Neovasküler Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonunun Vasküler Morfolojisinin İndosiyanin Yeşili Anjiyografi ile Karakterizasyonu

Özet

Şu anda, floresein anjiyografi (FA), koroidal neovaskülarizasyonun (KNV) hayvan modellerinde sızıntı paternlerini tanımlamak için tercih edilen yöntemdir. Bununla birlikte, FA vasküler morfoloji hakkında bilgi sağlamaz. Bu protokol, fare modellerinde lazerle indüklenen CNV'nin farklı lezyon tiplerini karakterize etmek için indosiyanin yeşili anjiyografinin (ICGA) kullanımını özetlemektedir.

Özet

Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (YBMD), yaşlı bireyler arasında körlüğün önde gelen nedenlerinden biridir ve yaşlanan nüfusa bağlı olarak prevalansı hızla artmaktadır. Tüm AMD vakalarının %10-20'sini oluşturan koroidal neovaskülarizasyon (KNV) veya ıslak AMD, AMD'ye bağlı körlüğün endişe verici bir şekilde %80-90'ından sorumludur. Mevcut anti-VEGF tedavileri hastaların yaklaşık %50'sinde suboptimal yanıtlar göstermektedir. KNV hastalarında anti-VEGF tedavisine direnç genellikle arteriolar KNV ile ilişkilidir, yanıt verenler ise kapiller KNV'ye sahip olma eğilimindedir. Floresein anjiyografi (FA), ıslak YBMD hastalarında ve hayvan modellerinde sızıntı paternlerini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılırken, CNV vasküler morfolojisi (arteriolar KNV ve kapiller KNV) hakkında bilgi sağlamaz. Bu protokol, lazer kaynaklı CNV fare modellerinde lezyon tiplerini karakterize etmek için indosiyanin yeşili anjiyografinin (ICGA) kullanımını tanıtır. Bu yöntem, yaş YBMD'de anti-VEGF direncinin mekanizmalarını ve tedavi stratejilerini araştırmak için çok önemlidir. Mekanik ve terapötik çalışmalarda KNV'nin hem sızıntı hem de vasküler özelliklerinin kapsamlı bir şekilde değerlendirilmesi için FA ile birlikte ICGA'nın dahil edilmesi önerilmektedir.

Giriş

Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD), yaşlı bireylerde ciddi görme kaybına yol açan yaygın bir durumdur¹. Yalnızca Amerika Birleşik Devletleri'nde, AMD hastalarının sayısının iki katına çıkacağı ve mevcut 11 milyona kıyasla 2050 yılına kadar yaklaşık 22 milyona ulaşacağı tahmin ediliyor. Küresel olarak, tahmini AMD vaka sayısının 2040 yılına kadar şaşırtıcı bir şekilde 288 milyona ulaşması bekleniyor².

"Islak" veya neovasküler AMD olarak da bilinen koroidal neovaskülarizasyon (CNV), merkezi retinanın altında anormal kan damarlarının oluşumu nedeniyle görme üzerinde yıkıcı etkilere sahip olabi....

Protokol

Bu çalışmada yapılan hayvan deneyleri, Baylor Tıp Fakültesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komiteleri'nden (IACUC) onay almıştır. Tüm prosedürler, Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği'nin (ARVO) Oftalmik ve Görme Araştırmalarında Hayvanların Kullanımı Bildirisi'nde belirtilen yönergelere uygun olarak gerçekleştirildi. Bu çalışma için genç (7-9 hafta) ve yaşlı (12-16 ay) C57BL / 6J erkek ve dişi fareler kullanıldı. Hayvanlar ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bkz.

1. Görüntüleme sisteminin hazırlanması

1. Görüntüleme sırasında farenin vücut sıcaklığının korunmasını sağlamak için görü....

Tartışmalar

Bu çalışma, lazer kaynaklı CNV'li fare modellerinde arteriolar ve kapiller koroidal neovaskülarizasyonun (CNV) vasküler morfolojisini tanımlamak için indosiyanin yeşili anjiyografinin (ICGA) kullanımını göstermiştir. İndosiyanin yeşili (ICG) boyanın hemoglobine bağlı ve kızılötesi ışık özellikleri, araştırma topluluğu tarafından kullanılan mevcut yöntem olan floresein anjiyografi (FA) kullanılarak elde edilmesi zor olan CNV morfolojisinin saptanmasını sağlamıştır.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
32-G Insulin Syringe	MHC Medical Products	NDC 08496-3015-01
Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit secondary antibody	Invitrogen	A11008
Anti-α smooth muscle Actin antibody	Abcam	ab5694
Bovine Serum Albumin	Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-2323
C57BL/6J mice (7-9 weeks)	The Jackson Laboratory	Strain #:000664
Fluorescein Sodium Salt	Sigma-Aldrich	MFCD00167039
Gaymar T Pump Heat Therapy System	Gaymar	TP-500	Water circulation heat pump for mouse recovery after imaging
GenTeal Gel	Genteal	NDC 58768-791-15	Clear lubricant eye gel
GS-IB4 Alexa-Flour 568 conjugate	Invitrogen	I21412
Heidelberg Eye Explorerer	Heidelberg Engineering, Germany	HEYEX2
Indocyanine Green	Pfaultz & Bauer	I01250
Ketamine	Vedco Inc.	NDC 50989-996-06
Paraformaldehyde	Acros Organics	416785000
Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution (0.5%)	Sandoz	NDC 61314-016-01
Spectralis Multi-Modality Imaging System Heidelberg Engineering, Germany SPECTRALIS HRA+OCT Tropicamide ophthalmic solution (1%) Bausch & Lomb NDC 24208-585-64 for dilation of pupils GenTeal Gel Genteal NDC 58768-791-15 clear lubricant eye gel Ketamine Vedco Inc NDC 50989-996-06 Xylazine Lloyd Laboratories NADA 139-236 Acepromazine Vedco Inc NDC 50989-160-11 32-G Needle Steriject PRE-32013 1-ml syringe BD 309659 Indocyanine Green Pfaltz & Bauer I01250	Heidelberg Engineering, Germany	SPECTRALIS HRA+OCT
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X100-1L
Tropicamide ophthalmic solution (1%)	Bausch & Lomb	NDC 24208-585-64	For dilation of pupils
Xylazine	Lloyd Laboratories	NADA 139-236