Adacık izolasyonu için domuz pankreasının cerrahi perfüzyonu ve izolasyonu

Özet

Bu protokol, adacık izolasyonu ve saflaştırılması için bir domuz pankreasının satın alınması için adım adım bir kılavuz sağlar.

Özet

Pankreas adacık nakli, tip I diyabet için yeni ortaya çıkan bir tedavi yöntemidir; ancak, donör eşleşmesi ve mevcudiyeti ile sınırlıdır. Domuz adacığı ksenotransplantasyonu, talep üzerine, fonksiyonel adacıkların büyük ölçekli üretim potansiyeli ile allotransplantasyona umut verici bir alternatif sunmaktadır. İzole edilmiş adacıkların verimi ve canlılığı, donör pankreasın kalitesine ve tedarik yöntemine, özellikle sıcak iskemi süresinin süresine karşı oldukça hassastır. Organların korunmasını ve müteakip adacık verimini ve canlılığını iyileştirmek için, domuz pankreasının cerrahi perfüzyonu ve rezeksiyonu için bir protokol geliştirdik. Bu protokolde direkt infrarenal aort kanülasyonu ve organ perfüzyonu kullanılarak sıcak iskemi süresi en aza indirilir ve cerrahi uzmanlık alanı olmayan operatörler için prosedür basitleştirilir. Pankreasın aort yoluyla müteakip arteriyel perfüzyonu, durgun kanı mikrovasküler sistemden temizler, böylece trombozu ve dokudaki oksidatif hasarı azaltır. Bu el yazması, domuz pankreasının cerrahi perfüzyonu ve rezeksiyonu için ayrıntılı bir protokol sağlar, ardından adacık izolasyonu ve saflaştırılması sağlanır.

Giriş

Tip 1 diyabet, pankreas beta hücrelerinin¹ otoimmün yıkımından kaynaklanır. Sonuç olarak, hastalar ekzojen insüline bağımlıdır ve bu da onları hiper ve hipoglisemi atakları ile yüksek riskli glisemik dalgalanmalara sokar². Adacık allotransplantasyonu, tip I diyabet için potansiyel bir tedavidir; Bununla birlikte, pankreas organ bağışçılarının sınırlı mevcudiyeti, prosedürün yaygın olarak benimsenmesinin önünde önemli bir engel olmaya devam etmektedir ^2,3. Domuz donörlerinden adacık ksenotransplantasyonu, bu hayvanlar kolayca bulu....

Protokol

Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler, Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi Karşılaştırmalı Tıp Bölümü'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. 35 ila 35 kg arasında değişen yetişkin Yorkshire domuzları bu prosedür için idealdir; Bununla birlikte, protokol, deneysel bağlama bağlı olarak farklı boyutlardaki domuzlar için uyarlanabilir. Tüm prosedür bir ameliyathane kurulumunda steril bir şekilde gerçekleştirilmelidir.

1. Ameliyat öncesi hazırlık ve anestezi

1. Domuzu kas içine enjekte edilen 4 mg / kg tiletamin ve zolazepam, 20 mg / kg ketamin....

Tartışmalar

Domuz donörleri kullanılarak yapılan pankreas adacık ksenotransplantasyonu, Tip I diyabetin tedavisi için umut verici bir stratejidir. Adacık izolasyonu zordur ve nihai adacık canlılığı ve verimi, organ alımı sırasında karşılaşılan hipotansiyon ve doku iskemisine oldukça duyarlıdır^16,17. Pankreas tedarikini ve korunmasını optimize etmek için bu protokol, adacık izolasyonundan önce domuz pankreasının t.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 M NaOH, 100 mL	Millipore Sigma	1310-73-2
10x HBSS, 500 mL (15 to 30 °C)	Thermo Fisher	14065056
1x D-PBS, 500 mL	Thermo Fisher	14200075
1x HBSS, 1 L	Thermo Fisher	14025076
250 mL Conical Tubes	Millipore Sigma	CLS430236-6EA
Amphotericin B [50 mg]	Millipore Sigma	PHR1662
Antiseptic Povidone Iodine 10%	Millipore Sigma	25655-41-8
BioRad Gradient Former	BioRad	395
Calcium Chloride dihydrate	Thermo Fisher	10035-04-8
COBE Cell Processor	Ebay	317690
Digestion circuit reservoir, Gibco bottle, 1 L	Thermo Fisher	10341001
Dimethylsulfoxide (DMSO)	Thermo Fisher	85190
Dithizone	Thermo Fisher	60-10-6
Gradient Former Connection Kit	BioRad	1652008
Heparin [1000 U/mL]	Emergency Medical Products	0409-2720-01
HEPES Buffer (1 M), 100 mL	Thermo Fisher	15630080
Human Serum Albumin 25%, 100 mL	Celprogen	HSA2001-25-1
Isoflurane	Covetrus	Item#:11695067772
Ketamine	Patterson	Item #:07-894-8462
Liberase (100 mg)	Millipore Sigma	5401020001
LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit	Thermo Fisher	L3224
Lympholyte 1.1 Media 500 mL	Cedarlane Labs	CL5020
Masterflex LS 16 Tubing	Masterfle	96419-16
Masterflex Peristaltic Pump	Masterflex	07522-30
PenStrep (2 mg/mL)	Celprogen	PS-30-002
Pulmozyme (1 mg/mL, 2.5 mL/vial)	Dornase Alfa	8931278
Recovery Medium, PIM(R)	Prodo Laboratories, Inc.	PIM-R001GMP
RPMI 1640	Millipore Sigma	R8758-1L
Standard Culture Medium, PIM(S)	Prodo Laboratories, Inc.	PIM-S001GMP
Tzed™ (tiletamine and zolazepam) Injection C	Patterson	Item #:07-894-6240
University of Wisconsin (UW) Solution, 3 L	Global Transplant Solutions	1000-0046-06
Waterbath	Sigma Alderich	CLS6783-1EA
Xylazine	Patterson	Item #:07-891-6165