Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Orofasiyal kas fibroz modeli oluşturmak için fare masseter kasında donma yaralanması
Bu Makalede
Özet
Bu protokolün amacı orofasiyal kas fibrozis modeli oluşturmaktır. Dondurma yaralanması sonrası fareler masseter ve tibialis anterior kası arasındaki histolojinin karşılaştırılması masseter kas fibrozisini doğruladı. Bu model, orofasiyal kas fibrozisinin altında yatan mekanizmanın daha fazla araştırılmasını kolaylaştıracaktır.
Özet
Orofasiyal kas, farklı bir evrimsel yörünge ve gelişim kökeni olan iskelet kası dokusunun bir alt kümesini oluşturur. Somitten türetilmiş uzuv kaslarının aksine, orofasiyal kaslar, kraniyal nöral krestin özel katkılarıyla brankial kemerlerden kaynaklanır. Yakın zamanda yapılan bir çalışma, rejenerasyonun orofasiyal kas grubunda da farklı olduğunu ortaya koymuştur. Bununla birlikte, altta yatan düzenleyici mekanizma ortaya çıkarılmayı beklemektedir. Mevcut iskelet kası rejenerasyon modelleri esas olarak uzuv ve gövde kasına odaklanmaktadır. Bu protokolde, orofasiyal kas fibroz modeli oluşturmak için fare masseter kasında ve tibialis anterior kasında donma hasarını indüklemek için kuru buz kullanıldı. Kas uydu hücrelerinin ve fibro-adipojenik progenitörlerin zamansal dinamikleri iki kas arasında farklıydı, bu da bozulmuş miyofiber rejenerasyonuna ve aşırı hücre dışı matris birikimine yol açtı. Bu modelin yardımıyla, orofasiyal hastalıkları olan hastalar için terapötik yaklaşımlar geliştirmek için orofasiyal bölgedeki kas rejenerasyonu hakkında daha derin bir araştırma yapılabilir.
Giriş
Orofasiyal kaslar, çiğneme, konuşma, solunum ve yüz ifadesi gibi günlük fizyolojik aktivitelerde kritik öneme sahiptir1. Konjenital orofasiyal deformitelerde ise bu kaslar atrofik ve fibrotik değişiklikler göstererek vücut sağlığının ve sosyal bilişin bozulmasına yol açar2. Yüz rekonstrüktif cerrahisi ilk basamak tedavi olmaya devam etmektedir, ancak postoperatif hastaların %30-70 kadarı hala kas kaybı ve kas disfonksiyonundan muzdariptir 3,4 Orofasiyal kas rejenerasyonunun başarısızlığı, tek başına ameliyatla düzeltilemeyen içsel faktörlere bağlanmıştır.
Protokol
Bu çalışmadaki tüm hayvan prosedürleri, Sichuan Üniversitesi Batı Çin Stomatoloji Okulu Etik Komitesi tarafından gözden geçirildi ve onaylandı (WCHSIRB-D-2020-114). Erkek C57BL / 6 fareleri (5 haftalık) nem kontrollü (% 53 ± 2) ve sıcaklık kontrollü (23 ± 2 ° C) bir tesiste büyütüldü ve 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsündeydi. Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler, reaktifler ve aletlerle ilgili ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın.
1. Donma yaralanması
- Anestezi: Fareleri izofluranla ıslatılmış pamuk topları ile sakinleştirin ve 50 mg / kg'lık bir dozda intraperitoneal olarak tiletam....
Temsili Sonuçlar
HE ve Sirius Kırmızı boyaması (Şekil 4 ve Ek Şekil S1), bu donma-yaralanma modelinde TA'nın tam kas rejenerasyonunu ortaya çıkardı. Buna karşılık, MAS bozulmuş miyofiber rejenerasyonu ve aşırı ekstraselüler matriks birikimi sergiledi. İntakt MAS ve TA kasının histolojisi, miyoliflerin hizalandığı ve fibrotik alanın sadece interstisyel boşlukta ve farklı demetler arasında ortaya çıktığı Şekil 4A,B'de
Tartışmalar
İskelet kası rejenerasyonunu incelemek için fiziksel, kimyasal ve cerrahi uyaranların kullanımı dahil olmak üzere çeşitli yaralanma modelleri vardır 10,11,12,13,14,15,16. Kardiyotoksin ve baryum klorür, kas rejenerasyonunu başlatmak için en yaygın kullanılan iki kimyasaldır
Açıklamalar
Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, Sichuan İl Sağlık ve Zindelik Komitesi (Hibe Numarası: 21PJ063) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (Hibe Numarası: 82001031) alınan hibelerle desteklenmiştir.
....Malzemeler
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 mL syringe | Shifeng Medical Apparatus and Instrument (Chengdu, Sichuan, China) | 1-ml syringe | / |
| Acetone | Chron Chemicals | Aceton | / |
| Adhesion microscope slides | Citotest Scientific | 188105 | / |
| Animal depilatory | Phygene Scientific | PH1877 | / |
| BSA (bovine serum albumin) | Solarbio Life Sciences | A8010 | / |
| DAPI | Solarbio Life Sciences | C0065 | / |
| Donkey anti-goat Alexa Fluor 488 | Abcam | ab150129 | 1:200 |
| donkey serum | Solarbio Life Sciences | SL050 | / |
| Dry Ice | Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China) | rice-shaped dry ice | / |
| IFKine Red Donkey anti-rabbit | Abbkine Scientific Company | A24421 | 1:200 |
| Insulation barrels (big) | Thermos | D600 | / |
| Insulation barrels (small) | Polar Ware | 250B | / |
| Isoflurane | RWD Life Technology Company (Shenzhen, Guangdong, China) | R510-22 | / |
| Isopentane | MACKLIN | M813375 | / |
| Laminin | Sigma-Aldrich | L9393 | 1:1000 |
| Liquid nitrogen | Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China) | / | / |
| M.O.M kit | Vector Laboratories | BMK-2202 | |
| Mice | Dashuo Biological Technology Company(Chengdu, Sichuan, China) | 5 weeks old | / |
| mounting medium | Solarbio Life Sciences | S2100 | / |
| Nertral balsam | Solarbio Life Sciences | G8590 | / |
| Pax7 | Developmental Studies Hybridoma Bank | Pax7 | 1:5 |
| Pdgfra | R&D systems | AF1062 | 1:40 |
| Sirus Red Staining Kit | Solarbio Life Sciences | G1472 | / |
| Surgical instruments (forceps, scissors, needle holder, scalpel, and suture) | Zhuoyue Medical Instrument (Suqian, Jiangsu, China) | / | / |
| Tissue-tek OCT | Sakura | 4583 | / |
| Triton | Shanghai Scigrace Biotech | ABIO-Biofroxx-0006A | / |
| Zoletil | Virbac | Zoletil 50 | / |
Referanslar
- Yoshioka, K., Kitajima, Y., Seko, D., Tsuchiya, Y., Ono, Y. The body region specificity in murine models of muscle regeneration and atrophy. Acta Physiologica. 231 (1), e13553 (2021).
- Worley, M. L., Patel, K. G., Kilpatrick, L. A. Cleft lip and palate.....
Yeniden Basımlar ve İzinler
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır