Farelerde Bağırsak Mikrobiyal Metabolitlerini Değerlendirmek için İnferior Vena Cava'dan Ardışık Kan Alımı ve Ardından Portal Ven

Özet

Protokol, bağırsak mikrobiyal metabolitlerinin üretimini ve emilimini değerlendirmek için portal venlerden ve farelerden inferior vena kava'dan sırayla kan toplamak için bir yöntem göstermektedir.

Özet

Bağırsak mikrobiyal ürünlerinin hem bağırsakta lokal olarak hareket ettiği hem de etkilerinin çok sayıda uzak organ sistemine yayılabileceği dolaşıma emildiği bilinmektedir. Kısa zincirli yağ asitleri (SCFA), sindirilemeyen diyet lifinin fermantasyonu sırasında bağırsak mikropları tarafından üretilen bir metabolit sınıfıdır. Artık bağırsak mikrobiyomunun, konakçı boyunca bağırsak-akciğer, bağırsak-beyin ve diğer bağırsak-organ eksenleri yoluyla bağırsak dışı organ sistemlerini nasıl etkilediğine önemli katkıda bulunanlar olarak kabul edilmektedirler. SCFA'lar kolondan bağırsak dokusu yoluyla portal ven (PV) içine emilir. Daha sonra karaciğerden geçerler ve beyin, kas, yağ dokusu ve akciğerler gibi çeşitli organlarda tüketilirler. SCFA'lar en kolay şekilde dışarı atılan dışkı materyalinde ölçülür, ancak koloni içi dışkı içeriğinden daha doğru ölçümler elde edilmiştir. Burada, farelerde SCFA'ların emilimini, taşınmasını ve sistemik seviyelerini incelemek için tek bir deneğin PV ve sistemik dolaşımdaki plazmasından numune alınmasının tercih edilebileceğini öneriyoruz. PV ve inferior vena kava'dan (IVC) etkili kan örneklemesi için portal ve sistemik dolaşımlardan nispeten büyük hacimlerde kan toplanmasına izin veren yeni bir teknik sunuyoruz. Bu, PV'nin bağlanmasıyla gerçekleştirilir, böylece PV'nin içine akan mezenterik damarlardan geri doldururken genişlemesine veya genişlemesine izin verilir. Bu yöntemi kullanarak, başarılı toplama oranının yanı sıra toplanan toplam kan miktarını da iyileştirebildik (IVC'den 0,3 mL'ye ve PV'den 0,5 mL'ye kadar).

Giriş

Kısa zincirli yağ asitleri (SCFA), bağırsak mikrobiyotası tarafından üretilen önemli bir metabolit sınıfıdır. Bağırsak mikrobiyomu ve diğer uzak organlar¹ arasındaki etkileşimdeki kritik rolleri, iltihabı nasıl modüle ettiklerini, özel reseptörler aracılığıyla nasıl sinyal verdiklerini ve hücresel metabolizmada^substratlar olarak nasıl hizmet ettiklerini açıklayan araştırmalarla desteklenmiştir 2,3,4,5. Grubumuzdan yapılan son çalışmalar, SCFA'ların in vivo olarak bağırsak-akc....

Protokol

Bu hayatta kalmama prosedüründeki tüm adımlar, California San Francisco Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı. Kullanılan fare cinsiyeti ve suşu, erkek C57BL / 6J fareleriydi (25-35 g ağırlığında ve 12-15 haftalık). Dişi ve/veya diğer standart fare türleri de kullanılabilir.

1. Anestezi

1. Fare karnının alt yarısını% 70 etanol çubuklarıyla silin. İntraperitoneal tribromoetanol (250-400 mg / kg) enjeksiyonu yaparak anestezi uygulayın. Ketamin / ksilazin veya izofluran anestezisi de kullanılabilir. Kornea hasarını önlemek için gözl....

Tartışmalar

Bu makale, aynı deney faresinde IVC ve PV'den sırayla kan örneklerinin neredeyse aynı anda toplanması için yenilikçi bir in vivo yöntemi açıklamaktadır. Bu yöntem, portal dolaşımından geçen SCFA'lar gibi bağırsak mikrobiyotası tarafından oluşturulan ürünlerin seviyelerini ölçmek için kullanışlıdır. Farelerde (25-30 g ağırlığında) bir terminal prosedür sırasında toplanabilen ortalama maksimum kan hacmi yaklaşık 1 mL / faredir ve bu da topla.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,2,2 Tribromoethanol, 97% (Avertin)	Sigma Aldrich	T48402-25G	Anesthetic agent
Buprenorphine Hydrochloride Injection 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05	Analgesic agent
Dressing Forceps	Miltex	6-100	Dissection
Graefe Forceps	Roboz	RS-5136	Dissection
Hepatin sodium 1000 USP units/mL	Hikma	NDC 0641-0391-12	Blood sample syringes/tubes heparinization
Prolene 7-0	Ethicon	8696G	Portal vein ligature
Scissors	F.S.T	14058-11	Dissection
Student Halsted-Mosquito Hemostats	F.S.T	91308-12	Dissection
Surgical tape	3M Transpore	1527-1	Mouse limbs fixation
U-100 Insulin Syringe 28G1/2	EXEL	26027	Blood sample collection