Bitkilerde Tipik Triazol Pestisitlerin Metabolitlerinin Sitotoksisitesinin Değerlendirilmesi

Özet

Protokol, bitkilerde triazol pestisitlerinin metabolitlerinin integral sitotoksisitesini değerlendirmek için yeni bir yöntemi açıklamaktadır.

Özet

Antropojenik faaliyetler nedeniyle çevreye çeşitli organik kirleticiler salınmıştır. Bu kirleticiler, mahsul bitkileri tarafından alınabilir ve besin zinciri boyunca ekosistem ve insan sağlığı için potansiyel tehditlere neden olabilir. Bitkilerdeki kirleticilerin biyotransformasyonu, ana bileşiklerinden daha toksik olabilen bir dizi metabolit üretir, bu da toksisite değerlendirmesi sırasında metabolitlerin dikkate alınması gerektiğini ima eder. Bununla birlikte, bitkilerdeki kirleticilerin metabolitleri son derece karmaşıktır ve tüm metabolitlerin toksikolojik bilgilerinin kapsamlı bir şekilde elde edilmesini zorlaştırır. Bu çalışma, bitkilerdeki kirletici metabolitlerin bütünsel sitotoksisitesini, toksikolojik testler sırasında bir bütün olarak ele alarak değerlendirmek için bir strateji önermiştir. Geniş spektrumlu fungisitlerin bir sınıfı olan triazol pestisitler, tarımsal üretimde yaygın olarak uygulanmaktadır. Tarım arazilerindeki kalıntı kirliliği giderek daha fazla dikkat çekmiştir. Bu nedenle, test edilen kirleticiler olarak flusilazol, dinikonazol, tebukonazol ve propikonazol dahil olmak üzere dört triazol pestisit seçildi. Metabolitler, havuç kallusunun test edilmiş triazol pestisitlerle muamele edilmesiyle üretildi. 72 saatlik muameleden sonra, havuç kallustaki pestisitlerin metabolitleri ekstrakte edildi, ardından Caco-2 hücre hattı kullanılarak toksikolojik testler yapıldı. Sonuçlar, havuç kallusunda test edilen pestisitlerin metabolitlerinin, Caco-2 hücrelerinin (P>0.05) canlılığını önemli ölçüde inhibe etmediğini ve pestisit metabolitlerinin sitotoksisitesini göstermediğini gösterdi. Önerilen bu yöntem, bitkilerdeki kirletici metabolitlerin sitotoksisitesini değerlendirmek için yeni bir yol açmaktadır ve bu da kesin toksisite değerlendirmesi için değerli veriler sağlaması beklenmektedir.

Giriş

Tarım arazilerinde yetişen mahsul bitkileri, antropojenik faaliyetlerden kaynaklanan çeşitli organik kirleticilere maruz kalabilir ^1,2. Kirleticiler bitkiler tarafından alınabilir ve besin zincirleri yoluyla ekosistem ve insan sağlığı için daha fazla tehdide neden olabilir ^3,4. Bitkilerdeki ksenobiyotikler muhtemelen Faz I ve II metabolizmaları⁵ gibi bir dizi biyotransformasyona uğrar ve bir dizi metabolit üretir. Bitkilerde yeşil karaciğer kavramına göre, bitki metabolizması ksenobiyotiklerin

Protokol

1. Havuç nasırının farklılaşması

NOT: Havuç kallusunun farklılaşması için ayrıntılı protokol önceki bir çalışmada^{açıklanmıştır 12}. İşte kısa bir açıklama.

1. Vernalize tohumların yüzeyini 20 dakika boyunca% 75 etanol ile sterilize edin, ardından 20 dakika% 20 H₂O₂ ile sterilize edin. Damıtılmış suyla en az 3 kez yıkayın.
2. Tohumları hormonsuz agar jelleşmiş (a-h% 1) Murashige ve Skoog (MS) ortamında (pH = 5.8, 121 ° C'de otoklavlanmış) ekin ve fideleri oluşturmak için 15 gün boyunca 26 ° C'de 16 saat fotoperiyot (350 μmol / m^....

Tartışmalar

Bu protokol, bitki kallusları ve insan hücre modellerini birleştirerek bitkilerde triazol pestisitlerinin metabolitlerinin integral sitotoksisitesini değerlendirmek için geliştirilmiştir. Önerilen bu protokol için kritik adımlar, bitki kallus kültürü ve Caco-2 hücresidir. Bitki kallus kültürü için en zor kısım ve göreceli tavsiyeler önceki çalışmamızda verilmiştir¹². Burada, hücre bakımının Caco-2 hücre kültürü için en zor kıs?.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,4-dichlorophenoxyacetic acid	WAKO	1 mg/L
20% H2O2	Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.	10011218-500ML
6-benzylaminopurine	WAKO	0.5 mg/L
75% ethanol	Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.	1269101-500 mL
96-well plate	Thermo Fisher
Acetonitrile	Sigma-Aldrich
Artificial climate incubator	Ningbo DongNan Lab Equipment Co.,Ltd	RDN-1000A-4
Autoclaves	STIK	MJ-Series
Caco-2 cells	Nuoyang Biotechnology Co.,Ltd.
CCK8 reagents	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, China	G021-1-3
Centrifuge	Thermo Fisher
CO2 incubator	Labtrip	HWJ-3-160
Dimethyl sulfoxide	Solarbio Life Sciences	D8371
Diniconazole, 98.7%	J&K Scientific	83657-24-3
Dulbecco's modified Eagle's medium	Solarbio Life Sciences	11965-500 mL
electronic balance	Shanghai Precision Instrument Co., Ltd	FA1004B
Fetal bovine serum	Cellmax
Fluorescence spectrophotometer	Tecan	Infinite M200
Flusilazole, 98.5%	J&K Scientific	85509-19-9
Freeze dryer	SCIENTZ
High-throughput tissue grinder	SCIENTZ
Inverted microscope	Leica Biosystems	DMi1
Milli-Q system	Millipore	MS1922801-4L
Murashige & Skoog medium	HOPEBIO	HB8469-7
Nitrogen blowing concentrator	AOSHENG	MD200-2
PBS	Solarbio Life Sciences	P1022-500 mL
Penicillin-Streptomycin Liquid	Solarbio Life Sciences	P1400-100 mL
Propiconazole, 100%	J&K Scientific	60207-90-1
Research plus	Eppendorf	10-1000 μL
Seeds of Little Finger carrot (Daucus carota var. sativus)	Shouguang Seed Industry Co., Ltd
Shaking Incubators	Shanghai bluepard instruments Co.,Ltd.	THZ-98AB
Tebuconazole, 100%	J&K Scientific	107534-96-3
Trypsin-EDTA solution	Solarbio Life Sciences	T1300-100 mL
Ultrasound machine	ZKI	UC-6
UV-sterilized super clean bench	AIRTECH
Vortex instrument	Wuxi Laipu Instrument Equipment Co., Ltd	BV-1010