İntrasitoplazmik Sperm Enjeksiyonu Sonrası Fare Yavrularında Kan Şekerinin İzlenmesi

Özet

Burada, intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu (ICSI)-embriyo transferi (ET) fare modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz, bu da ICSI'ye atfedilebilecek glikoz metabolizmasındaki yaşa bağlı değişiklikleri gözlemlememize olanak tanıyarak insan gelişimi üzerindeki potansiyel uzun vadeli etkileri hakkında bilgi veriyor.

Özet

İnsan ömrü oldukça uzundur, fare modelleri ise tüm insan ömrünü nispeten kısa bir süre içinde simüle edebilir ve bir yıllık fare ömrü kabaca 40 insan yılına eşittir. İntrasitoplazmik sperm enjeksiyonu (ICSI), klinik pratikte yaygın olarak kullanılan bir yardımcı üreme teknolojisidir. Bununla birlikte, yaklaşık 30 yıl önce nispeten yeni ortaya çıktığı göz önüne alındığında, bu tekniğin insani gelişme üzerindeki uzun vadeli etkileri belirsizliğini korumaktadır. Bu çalışmada, bir fare modeli kullanılarak embriyo transferi (ET) yöntemi ile kombine ICSI'yi kurduk. Sonuçlar, normal fare sperminin in vitro kültür ve ardından ICSI uygulandıktan sonra %89.57'lik bir döllenme oranı ve %87.38'lik bir iki hücreli oran sergilediğini gösterdi. ET'yi takiben, yavruların doğum oranı yaklaşık% 42.50 idi. Ayrıca, fareler yaşlandıkça, ICSI tekniğinin uygulanmasıyla ilişkili olabilecek glikoz metabolizması seviyelerinde dalgalanmalar gözlenmiştir. Bu bulgular, fare ICSI-ET tekniğinin, sperm anormalliklerinin embriyo gelişimi üzerindeki etkisini ve bunların özellikle glikoz metabolizması ile ilgili olarak yavru sağlığı üzerindeki uzun vadeli etkilerini değerlendirmek için değerli bir platform sağladığını göstermektedir. Bu çalışma, ICSI tekniğinin insani gelişme üzerindeki potansiyel etkileri hakkında daha fazla araştırma için önemli bilgiler sağlamakta ve bu teknolojinin uzun vadeli etkilerinin derinlemesine araştırılmasının gerekliliğini vurgulamaktadır.

Giriş

Doğurganlık sorunları, özellikle azalan doğurganlık oranlarının ve kısırlık prevalansının ve şiddetinin artan şiddetinin öne çıktığı modern toplumda, tıbbi ve sosyolojik kaygıların önemli bir odağı olarak ortaya çıkmıştır. Yardımcı Üreme Teknolojisi (ART), terapötik bir müdahale olarak yaygın olarak kullanılan İntrasitoplazmik Sperm Enjeksiyonu (ICSI) ile bu zorlukların üstesinden gelmek için çok çeşitli olanaklar sunar.

Palermo'nun 1992 yılında İntrasitoplazmik Sperm Enjeksiyonu (ICSI) ile elde edilen ilk başarılı gebeliği bildirmesinden bu yana, ICSI Yardımcı Üreme Teknolojilerinde (....

Protokol

Aşağıda açıklanan ICSI-ET protokolü, yönergeleri takip eder ve Şanghay Planlı Ebeveynlik Araştırmaları Enstitüsü'nün Hayvan Etik İncelemesi tarafından onaylanmıştır. Güvenlik Prosedürleri: Kimyasalları veya biyolojik malzemeleri kullanırken daima uygun kişisel koruyucu ekipman (KKD) kullanın. Davlumbaz Kullanımı: Sertifikalı bir çeker ocak veya biyogüvenlik kabini içinde uçucu kimyasallar veya aerosol oluşumunu içeren tüm prosedürleri gerçekleştirin. Süperovülasyon prosedürü için dişi fareler (6-8 haftalık B6D2F1 suşu) kullanın.

1. Farelerde ICSI

1. Farelerin süper yumurtlaması

Tartışmalar

Bu çalışma, insan destekli üreme teknolojisini (ART) kapsamlı bir şekilde özetlemek ve ICSI'nin ET ile birlikte yavru gelişimi üzerindeki etkisini incelemek için fare intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu (ICSI) ve embriyo transferi (ET) tekniklerini entegre etti. ICSI tekniğinin normal fare spermi ile uygulanmasında yüksek döllenme (%86.76) ve 2 hücre oranı (%88.48) elde edilmiştir. ET'yi takiben, yavru farelerin doğum oranı yaklaşık% 42.50 idi ve bu da teknik platform.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.25% avertin (2,2,2-tribromoethanol)	Nanjing Aibei	M2960	for anesthetization
Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	353001
Bacteriological Petri Dishes 50 x 9 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile	BD	351006
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc.
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Dissection Microscope	Olympus	SZX16	Use in mouse embryo transfer
Fluorinert Fc-770	SIGMA	F3556	Fluorinert FC-770 is a thermally stable fully fluorinated liquid with high dielectric strength and resistivity, used as operating fluid
handheld glucometer	Roche	AccuChek performa	Blood glucose measurement
HTF	Merck	MR-070-D	The EmbryoMax Human Tubal Fluid (HTF) (1x), liquid designed for use with Mouse IVF is available in a 50 mL format and has been optimized and validated for Embryo Culture.
Hydraulic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Oil, 5196000030	For sperm injection
Inverted Microscope	Nikon	TI2-U	Micromanipulation observation host
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Micromanipulator	NARISHIGE	NTX-N4	Micromanipulation arm
mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications.
Needle Cutter	Nanjing Aibei	Sutter MF-800	Use for fabricating micromanipulation needles
Needle Puller	Nanjing Aibei	Sutter model p-100	Use for making micromanipulation needles
Piezo Drill Trip Mouce ICSI	Eppendorf	5195000.087	Application of ICSI injection needle.
Piezoelectric Micromanipulator (Membrane Breaker)	Eppendorf	Eppendorf PiezoXpert	Use of micro-pulses to break the zona pellucida and oolemma of the oocyte
Pneumatic Microinjector	Eppendorf	CellTram 4r Air, 5196000013	For fixing the oocyte
Ready-to-use Human Chorionic Gonadotropin (Hcg)	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Ready-to-use Pregnant Mare's Serum Gonadotropin (PMSG)	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Oocyte retrieval and observation of embryo development