Entomopatojenik Fungusların Partenogenetik Böcek, Hardal Yaprak Biti, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Özet

Bu protokol, partenogenetik bir böcek olan hardal yaprak bitine (Lipaphis erysimi (Kalt.)) karşı entomopatojenik mantarların (EPF) etkinliğini değerlendirmek için optimize edilmiş bir müstakil yaprak biyo-tahlil sistemi sunar. Yöntem, Petri kabı deneyleri sırasında veri toplama sürecini özetleyerek, araştırmacıların EPF'nin hardal yaprak bitlerine ve diğer partenogenetik böceklere karşı virülansını tutarlı bir şekilde ölçmelerini sağlar.

Özet

Hardal yaprak biti (L. erysimi), çeşitli turpgillerden bitkileri istila eden ve bitki virüslerini bulaştıran bir zararlıdır. Çevre dostu haşere yönetimi elde etmek için, entomopatojenik mantarlar (EPF), bu haşereyi kontrol etmek için potansiyel mikrobiyal kontrol ajanlarıdır. Bu nedenle, saha uygulamasından önce Petri kabı koşulları altında EPF izolatlarının virülans taraması gereklidir. Bununla birlikte, hardal yaprak biti partenogenetik bir böcektir ve Petri kabı deneyleri sırasında veri kaydetmeyi zorlaştırır. Bu sorunu çözmek için, yaprak bitlerine konidia aşılamak ve spor süspansiyonundan sonra havayla kurutmayı kolaylaştırarak boğulmayı önlemek için bir mikro püskürtücü kullanarak, müstakil yapraklı biyo-tahliller için değiştirilmiş bir sistem geliştirilmiştir. Sistem, gözlem süresi boyunca yüksek bağıl nemi korudu ve yaprak diski on günden fazla taze kaldı ve yaprak bitlerinin partenogenetik üremesine izin verdi. Yavru oluşumunu önlemek için, bir boyama fırçası kullanarak günlük bir çıkarma işlemi uygulandı. Bu protokol, EPF izolatlarının hardal yaprak bitlerine veya diğer yaprak bitlerine karşı virülansını değerlendirmek için kararlı bir sistem gösterir ve yaprak biti kontrolü için potansiyel izolatların seçilmesini sağlar.

Giriş

Hardal yaprak biti (L. erysimi), çeşitli turpgillerden bitkileri istila eden ve önemli ekonomik kayıplara neden olan kötü şöhretli bir zararlıdır¹. Yaprak biti istilasıyla mücadele etmek için birkaç sistematik insektisit önerilmiş olsa da, bu insektisitlerin sık kullanımı pestisit direnci^ile ilgili endişeleri artırmaktadır ^2,3. Bu nedenle, çevre dostu haşere yönetimi açısından, entomopatojenik mantarlar (EPF) uygun bir alternatif kontrol stratejisi olarak hizmet edebilir. EPF, konakçıların tırnak etlerine nüfuz ederek enfekte etme yeteneğine sahip bir böcek patojenidir, bu da o....

Protokol

NOT: Akış şemasının tamamı Şekil 1'de gösterilmektedir.

1. Hardal yaprak biti toplama ve bakımı

1. Hardal yaprak bitlerinin toplanması
   1. Yaprakları çevirin ve tarladaki turpgillerden mahsullerde hardal yaprak bitlerinin istilasını görsel olarak kontrol edin.
   2. Numune alma sahası bilgilerini (yani GPS) ve ev sahibi tesis(ler)i kaydedin ve çiftçilerle birlikte insektisit uygulamalarının geçmişini onaylayın.
   3. Tarladaki turpgillerden yaklaşık 50 hardal yaprak bitini 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne toplamak için bir böcek aspiratörü veya ince boyama fırçası ( <....

Tartışmalar

Bir grup sebze olan turpgiller, hardal yaprak biti (L. erysimi) ve lahana yaprak biti (Brevicoryne brassicae) dahil olmak üzere birden fazla yaprak biti türü tarafından sıklıkla istila ^edilir26. Her iki tür de Tayvan^27'de rapor edilmiştir ve toplama alanında bir arada bulunmaları mümkündür. Yakından ilişkili yaprak biti türlerini ayırt etmek için, bu çalışmada bir multipleks primer seti²¹ kullanılarak moleküle.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
10 μL Inoculating Loop	NEST Scientific	718201
100 bp DNA Ladder III	Geneaid	DL007
2x SuperRed PCR Master Mix	Biotools	TE-SR01
50 mL centrifuge tube	Bioman Scientific	ET5050-12
6 cm Petri dish	Alpha Plus Scientific	16021
6 mm insect aspirator	MegaView Science	BA6001
70 mm filter paper NO.1	Toyo Roshi Kaisha
70% ethanol
9 cm Petri dish	Alpha Plus Scientific	16001
Agar	Bioman Scientific	AGR001.1	Microbiology grade
Agarose	Bioman Scientific	PB1200
BioGreen Safe DNA Gel Buffer	Bioman Scientific	SDB001T
Chromas	Technelysium
GeneDoc
GenepHlow Gel/PCR Kit	Geneaid	DFH300	https://www.geneaid.com/data/files/1605861013102532959.pdf
Gene-Spin Genomic DNA Isolation Kit	Protech Technology	PT-GD112-V3	http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf
Hemocytometer	Paul Marienfeld	640030
Komatsuna leaves (Brassica rapa var. perviridis)	Tai Cheng Farm	1-010-300410
Microsprayer
MiniAmp Thermal Cycler	Thermo Fisher Scientific	A37834
Mustard aphid (Lipaphis erysimi)
Painting brush	Tian Cheng brush company	4716608400352
Parafilm M	Bemis	PM-996
Pellet pestle	Bioman Scientific	GT100R
Sabouraud Dextrose Broth	HiMedia	MH033-500G
SPSS Statistics	IBM
TAE buffer 50x	Bioman Scientific	TAE501000
Tween 80	PanReac AppliChem	142050.1661