Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Temsili Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu makale, Erasmus Merdiveni adı verilen bir cihaz kullanılarak, ince motor performansın non-invaziv ve otomatik bir değerlendirmesinin yanı sıra zorluklar üzerine uyarlanabilir ve çağrışımsal motor öğrenmeye izin veren bir protokol sunmaktadır. Görev zorluğu, majörden ince derecelere kadar değişen motor bozukluğunu tespit etmek için titre edilebilir.

Özet

Davranış, eylemlerle şekillenir ve eylemler güç, koordinasyon ve öğrenme gibi motor becerileri gerektirir. Yaşamı sürdürmek için gerekli olan davranışların hiçbiri, bir pozisyondan diğerine geçiş yeteneği olmadan mümkün olmazdı. Ne yazık ki, motor beceriler çok çeşitli hastalıklarda tehlikeye girebilir. Bu nedenle, hücresel, moleküler ve devre seviyelerinde motor fonksiyonların mekanizmalarını araştırmak ve motor bozuklukların semptomlarını, nedenlerini ve ilerlemesini anlamak, etkili tedaviler geliştirmek için çok önemlidir. Fare modelleri bu amaçla sıklıkla kullanılır.

Bu makale, Erasmus Merdiveni adı verilen otomatik bir araç kullanılarak farelerde motor performansın ve öğrenmenin çeşitli yönlerinin izlenmesine izin veren bir protokolü açıklamaktadır. Tahlil iki aşamadan oluşur: farelerin düzensiz basamaklardan oluşan yatay bir merdivende ("ince motor öğrenme") gezinmek için eğitildiği bir başlangıç aşaması ve hareket eden hayvanın yolunda bir engelin sunulduğu ikinci bir aşama. Tedirginlik beklenmedik olabilir ("zorlu motor öğrenme") veya öncesinde işitsel bir ton ("çağrışımsal motor öğrenme") olabilir. Görevin yürütülmesi kolaydır ve otomatik yazılım tarafından tam olarak desteklenir.

Bu rapor, hassas istatistiksel yöntemlerle analiz edildiğinde, testten elde edilen farklı okumaların, küçük bir fare kohortu kullanılarak fare motor becerilerinin iyi izlenmesine nasıl izin verdiğini göstermektedir. Yöntemin, çevresel modifikasyonların neden olduğu motor adaptasyonlarının yanı sıra, motor fonksiyonlarından ödün veren mutant farelerde erken evre ince motor eksikliklerini değerlendirmek için oldukça hassas olacağını öneriyoruz.

Giriş

Farelerde motor fenotipleri değerlendirmek için çeşitli testler geliştirilmiştir. Her test, motor davranışın belirli bir yönü hakkında bilgi verir1. Örneğin, açık alan testi genel hareket ve kaygı durumu hakkında bilgi verir; rotarod ve yürüyen kiriş koordinasyon ve denge testleri; Ayak izi analizi yürüyüşle ilgilidir; zorla veya gönüllü fiziksel egzersizde koşu bandı veya koşu tekerleği; Ve karmaşık tekerlek, motor beceri öğrenimi ile ilgilidir. Fare motor fenotiplerini analiz etmek için, araştırmacılar bu testleri sırayla yapmalıdır, bu da çok fazla zaman ve çaba ve genellikle birkaç hayvan kohortu gerektirir. Hücresel veya devre düzeyinde bi....

Protokol

Bu çalışmada, her iki cinsiyetten yetişkin (2-3 aylık) C57BL / 6J fareleri kullanıldı. Hayvanlar, gözlem altındaki bir hayvan ünitesinde yiyecek ve suya ad libitum erişimi olan kafes başına iki ila beş barındırıldı ve 12 saatlik bir karanlık/aydınlık döngüsünde sıcaklık kontrollü bir ortamda tutuldu. Tüm prosedürler Avrupa ve İspanyol yönetmeliklerine (2010/63/UE; RD 53/2013) ve Generalitat Valenciana Etik Komitesi ve Universidad Miguel Hernández'in hayvan refahı komitesi tarafından onaylandı.

1. Davranışsal oda kurulumu

  1. Davranışsal test odasını her gün aynı saatte rezerve edin ve kullanılacak farelerin l....

Temsili Sonuçlar

Erasmus Ladder cihazı, kurulumu ve uygulanan protokol Şekil 1'de sunulmuştur. Protokol, dört kesintisiz ve dört meydan okuma oturumundan (her biri 42 deneme) oluşur. Her deneme, başlangıç ve bitiş hedef kutuları arasındaki merdivende bir koşudur. Oturumun başlangıcında, başlangıç kutularından birine bir fare yerleştirilir. 15 ± 5 sn ("dinlenme" durumu) ayarlanan bir süreden sonra ışık yanar (işaret 1, maksimum 3 sn için). Daha sonra fareleri kutudan çıkmaya ve k.......

Tartışmalar

Erasmus Merdiveni, motor fenotip değerlendirmesi için mevcut yaklaşımların ötesinde büyük avantajlar sunmaktadır. Testin yapılması kolaydır, otomatikleştirilir, tekrarlanabilir ve araştırmacıların tek bir fare kohortu kullanarak motor davranışın çeşitli yönlerini ayrı ayrı değerlendirmesine olanak tanır. Mevcut çalışmada, tekrarlanabilirlik, cihazın özelliklerinden, deneysel tasarımdan ve analiz yöntemlerinden yararlanan az sayıda WT faresi ile sağlam verilerin üretilmesine izin verdi.......

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Görsel-işitsel teknisyen ve video yapımcısı Rebeca De las Heras Ponce'nin yanı sıra baş veteriner hekim Gonzalo Moreno del Val'e fare deneyleri sırasında iyi uygulamaların denetlenmesi için teşekkür ederiz. Çalışma, GVA Mükemmellik Programı (2022/8) ve İspanyol Araştırma Ajansı'ndan (PID2022143237OB-I00) Isabel Pérez-Otaño'ya verilen hibelerle finanse edildi.

....

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
C57BL/6J mice (Mus musculus)Charles Rivers
Erasmus Ladder deviceNoldus, Wageningen, Netherlands
Erasmus Ladder 2.0 softwareNoldus, Wageningen, Netherlands
Excel softwareMicrosoft 
Sigmaplot softwareSystat Software, Inc.

Referanslar

  1. Brooks, S. P., Dunnett, S. B. Tests to assess motor phenotype in mice: a user's guide. Nat. Rev. Neurosci. 10 (7), 519-529 (2009).
  2. . Available from: https://www.noldus.com/erasmusladder (2023)
  3. Cupido, A., et al. .

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

JoVE de Bu AySay 202

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Araştırma

Eğitim

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır