantrasyonlarını inceledik ve BCA tahlil deneyleri yoluyla ortam örneklerini şartlandırdık. Beyin dilimi örnekleri ve şartlandırılmış ortam örneklerinin tümü yüksek protein konsantrasyonlarına sahipti (Tablo 1 ve Şekil 2). Ortama çok sayıda hücre dışı protein salgılandığını ve ş...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Beyin sekretomunu, nöronlar veya glial hücreler tarafından hücre dışı ortama salınan nörosekretuar veya nöropeptit ürünleri olarak bilinen sinyal moleküllerinin toplanmasını ifade eder. Beyin sekretomu sinir sistemindeki birçok biyolojik ve fizyolojik süreçte kritik işlevlere sahiptir17,18. Beyin sekretomunu ve işlevlerini anlamak, beyin fonksiyonu ve bozukluklarının altında yatan mekanizmalar hakkında fik...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını belirtmektedirler.

Teşekkürler

Bu araştırma, Shenzhen Ruhsal Bozukluklar Klinik Araştırma Merkezi (20210617155253001), Guangdong Eyaleti Üst Düzey Klinik Anahtar Uzmanlıklar için Shenzhen Fonu (SZGSPO13), Shenzhen Bilim ve Teknoloji İnovasyon Komitesi (JCYJ20200109150700942), Guang Dong Eyaleti Anahtar Alan Araştırma ve Geliştirme Programı (2019B030335001) ve Shenzhen Anahtar Tıbbi Disiplin İnşaat Fonu (SZXK042) tarafından desteklenmiştir. Guangdong İl Anahtar Laboratuvarı'nın yardımı için minnettarız. İleri Biyomalzemeler.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
0.22 μm Non-Sterile Millex Syringe Filters with PES MembraneMilliporeSLGPR33RB
1,4-Dithio-DL-threitol (DTT)Merck (Sigma Aldrich)DTT-RO
6-well platesCORNING3516
Actin antibodyCell Signaling Technology #3700
APP AntibodyCell Signaling Technology2452
BioRad Mini-Protean TGX precast gelsBioRad#1610185
Bovine serum albumin (BSA)Merck (Sigma Aldrich)10735094001
Bromophenol BlueMerck (Sigma Aldrich)B0126
Brush penDeli1.00008E+11
CaCl2Merck (Sigma Aldrich)C1016
CF3COOHMerck (Sigma Aldrich)302031
CH3CNMerck (Sigma Aldrich)34851
Clusterin antibodyCell Signaling Technology#42143
D-GlucoseMerck (Sigma Aldrich)G8270
Easy-nLC1200Thermo Fisher ScientificEasy-nLC1200
Filter paperROHUROHU-DLLZ00105
GAPDH antibodyCell Signaling Technology# 5174S
GlycerolMerck (Sigma Aldrich)G5516-100ML
Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS)Invitrogen (Gibco)14175095
Human/Rat NLGN2 AntibodyR&D SystemsAF5645
ICH2CONH2Merck (Sigma Aldrich)I6125
Immun-Blot PVDF membranesBIO-RAD#1620177
KClMerck (Sigma Aldrich)P3911
L-Ascorbic AcidMerck (Sigma Aldrich)A92902
Map2 antibodyCell Signaling Technology# 4542S
MgSO4Merck (Sigma Aldrich)M7506
m-IgGκ BP-HRPSANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-516102
Millicell-CM 0.4 μmMilliporePIHP03050
Millipore AmiconUltra-0.5MLMilliporeUFC5010
mouse anti-rabbit IgG-HRPSANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-2357
NaH2PO4Merck (Sigma Aldrich)S0751
NaHCO3Merck (Sigma Aldrich)S5761
NH4HCO3Merck (Sigma Aldrich)A6141
ParenzymeThermo Fisher ScientificR001100
Penicillin-Streptomycin Solution(P/S)Invitrogen (Gibco)15070063
Pierce BCA Protein Assay KitThermo Fisher Scientific23225
QEactiveThermo Fisher ScientificIQLAAEGAAPFALGMAZR
Rabbit Anti-Goat IgG (H&L)-HRP ConjugatedEasybioBE0103-100
Razor bladeBFYING EAGLEHX-L146-1H
Sodium chloride NaClMerck (Sigma Aldrich)S6150
Sodium dodecylsulfate (SDS)Merck (Sigma Aldrich)V900859
Sodium PyruvateMerck (Sigma Aldrich)P2256
SpeedVac SRF110 Refrigerated Vacuum Concentrator (German)Thermo Fisher ScientificSRF110P2-115
SucroseMerck (Sigma Aldrich)G8270
Tissue grinderSCIENTZSCIENTZ-48
Tris (Hydroxymethyl)Merck (Sigma Aldrich)TRIS-RO
TritonX-100Merck (Sigma Aldrich)T8787
Tween-20Merck (Sigma Aldrich)P1379
Vibratory slicerLeicaLeica VT 1000S

