Geliştirilmiş Örnekleme Tekniği ve Histolojik Karakterizasyon ile Prostat Tümörü Biyobankacılık Güvenilirliğinin Artırılması

Özet

Bu protokol, radikal prostatektomi örneklerinden örneklerin toplanmasını kolaylaştırmak için bir yöntemi tanımlar. Amaç, örneklerden alınan doku örneklerini bir Biyobankada saklamadan önce anatomopatolojik kriterlere dayalı olarak haritalamak, karakterize etmek ve mikro-makro diseksiyon yapmaktır.

Özet

Taze ve iyi karakterize edilmiş tümör dokusu örneklerinin alınması, yüksek kaliteli "omik" çalışmaların yürütülmesi için kritik öneme sahiptir. Bununla birlikte, bu organın benzersiz doğası ve bu tümörle ilişkili yüksek heterojenlik nedeniyle prostat kanseri (PC) bağlamında özellikle zor olabilir. Öte yandan, önemli doku değişikliklerine neden olmadan numuneleri depolanmadan önce histopatolojik olarak karakterize etmek de ilgi çekici bir zorluktur. Bu bağlamda, rezeke edilen prostat dokusunun anatomopatolojik kriterlere dayalı olarak elde edilmesi, haritalanması, karakterizasyonu ve mikro-diseke edilmesi için yeni bir yöntem sunuyoruz.

Daha önce yayınlanmış protokollerden farklı olarak, bu yöntem prostat örneğinin yapısından ödün vermeden histopatolojik analizi için gereken süreyi azaltır ve bu da cerrahi sınırların değerlendirilmesi için çok önemlidir. Ayrıca, Gleason skoru, öncü lezyonlar (yüksek dereceli prostat intraepitelyal neoplazi - PIN) ve inflamatuar lezyonlar (prostatit) gibi patolojik kriterlerle tanımlanan histolojik tümör alanlarına odaklanarak taze prostat dokusu örneklerinin tanımlanmasını ve mikro-makro diseksiyonunu sağlar. Bu örnekler daha sonra sonraki araştırma analizleri için bir Biyobankada saklanır.

Giriş

Prostat kanseri (PK) erkeklerde^{en sık} görülen 2. kanserdir ve dünya çapında 5^{. önde gelen} ölüm nedenidir¹. Hasta tedavisi ve prognozu, yüksek Gleason dereceleri ve metastatik tümörlere (%31) kıyasla lokalize ve düşük dereceli tümörlerin (Gleason derece 6) (%99) daha yüksek 5 yıllık sağkalım oranları ile kanıtlandığı gibi, tümörün evrelemesine ve derecelendirilmesine (Gleason skoru) ^bağlıdır2.

PK lokal nüks ve tedavi başarısızlığı, bu tümör tip^3'ün karakteristik yüksek genetik intratümör heterojenliği ile ilişkilendirilmiştir. Ek olarak, PK, bağımsı....

Protokol

Bu yöntem, farklı klinik hizmetleri (Üroloji, Patoloji ve La Fe Hastanesi Biyobankası) içeren ortak çabalarla geliştirilmiştir. Çalışma, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak yürütüldü ve Instituto de Investigación Sanitaria Hastanesi Universitario y Politécnico La Fe'deki (Valensiya, İspanya) Biyomedikal Araştırma Etik Kurulu'ndan onay aldı. Tüm numuneler La Fe Hastanesi Biyobankasında (PT13/0010/0026) saklandı. Genel prosedür Şekil 1'de detaylandırılmıştır.

Tartışmalar

Herhangi bir araştırma çalışmasında, sistematik önyargıları azaltmak ve güvenilir sonuçlar elde etmek için kaliteli örnekler elde etmek temel bir gerekliliktir²². Bu nedenle, numunelerin işlendiği ve saklandığı sıcaklık, numune alımından depolamaya kadar geçen süre, sterilize edilmiş malzemelerin kullanımı veya koruyucu veya diğer katkı maddelerinin eklenmesinin numuneler üzerinde yaratabileceği etkiler gibi preanalitik değişkenlerin kontrolü, biyolojik numuneleri.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cadiere forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471049. 18 uses.
Conventional slides	Knittel Glass	2021	Ground/ Frosted end
Cryostat microtome	Thermo Fisher Scientific	---	Criostato CryoStar NX50
Cryotubes	Greiner Bio-One GmbH	Ref.: 122280.	CRYO S. PP, with screw cap, sterile.
Da Vinci surgical system	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	XI model
Dissection instruments	Bayer	---	Two tweezers and a surgical blade
DPX Eukitt	Medizin- und Labortechnik GmbH	6.00.01.0001.06.01.01
Eosin	Agilent	157252
Fenestrated bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471205. 14 lives.
Force bipolar	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471405. 12 uses.
Freezers	Thermo Scientific		MODEL 907. -80 ºC
Hematoxylin	Agilent	157251
Inmunohistochemistry Slides	Agilent-Dako	K802021-2
Large needle driver	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471006. 15 uses.
Maryland bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471172. 14 uses.
Microscope	Olympus	---	Olympus cx40
Microtome blades	PFM Medical	a35
Monopolar curved scissors	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 470179. 10 uses.
OCT compound	NEG-50	LOT.117340
PlusSpeed S Single-use Biopsy Device with beveled tip	Peter Pflugbeil GmbH	PSS-1825-S
ProGasp forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471093. 18 uses.
Sample holder Disc	Davidson Cryo Chuck. BradleyProducts		30 mm
Tissue ink	Pelikan	2021	Ink 4001 brilliant black (301168)
Xylol	Quimipur	Ref. 169