Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Tiroid Hormon Etki Göstergesi Fare ile Endokrin Bozucu Kimyasal Etkilerin İn vivo Karakterizasyonu
Bu Makalede
Özet
Tiroid Hormon Etki Göstergesi fare modeli, endojen düzenleyici mekanizmasını kullanarak lokal tiroid hormon etkisinin dokuya özgü nicelleştirilmesini sağlamak için geliştirilmiştir. Son zamanlarda, modelin tiroid hormon ekonomisi ile etkileşime giren endokrin bozucu kimyasalları hem ex vivo hem de in vivo metodolojilerle karakterize etmek için uygun olduğu gösterilmiştir.
Özet
Tiroid hormonları (TH) hücre metabolizmasında ve doku fonksiyonunda kritik bir rol oynar. TH ekonomisi, hormon üretimini veya etkisini bozabilecek endokrin bozucu kimyasallara (EDC'ler) karşı hassastır. Birçok çevresel kirletici, hem insan sağlığı hem de tarımsal üretim için ortaya çıkan bir tehdidi temsil eden EDC'lerdir. Bu, potansiyel EDC'lerin etkilerini incelemek için uygun test sistemlerine olan talebin artmasına neden olmuştur. Bununla birlikte, mevcut metodolojiler zorluklarla karşı karşıyadır. Çoğu test sistemi, doğrudan ve dolaylı etkilerin ayırt edilmesini zorlaştıran çoklu, genellikle karmaşık düzenleyici süreçler tarafından düzenlenen endojen belirteçler kullanır. Ayrıca, in vitro test sistemleri, memelilerde EDC metabolizmasının ve farmakokinetiğin fizyolojik karmaşıklığından yoksundur. Ek olarak, çevresel EDC'lere maruz kalma genellikle in vivo üretilen metabolitler de dahil olmak üzere çoklu bileşiklerin bir karışımını içerir, bu nedenle etkileşim olasılığı göz ardı edilemez. Bu karmaşıklık, EDC karakterizasyonunu zorlaştırır. Tiroid Hormon Etki Göstergesi (THAI) faresi, dokuya özgü TH etkisinin değerlendirilmesini sağlayan, TH'ye duyarlı bir lusiferaz raportör sistemi taşıyan transgenik bir modeldir. Doku örneklerinde lusiferaz raportör ekspresyonunu ölçerek kimyasalların lokal TH etkisi üzerindeki dokuya özgü etkileri değerlendirilebilir. Ayrıca, in vivo görüntüleme ile THAI fare modeli, canlı hayvanlarda potansiyel EDC'lerin etkileri üzerine uzunlamasına çalışmalara izin verir. Bu yaklaşım, aynı hayvanda zaman içinde lokal TH etkisindeki değişikliklerin değerlendirilmesini sağladığından, uzun süreli maruziyeti, karmaşık tedavi yapılarını veya geri çekilmeyi test etmek için güçlü bir araç sağlar. Bu rapor, THAI fareleri üzerinde in vivo görüntüleme ölçümlerinin sürecini açıklamaktadır. Burada tartışılan protokol, kontrol görevi görebilecek hiper ve hipotiroidi farelerin geliştirilmesine ve görüntülenmesine odaklanmaktadır. Araştırmacılar, özel ihtiyaçlarını karşılamak için sunulan tedavileri uyarlayabilir veya genişletebilir ve daha fazla araştırma için temel bir yaklaşım sunabilir.
Giriş
Tiroid hormonu (TH) sinyali, yetişkinlikte normal gelişim ve optimal doku fonksiyonu için gerekli olan hücresel metabolizmanın temel bir düzenleyicisidir1. Dokular içinde, TH eylemi, yerel TH seviyelerinin dokuya özgü bakımına izin veren karmaşık bir moleküler makine tarafından hassas bir şekilde kontrol edilir. Farklı dokuların dolaşımdaki TH seviyelerinden bu özerkliği büyük önem taşımaktadır 2,3,4.
Çok sayıda kimyasal, endokrin fonksiyonlarını bozma potansiyeline sahiptir ve çevrede kirletici olarak bulunur. Bu moleküller....