Referanslar

  1. Martín-de-Saavedra, M. D., et al. Shed CNTNAP2 ectodomain is detectable in CSF and regulates Ca2+ homeostasis and network synchrony via PMCA2/ATP2B2. Neuron. 110 (4), 627-643 (2022).
  2. Jha, M. K., et al. The secretome signature of reactive glial cells and its pathological implications. Biochimica et Biophysica Acta. 1834 (11), 2418-2428 (2013).
  3. Maćkowiak, M., Mordalska, P., Wędzony, K. Neuroligins, synapse balance and neuropsychiatric disorders. Pharmacological Reports. 66 (5), 830-835 (2014).
  4. Suzuki, K., et al. Activity-dependent proteolytic cleavage of neuroligin-1. Neuron. 76 (2), 410-422 (2012).
  5. Venkatesh, H. S., et al. Targeting neuronal activity-regulated neuroligin-3 dependency in high-grade glioma. Nature. 549 (7673), 533-537 (2017).
  6. Shen, F., et al. Proteomic analysis of cerebrospinal fluid: toward the identification of biomarkers for gliomas. Neurosurgical Review. 37 (3), 367-380 (2014).
  7. Suk, K. Combined analysis of the glia secretome and the CSF proteome: neuroinflammation and novel biomarkers. Expert Review of Proteomics. 7 (2), 263-274 (2010).
  8. Pegg, C. C., He, C., Stroink, A. R., Kattner, K. A., Wang, C. X. Technique for collection of cerebrospinal fluid from the cisterna magna in rat. Journal of Neuroscience Methods. 187 (1), 8-12 (2010).
  9. Bossu, J. L., Capogna, M., Debanne, D., McKinney, R. A., Gähwiler, B. H. Somatic voltage-gated potassium currents of rat hippocampal pyramidal cells in organotypic slice cultures. The Journal of Physiology. 495, 367-381 (1996).
  10. Hirano, S. Western blot analysis. Methods in Molecular Biology. 926, 87-97 (2012).
  11. Davey, J. R., et al. Integrated expression analysis of muscle hypertrophy identifies Asb2 as a negative regulator of muscle mass. Journal of Clinical Investigation Insight. 1 (5), e85477(2016).
  12. Ren, H., et al. Identification of TPD52 and DNAJB1 as two novel bile biomarkers for cholangiocarcinoma by iTRAQ-based quantitative proteomics analysis. Oncology Reports. 42 (6), 2622-2634 (2019).
  13. Li, J., et al. Identification and characterization of 293T cell-derived exosomes by profiling the protein, mRNA and MicroRNA components. PLoS One. 11 (9), 0163043(2016).
  14. Kuhn, P. H., et al. Systematic substrate identification indicates a central role for the metalloprotease ADAM10 in axon targeting and synapse function. eLife. 5, e12748(2016).
  15. Chiasserini, D., et al. Proteomic analysis of cerebrospinal fluid extracellular vesicles: a comprehensive dataset. Journal of Proteomics. 106, 191-204 (2014).
  16. Dislich, B., et al. Label-free quantitative proteomics of mouse cerebrospinal fluid detects β-site APP cleaving enzyme (BACE1) protease substrates in vivo. Molecular and Cellular Proteomics. 14 (10), 2550-2563 (2015).
  17. Chenau, J., Michelland, S., Seve, M. Secretome: definitions and biomedical interest. La Revue de Médecine Interne. 29 (7), 606-608 (2008).
  18. Assunção-Silva, R. C., et al. Exploiting the impact of the secretome of MSCs isolated from different tissue sources on neuronal differentiation and axonal growth. Biochimie. 155, 83-91 (2018).
  19. Ardianto, C., et al. Secretome as neuropathology-targeted intervention of Parkinson's disease. Regenerative Therapy. 21, 288-293 (2022).
  20. Willis, C. M., Nicaise, A. M., Peruzzotti-Jametti, L., Pluchino, S. The neural stem cell secretome and its role in brain repair. Brain Research. 1729, 146615(2020).
  21. Pandamooz, S., et al. Modeling traumatic injury in organotypic spinal cord slice culture obtained from adult rat. Tissue and Cell. 56, 90-97 (2019).
  22. Peixoto, R. T., et al. Transsynaptic signaling by activity-dependent cleavage of neuroligin-1. Neuron. 76 (2), 396-409 (2012).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Beyin SekretometresiEx Vivo Beyin Dilim K lt rleriProtein zolasyonuB y me Fakt r Resept rleriTransmembran ProteinlerMerkezi Sinir SistemiBeyin Omurilik S v sSDS PAGEWestern BlotN rogeli imsel Hastal klarOtizm Spektrum BozukluklarYeni Protokol

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır