EEG Kayıtları Sırasında Sıçanlarda Lateral Kuyruk Veninden Beyin Omurilik Sıvısı ve Kan Örneği Alınması

Özet

Protokol, sürekli video-elektroensefalogram (EEG) monitörizasyonuna paralel olarak gerçekleştirilen epileptik sıçanlardan tekrarlanan beyin omurilik sıvısı ve kan alımlarını gösterir. Bunlar, çeşitli vücut sıvısı moleküllerindeki değişiklikler ile nöbet aktivitesi arasındaki olası bağlantıları araştırmak için etkilidir.

Özet

Vücut sıvılarının bileşimi birçok fizyolojik ve patolojik dinamiği yansıttığından, hormonlar, büyüme faktörleri, proteinler veya küçük kodlamayan RNA'lar gibi ilgilenilen molekülleri ölçmek için birçok deneysel bağlamda biyolojik sıvı örnekleri yaygın olarak elde edilir. Spesifik bir örnek, epilepsi için biyobelirteçlerin araştırılmasında biyolojik sıvıların örneklenmesidir. Bu çalışmalarda, beyin omurilik sıvısındaki (BOS) ve plazmadaki molekül düzeylerinin, BOS ve plazmayı paralel olarak geri çekerek ve örneklemenin nöbetlerden ve nöbetlere olan zaman mesafesini göz önünde bulundurarak karşılaştırılması arzu edilir. Epileptik hayvanlarda video-EEG monitörizasyonu ile birlikte kombine BOS ve plazma örneklemesi, varsayılan tanısal ve prognostik biyobelirteçlerin doğrulanması için umut verici bir yaklaşımdır. Burada, sürekli video-EEG izlenen epileptik sıçanlarda cisterna magna'dan kombine BOS çekilmesi ve lateral kuyruk veninden kan örneklemesi prosedürü anlatılmaktadır. Bu prosedür, yaygın olarak kullanılan diğer tekniklere göre önemli avantajlar sunar. Minimum ağrı veya invazivlik ve daha kısa anestezi süresi ile hızlı örneklemeye izin verir. Ek olarak, hem bağlı hem de telemetri EEG kayıtlı sıçanlarda BOS ve plazma örnekleri elde etmek için kullanılabilir ve birkaç günlük deney boyunca tekrar tekrar kullanılabilir. İzofluran anestezisini kısaltarak örneklemeden kaynaklanan stresi en aza indirerek, önlemlerin biyosıvılarda araştırılan moleküllerin gerçek seviyelerini daha doğru bir şekilde yansıtması beklenir. Uygun bir analitik testin mevcudiyetine bağlı olarak, bu teknik, aynı anda EEG kaydı yaparken birden fazla, farklı molekülün seviyelerini ölçmek için kullanılabilir.

Giriş

Beyin omurilik sıvısı (BOS) ve kan örneklemesi, hem klinik öncesi hem de klinik araştırmalarda epilepsinin biyobelirteçlerini tanımlamak ve doğrulamak için önemlidir ^1,2. Günümüzde epilepsi tanısı ve epilepsi biyobelirteçleri ile ilgili araştırmaların çoğu EEG ve nörogörüntüleme üzerine odaklanmaktadır ^3,4,5. Bununla birlikte, bu yaklaşımlar çeşitli sınırlamalar sunar. Rutin kafa derisi ölçümlerinin yanı sıra, çoğu durumda EEG, derinlik elektrotları gibi invaziv teknikler gerektirir⁶. Beyin gör....

Protokol

Tüm deneysel prosedürler, deneysel ve diğer bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunmasına ilişkin 24 Kasım 1986 tarihli Avrupa Toplulukları Konseyi Direktifi'nde (86/609/EEC) belirtilen yönergelere uygun olarak Ferrara Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi ve İtalya Sağlık Bakanlığı (yetkilendirme: DM 603/2022-PR) tarafından onaylanmıştır. Bu protokol, sıçan BOS'undaki küçük kodlamayan ribonükleik asidin (sncRNA'lar) ve epileptik hayvanlarda EEG kontrolü altında elde edilen plazmanın daha fazla kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) analizleri için özel olarak ayarlanmıştır. İsteğe bağlı olarak, ameliyatın daha iyi anlaşılması ve iyile....

