Fitokimyasalların Helicoverpa armigera Üzerindeki İnsektisidal Etkisinin Değerlendirilmesi için Beslenme Deney Sistemi Geliştirilmesi

Özet

Bu protokol, bir fitokimyasalın lepidopteran böcek larvaları üzerindeki potansiyel toksik etkisini değerlendirmek için zorunlu besleme testini açıklar. Bu, öldürücü ve öldürücü dozu, caydırıcı aktiviteyi ve fizyolojik etkiyi optimize etmek kolay, oldukça ölçeklenebilir bir böcek biyo-tahlilidir. Bu, çevre dostu böcek ilaçlarını taramak için kullanılabilir.

Özet

Bir lepidopteran böceği olan Helicoverpa armigera, dünya çapında bir dağılıma sahip polifag bir zararlıdır. Bu otçul böcek, bitkiler ve tarımsal üretkenlik için bir tehdittir. Buna karşılık, bitkiler böceğin büyümesini ve hayatta kalmasını olumsuz yönde etkileyen çeşitli fitokimyasallar üretir. Bu protokol, bir fitokimyasalın (quercetin) böcek büyümesi, gelişmesi ve hayatta kalması üzerindeki etkisini değerlendirmek için zorunlu bir beslenme tahlili yöntemini gösterir. Kontrollü koşullar altında, yenidoğanlar önceden tanımlanmış bir yapay diyetle ikinci girişe kadar tutuldu. Bu ikinci instar larvaların 10 gün boyunca kontrol ve kuersetin içeren yapay bir diyetle beslenmelerine izin verildi. Böceklerin vücut ağırlığı, gelişim evresi, frass ağırlığı ve ölüm oranı alternatif günlerde kaydedildi. Test süresi boyunca vücut ağırlığındaki değişim, beslenme düzenindeki farklılık ve gelişimsel fenotipler değerlendirildi. Açıklanan zorunlu beslenme testi, doğal bir yutma modunu simüle eder ve çok sayıda böceğe kadar ölçeklendirilebilir. Fitokimyasalların büyüme dinamikleri, gelişimsel geçiş ve H. armigera'nın genel uygunluğu üzerindeki etkisini analiz etmeye izin verir. Ayrıca, bu kurulum beslenme parametrelerindeki ve sindirim fizyolojisi süreçlerindeki değişiklikleri değerlendirmek için de kullanılabilir. Bu makale, toksikolojik çalışmalarda, böcek öldürücü molekül taramasında ve bitki-böcek etkileşimlerinde kimyasal etkilerin anlaşılmasında uygulamaları olabilecek besleme tahlil sistemleri için ayrıntılı bir metodoloji sunmaktadır.

Giriş

Mahsul verimliliğini etkileyen biyotik faktörler esas olarak patojenik ajanlar ve zararlılardır. Çeşitli böcek zararlıları, tarımsal ürün kaybının %15 ila %35'ine neden olur ve ekonomik sürdürülebilirlik uygulamalarını etkiler¹. Coleoptera, Hemiptera ve Lepidoptera takımlarına ait böcekler, yıkıcı zararlıların ana takımlarıdır. Çevrenin son derece uyarlanabilir doğası, çeşitli hayatta kalma mekanizmalarının geliştirilmesinde lepidopteranlara fayda sağlamıştır. Lepidopteran böcekler arasında, Helicoverpa armigera (Pamuk kurdu) yaklaşık 180 farklı mahsulle beslenebilir ve üreme dokularına önemli zararlar verebilir²

Protokol

H. armigera larvaları , ICAR-Ulusal Tarımsal Böcek Kaynakları Bürosu (NBAIR), Bangalore, Hindistan'dan elde edilmiştir. Bu çalışmada toplam 21 adet ikinci instar larvası kullanıldı.

1. Nohut bazlı yapay diyetin hazırlanması

NOT: Yapay bir diyet hazırlamak için gerekli bileşenlerin bir listesi Tablo 1'de belirtilmiştir.

1. Tüm fraksiyonları Tablo 1'de listelendiği gibi bir beherde ayrı ayrı tartın ve bir spatula/manyetik karıştırıcı kullanarak homojen bir karışım hazırlayın.
2. C Fraksiyonunu yaklaşık 100 °C'de bir mikrodalga kullanarak 5 da....

Tartışmalar

Laboratuvar biyoanalizleri, sonuçları tahmin etmek ve kısa bir süre içinde makul bir maliyetle çeşitli bileşikler üzerinde karşılaştırmalı toksisite verileri üretmek için yararlıdır. Besleme biyo-tahlili, böcek-böcek ilacı ve böcek-bitki-böcek öldürücüler arasındaki etkileşimleri yorumlamaya yardımcı olur. Öldürücü doz 50 (LD₅₀), öldürücü konsantrasyon 50 (LC₅₀) veya başka herhangi bir öldürücü konsantrasyon veya doz^24,25.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agar Agar	Himedia	RM666	Solidifying agent
Ascorbic acid	Himedia	CMS1014	Vitamin C source
Bengal Gram	NA	NA	Protein and carbohydrate source
Casein	Sigma	C-5890	Protein source
Cholesterol	Sisco Research Laboratories	34811	Fatty acid source
Choline Chloride	Himedia	GRM6824	Ammonium salt
DMSO	Sigma	67-68-5	Solvent
GraphPad Prism v8.0			https://www.graphpad.com/guides/prism/latest/user-guide/using_choosing_an_analysis.htm
Methyl Paraben	Himedia	GRM1291	Antifungal agent
Multivitamin capsule	GalaxoSmithKline	NA	Vitamin source
Quercetin	Sigma	Q4951-10G	Phytochemical
Sorbic Acid	Himedia	M1880	Antimicrobail agent
Streptomycin	Himedia	CMS220	Antibiotic
Vitamin E capsule	Nukind Healthcare	NA	Vitamin E source
Yeast Extract	Himedia	RM027	Amino acid source