Yan Etki Riski Düşük Olan Sıçanlarda İntrakameral Enjeksiyon

Özet

Bu protokol, merkezi bir kornea insizyonu ve ön kamaraya uzun bir tünel kullanılarak sıçanlarda intrakameral enjeksiyon için bir tekniği tanımlar. Bu enjeksiyon yöntemi, yanlışlıkla doku hasarına neden olma riskini en aza indirir ve böylece hassasiyeti ve tekrarlanabilirliği artırır.

Özet

İntrakameral enjeksiyon, oftalmolojide standart bir uygulama rutinidir. Araştırma için kemirgenlerde intrakameral enjeksiyonun uygulanması, küçük sulu mizah hacmi, lens eğriliği ve lens kalınlığı dahil olmak üzere gözün sınırlayıcı boyutları ve anatomisi nedeniyle zordur. İntrakameral enjeksiyonlar sırasında potansiyel hasar, yan etkilere ve deneysel değişkenliğe neden olur. Bu protokol, sıçanlarda intrakameral enjeksiyon için bir prosedürü tanımlar ve hassasiyet ve tekrarlanabilirlik sağlar.

Deneysel model olarak Sprague-Dawley cinsi sıçanlar kullanılmıştır. Sıçanlarda lens pozisyonu ön kamaraya çıkıntı yaptığından, insanlarda olduğu gibi çevreden enjekte etmek sakıncalıdır. Bu nedenle, ön kamaraya kendiliğinden sızdırmaz bir tünel oluşturmak için 31 gauge 0.8 mm'lik bir stiletto bıçak kullanılarak merkezi kornea bölgesinde bir kesi oluşturulur. Düzlüğe yakın bir açıda bir kesi, sulu mizah kaybını ve ön kamaranın sığlaşmasını en aza indiren uzun bir tünel oluşturulmasına izin verir. Enjeksiyon için tünele 34 gauge nanoiğne yerleştirilir. Bu, minimum sürtünme direnci ile penetrasyon sağlar ve lense dokunmayı önler. Tripan mavisi enjeksiyonu, ön kamaradaki boyanın varlığının yarık mikroskobu ile görselleştirilmesine ve sızıntının dışlanmasına izin verir. Kornea endotel tabakasının biyoyararlanımı, enjeksiyondan sonra kornea endotel hücrelerinin çekirdeklerini boyayan Hoechst boyasının enjeksiyonu ile gösterilir.

Sonuç olarak, bu protokol sıçanlarda doğru intrakameral enjeksiyon için bir prosedür uygular. Bu prosedür, deneysel sıçan modellerinde çeşitli ilaçların ve bileşiklerin intrakameral olarak verilmesi için kullanılabilir ve oftalmik araştırmanın verimliliğini ve tekrarlanabilirliğini arttırır.

Giriş

Topikal uygulama ile göz yüzeyine verilen bileşiklerin biyoyararlanımı büyük ölçüde sınırlıdır, tipik olarak %<^5'tir1. Göz damlaları ile uygulanan bileşikler esas olarak drenaj, indüklenmiş lakrimasyon, gözyaşı sıvısı döngüsü ve konjonktival emilim ile elimine edilir. Ek olarak, bileşiklerin oküler yüzeyden nüfuz etmesi, kornea-konjonktiva bariyeri ^1,2,3 tarafından oldukça kısıtlanmıştır. Kornea üç ana katmandan oluşur: en dıştaki epitel, ara stroma ve en içteki endotel. Yüzeysel kornea epiteli, güçlü sıkı bağlantılarl....

Protokol

Protokoldeki deneyler, hayvan bilimi için Ulusal İzin Komitesi tarafından onaylandı ve hayvanların oftalmik ve görme araştırmalarında kullanılması olan ARVO Beyanı'na uygun hale geldi. Bu çalışma için 8-10 haftalık dişi Sprague-Dawley sıçanları kullanıldı ve 12/12 saat aydınlık-karanlık döngülerine maruz bırakıldı. Hayvanlar ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bkz.

1. Hayvan hazırlama

1. Anestezik bir ketamin (0.8 mL'de 80 mg / kg vücut ağırlığı) ve ksilazin (0.2 mL'de 4 mg / kg vücut ağırlığı) karışımı hazırlayın ve sıçanları uyuşturmak için tek bir enjeksiyonda i....

Tartışmalar

Klinik öncesi araştırma modelleri, bulguların güvenilirliğini ve uygulanabilirliğini sağlamak için kontrollü ve tekrarlanabilir bir ortam sağlamalıdır. Oftalmoloji araştırmalarında, göz enjeksiyon modelleri, hastalık modellerinin oluşturulmasından, yeni tedavilerin test edilmesine ve doku reaksiyonlarının ve potansiyel yan etkilerin değerlendirilmesine kadar çeşitli araştırma yönlerinde yaygın olarak kullanılmaktadır.

İntrakamer.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alizarin Red	Alpha Aesar	042040.5
Buprenorphine	Richter pharma	102047
Dexamethasone 0.1%	Fisher Pharmaceutical	393102-0413
Hamilton glass syringe 10 μL	Hamilton Co.	721711
Hoeschst	Merck	B2261
Ketamine	Bremer pharma GMBH (medimarket)	17889
Ofloxacin 0.3% eye drops	Allergan	E92170
Oxybuprocaine Hydrochloride 0.4%	Fisher Pharmaceutical	N/A
Pentobarbital sodium 200 mg/mL	CTS	N/A
Slit microscope	Haag-streit bern	b-90019115
Sprague-Dawley Rats	Envigo	N/A
Stiletto blade 31 G 0.8 mm	Tecfen medical (skymed)	QKN2808
Surgical microscope	Zeiss	OPMI-6 CFC
Trypan Blue	Sartorius	03-102-1B
Xylazine	Eurovet Animal Health	615648