Tartışmalar

Bu çalışma, sadece epilepsi modellerinde değil, aynı zamanda Alzheimer, Parkinson veya multipl skleroz gibi diğer nörolojik durumlar veya hastalıklar için de yararlı olabilecek, sıçanlarda BOS ve kan toplama konusunda ustalaşması kolay bir tekniği göstermektedir. Epilepsi araştırmalarında, video-EEG ile birleştirilmiş her iki örnekleme prosedürü, farklı çözünür moleküllerin seviyeleri ile nöbet aktivitesi arasında bir korelasyon izlendiğinde idealdir. Bu özel nedenden dolayı, i) epileps.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Blood collection set BD Vacutainer Safety-Lok	BD Italy SpA, Milan, Italy	367246	Material
Blood Collection tubes (Microtainer K2E)	BD Italy SpA, Milan, Italy	365975	Material
Butterfly Winged Infusion Set 23G x 3/4'' 0.6 x 19 mm	Nipro, Osaka, Japan	PSY-23-ET-ICU	Material
Centrifuge refrigerated ALC PK 130R	DJB Labcare Ltd, Buckinghamshire, England	112000033	Material
Cotton suture 3-0	Ethicon, Johnson & Johnson surgical technologies, Raritan, New Jersey, USA	7343H	Material
Diazepam 5 mg/2ml, Solupam	Dechra Veterinary Products, Torino, Italy	105183014 (AIC)	Solution
Digital video 8-channel media recorder system of telemetry EEG set up	Data Sciences International (DSI), St Paul, MN, USA	PNM-VIDEO-008	Equipment
Digital video surveillance system of tethered EEG set up	EZVIZ Network, Hangzhou, Cina	EZVIZ (V5.3.2)	Equipment
Disinfectant based on stabilized peroxides and quaternary ammonium activity	Laboratoire Garcin-Bactinyl, France	LB 920111	Solution
Dummy guide cannula 8 mm	Agn Tho's, Lindigö, Sweden	CXD-8	Material
Electrode 3-channel two-twisted	Invivo1, Plastic One, Roanoke, Virginia, USA	MS333/3-B/SPC	Material
Electrode holder for stereotxic surgery	Agn Tho's, Lindigö, Sweden	1776-P1	Equipment
Eppendorf BioSpectrometer basic	Eppendorf AG, Hamburg, Germany	6137	Equipment
Eppendorf PCR Tubes 0.2 mL	Eppendorf Srl, Milan, Italy	30124332	Material
Eppendorf μCuvette G1.0	Eppendorf AG, Hamburg, Germany	6138	Equipment
Feeding needle flexible 17G for rat	Agn Tho's, Lindigö Sweden	7206	Material
Grass Technology apparatus	Grass Technologies, Natus Neurology Incorporated, Pleasanton, California, USA	M665G08	Equipment (AS40 amplifier, head box, interconnecting cables, telefactor model RPSA S40)
Isoflurane 100%, IsoFlo	Zoetis, Rome, Italy	103287025 (AIC)	Solution
Ketamine (Imalgene)	Merial, Toulouse, France	221300288 (AIC)	Solution
Lithium chloride	Sigma-Aldrich, Milan, Italy	L9650	Material
Microinjection cannula 31G 9 mm	Agn Tho's, Lindigö Sweden	CXMI-9	Material
MP150 modular data acquisition and analysis system	Biopac, Goleta, California, USA	MP150WSW	Equipment
Ophthalmic vet ointment, Hylo night	Ursapharm, Milan, Italy	941791927 (AIC)	Material
Pilocarpine hydrochloride	Sigma-Aldrich, Milan, Italy	P6503	Material
PTFE Tube with joint	Agn Tho's, Lindigö, Sweden	JT-10	Material
Saline	0.9% NaCl, pH adjusted to 7.0		Solution
Scopolamine hydrobromide trihydrate	Sigma-Aldrich, Milan, Italy	S2250	Material
Scopolamine methyl nitrate	Sigma-Aldrich, Milan, Italy	S1876	Material
Silver sulfadiazine 1% cream	Sofar, Trezzano Rosa, Milan, Italy	025561010 (AIC)	Material
Simplex rapid dental methacrylic cement	Kemdent, Associated Dental Products Ltd, Swindon, United Kingdom	ACR811	Material
Stereotaxic apparatus	David Kopf Instruments, Los Angeles, CA, USA	Model 963	Equipment
Sucrose solution	10% sucrose in distilled water	Home-made	Solution
Syringe 1 mL	Biosigma, Cona, Venezia, Italy	20,71,26,03,00,350	Material
Telemeters	Data Sciences International (DSI), St Paul, MN, USA	CTA-F40	Material
Telemetry EEG traces analyzer	Data Sciences International (DSI), St Paul, MN, USA	NeuroScore v3-0	Equipment
Telemetry system	Data Sciences International (DSI), St Paul, MN, USA	Hardware plus software Ponemah core 6.51	Equipment
Xylazine hydrochloride	Sigma-Aldrich, Milan, Italy	X1251	Material