Agrobacterium rhizogenes Bazlı Tüylü Kök Dönüşümü ile Kompozit Bitkilerin Üretilmesi İçin Verimli ve Tekrarlanabilir Bir Yöntem

Özet

Burada, kompozit bitkiler üretmek için Agrobacterium tumefaciens'in aracılık ettiği tek adımlı bir dönüşüm yönteminin ayrıntılı protokolünü sunuyoruz.

Özet

Agrobacterium rhizogenes aracılı tüylü kök dönüşümü kullanılarak transgenik kökleri ve transgenik olmayan gövdeleri ve tomurcukları olan kompozit bitkiler üretmek, kökle ilgili biyolojiyi incelemek için güçlü bir araçtır. Tüylü kök transformasyonu, çok çeşitli dikotiledonlarda ve birkaç monokotiledon türünde kurulur ve neredeyse genotipten bağımsızdır. Kompozit bitkiler elde etmek için A. rhizogenes ile geleneksel hipokotil enjeksiyonu yöntemi verimsiz, zaman alıcı, zahmetlidir ve sıklıkla hassas ve küçük hipokotil bitkilerin ölümüne neden olur. Daha önce A. rhizogenes'in aracılık ettiği yüksek verimli, tek aşamalı bir tüylü kök dönüşümü kurulmuştu, bu da tüylü kökler üretildikten sonra ekim ihtiyacını ortadan kaldırıyor. Bu çalışmada, kısmi bir hipokotil ve primer kök çıkarıldı, hipokotil insizyon bölgesi A. rhizogenes ile kaplandı ve daha sonra hipokotiller steril vermikülit içine ekildi. 12 günlük ekimden sonra hipokotil insizyonu genişledi ve yeni tüylü kökler indüklendi. Bu makale, A. rhizogenes'in aracılık ettiği tek aşamalı bir dönüşüm yönteminin ayrıntılı protokolünü ve etkinliği yabani soya fasulyesi, Solanum americanum ve balkabağının kompozit bitkilerinin üretilmesiyle gösterilmiştir.

Giriş

Agrobacterium rhizogenes, Rhizobiaceae familyasından gram negatif bir toprak bakterisidir. A. rhizogenes, hemen hemen tüm dikotiledonları, birkaç monokotiledonu ve bireysel açık tohumluları yaralar yoluyla enfekte edebilir ve enfekte bitkilerde tüylü kökler üretebilir. Bakteri, Ri (kök indükleyici) plazmidini taşır ve Ri plazmidinin T-DNA'sı, opin sentez genini ve rol genlerini (kök lokus genleri) taşır. Ri plazmidinin T-DNA'sı bir bitki hücresine girdikten ve bir konakçı kromozomuna entegre edildikten sonra, rol genlerinin ekspresyonu tüylü köklerin üretimini indükler¹. Bir hedef geni taşıyan bir b....

Protokol

1. Bitki büyüme koşulları ve A. rhizogenes kültürü

1. Tohum ekimi
   NOT: Yabani soya fasulyesi tohumları Yanggu İlçesi, Liaocheng, Çin'de toplandı; S. americanum tohumları ve yerel kabak çeşidi Yinsu bir pazardan satın alındı.
   1. Yabani soya fasulyesi, S. americanum ve yerel balkabağı çeşidi tohumlarını toplayın, 1 cm derinlikte vermikülit içine ekin ve iyice sulayın. 8 cm x 11 cm x 9 cm plastik kutulara 20 tohum ekin. Bitkileri 24 ± 2 °C'de, yaklaşık% 70 bağıl nemde 16 saat aydınlık / 8 saat karanlık döngüsü ile bir büyüme odasında yetiştirin.
      NOT: Yabani soya fasulyesi tohumlarının katları ekimden önce kırı....

Tartışmalar

Tek adımlı A. rhizogenes aracılı tüylü kök yöntemi, kompozit bitkiler üretmek için hipokotil enjeksiyon yönteminden daha basit ve daha verimli bir yöntemdir. Tek adımlı ARM yöntemi, tüylü kök dönüşümünün verimliliğini önemli ölçüde artırır, tüylü kök üretme süresini kısaltır, tüylü kök sayısını artırır ve ilgili iş miktarını azaltır. Geliştirilmiş transformasyon protokolü, baklagil bitkileri ile rizobi arasındaki ve bitkiler ile arbusküler mikorizal mantarla.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
kanamycin	Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.	A506636
LB medium	Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.	B540113
plastic box	LiaoSu		8 cm x 11 cm x 9 cm
pumpkin			local variety Yinsu
streptomycin	Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.	A610494
Tanon-5200Multi machine	Tanon Co., Ltd., China	5200Multi	chemiluminescence imaging system
tomato			local variety Zhongshu4
wild soybean			collected in Yanggu County, Liaocheng, China