Protokol
Mevcut protokol, Deneysel Tıp Enstitüsü'ndeki Hayvan Refahı Komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır (PE/EA/1490-7/2017, PE/EA/106-2/2021). Sunulan veriler FVB/Ant arka plan14, 3 aylık erkek THAI farelerinden (n = 3-6/grup) alınmıştır. FVB/Karınca arka planı Tayland hayvanlarının derilerinde ölçümleri bozabilecek yüksek pigmentli lekeler olma eğilimindedir. Bu nedenle, kürk çıkarıldıktan sonra görüntülenen bölgenin derisinde pigmentli lekeler arayın. Deney özel olarak gerektirmedikçe hayvanlar özel barınma koşullarına ihtiyaç duymazlar (örneğin, özel bir diyet).
1. Hipertiroidi tedavisi
Temsili Sonuçlar
Genel olarak, ölçülen parlaklık 10 5 ila 1010 p/s/cm2/sr büyüklükleri arasında değişir. Bununla birlikte, kesin değerler aynı görüntüdeki hayvanlar arasında ve farklı görüntüler arasında değişebilir. Bu nedenle, ham verileri karşılaştırmak yanıltıcı olabilir. Tüm deneylerde kontrol ve arka plan sinyalleri oluşturmak çok önemlidir, bu da kendi kendini kontrol eden tasarımları şiddetle tavsiye eder.
Tartışmalar
Endokrin Bozucu Kimyasalların (EDC'ler) insan sağlığına yönelik tehditleri iyi bilinmektedir; bununla birlikte, EDC'ler üzerine yapılan araştırmalar zorlu zorluklarla karşı karşıyadır. Bu zorluklar kısmen endokrin sistemin karmaşıklığının bir sonucudur. Birçok EDC'nin aynı anda birden fazla endokrin sistemi bozduğu tespit edilmiştir22. Ek olarak, Tiroid Hormonu (TH) ekonomisi bağlamında, TH etkisinin düzenlenmesinde dokuya özgü farklılıklar nedeniyle ek bir karmaş.......
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma Proje no. Ulusal Translasyonel Sinirbilim Laboratuvarı başlıklı RRF-2.3.1-21-2022-00011, Széchenyi Plan Plus Programı çerçevesinde Avrupa Birliği Kurtarma ve Dayanıklılık Tesisi tarafından sağlanan destekle hayata geçirilmiştir.
....Malzemeler
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 3,5,3'-triiodothyronine (T3) | Merck | T2877 | |
| Animals, mice | THAI mouse | ||
| Eye protection gel | Oculotect | 1000 IU/g | |
| Falcon tube | Thermo Fisher Scientific | 50 mL volume | |
| Iodine-free chow diet | Research Diets | custom | |
| IVIS Lumina II in vivo imaging system | Perkin Elmer | - | |
| Ketamine | Vetcentre | E1857 | |
| Living Image software 4.5 | Perkin Elmer | - | provided with the instrument |
| Measuring cylinder | 250 mL | ||
| methimazole | Merck | M8506 | |
| Microfuge tubes | Eppendorf | For diluting treatment materials | |
| NaClO4 | Merck | 71852 | |
| Na-luciferin, substrate | Goldbio | 103404-75-7 | |
| NaOH | Merck | 101052833 | |
| Phoshphate buffer saline | Chem Cruz | sc-362302 | |
| Pipette | Gilson | For diluting treatment materials | |
| Pipette tips | Axygen | For diluting treatment materials | |
| Shaving cream/epilator/shaver | Personal preference | ||
| Syringe | B Braun | 1 mL volume | |
| Syringe needle | B Braun | 0.3 x 12 mm | |
| Xylazine | Vetcentre | E1852 |
Referanslar
- Larsen, P. R., Davies, T. F., Hay, I. D., Wilson, J. D., Foster, D. W., Kronenberg, H. M., Larsen, P. R. . Williams Textbook of Endocrinology. , 389-515 (1998).
- Gereben, B., et al. Cellular and molecular basis of deiodinase-regulated thyroid hormone signaling.
Yeniden Basımlar ve İzinler
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiDaha Fazla Makale Keşfet
This article has been published
Video Coming Soon
ISSN 1940-087X
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır
Sitemizdeki deneyiminizi iyileştirmek için çerezleri kullanıyoruz
Sitemizi kullanmaya devam ederek ya da "Devam et" butonuna tıklayarak, çerezleri kabul edebilirsiniz.