Yetişkin Zebra Balıklarında Vücut Hasarını ve İlişkili Mortaliteyi En Aza İndiren Bir İntraperitoneal Enjeksiyon Tekniği

Özet

Yetişkin zebra balıklarında yeni bir intraperitoneal (IP) enjeksiyon yöntemi tanımlanmıştır. Doksorubisin gibi toksik bileşiklerle çalışırken, bu prosedür daha önce bildirilen iki IP yönteminden daha etkilidir. Teknik, zebra balığı modelinde sınırlı deneyime sahip araştırmacılar tarafından kolayca benimsenecek şekilde tasarlanmıştır.

Özet

Genetik olarak erişilebilir olan yetişkin zebra balığı (Danio rerio), kardiyomiyopati gibi insan bozukluklarını incelemek için değerli bir omurgalı modeli olarak kullanılmaktadır. İntraperitoneal (IP) enjeksiyon, terapötik etkileri test etmek veya doksorubisin kaynaklı kardiyomiyopati (DIC) gibi hastalık modelleri oluşturmak için vücuda bileşikler veren önemli bir yöntemdir. Şu anda, iki IP enjeksiyonu yöntemi vardır. Her iki yöntemin de doksorubisin gibi toksik bileşiklerle çalışırken sınırlamaları vardır, bu da vücut şeklinde ciddi hasar ve balık ölümü olarak ortaya çıkan yan etkilere neden olur. Bu eksiklikler kapsamlı araştırmacı eğitimi ile giderilebilirken, minimum yan etkiye sahip yeni bir IP enjeksiyon yöntemi arzu edilir. Burada, toksik bileşikleri işleyebilen benzersiz bir IP enjeksiyon yöntemi rapor edilmektedir. Sürekli olarak azalan kardiyak fonksiyon, önemli balık ölümüne neden olmadan sonuçlanabilir. Bu teknik, yetişkin zebra balığı konusunda minimum deneyime sahip araştırmacılar tarafından kolayca öğrenilebilir.

Giriş

Zebra balığı (Danio rerio), insan hastalıklarını incelemek için deneysel bir model olarak dikkat çekmiştir, çünkü bu hayvan, insanlara yüksek gen ve organ homolojisi, dış döllenme, genetik manipülasyon kolaylığı ve erken olgunluğa kadar vücut şeffaflığını kapsar ve bu da sayısız görüntüleme uygulamasını kolaylaştırır¹. Zebra balığı embriyoları ve larvaları için ilaçları doğrudan suya verme sürecinin aksine, yetişkin zebra balıklarına ilaç vermek daha karmaşık ve zorlu bir çaba sunar².

Yetişkin balıklarda bileşikler, suya doğrudan uygulama gibi pasif ilaç verme teknikleriyle veya gavag....

Protokol

Gerçekleştirilen tüm prosedürler, 'Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nda (National Academies Press, 2011) belirtilen standartlara bağlı kalarak Mayo Clinic Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Çalışmadaki tüm zebra balıkları Yabani Hint Karyotipi (WIK) suşuna aittir. Reaktiflerin ve çalışma için kullanılan ekipmanın ayrıntıları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Doksorubisin stok çözeltisinin hazırlanması ve saklanması

1. Doksorubisin stoğunu ticari bir kaynaktan temin edin.
   NOT: Doksorubisin ışığa duyarlıdır, bu nedenle toz halinde alın ve....

Tartışmalar

Mevcut iki IP enjeksiyon yönteminden ^4,10 farklı olarak, yeni IP enjeksiyon yöntemi aşağıdaki farklı özelliklerle karakterize edilir. İlk olarak, benzersiz bir iğne penetrasyon açısı kullanılır (sıfıra yakın); ikincisi, iğne balığa benzersiz bir konumdan, yani bir balığın ventral yüzeyinde enjeksiyonu kolaylaştıracak doğal bir delik yoluyla nüfuz eder; Ve son olarak, iğnenin hareketi önden arkaya doğrudur. Bu ayarlamalar, .......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
10 μL NanoFil-syringe	World Precision Instruments, Inc	NANOFIL	injection tool
34 G needle	World Precision Instruments, Inc	NI34BV-2	injcetion tool
60 mm Petri dish	fisher scientific/fisherbrand	FB0875713A	placing the sponge
Dissecting microscope	Nikon	SMZ800	Injceting the Dox
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG	drug for creating DIC model
Echocardiography	VISUAL SONICS	Vevo 3100	measuring cardiac function
Foam Sponge	Jaece Industries	L800-D	placing the fish
Hank's balanced salt solution (HBBS)	Thermo Fisher	14025076	Vehicle for Dox
Microcentrifuge	southernlabware	MyFuge/C1012	collect the Dox solution
Precision Balance Scale	Torbal	AD60	Digital scales
Tricaine	Argent	MS-222	Anesthetizing fish
Tube	Eppendorf	1.5 mL	storage
vevo LAB  software	FUJIFILM VISUAL SONICS	5.6.0	quantification of the heart