Eksikliklerin yavru sağlığı sonuçları üzerindeki etkisini incelemek için maternal diyet folik asit veya kolin seviyelerinin değiştirilmesi

Özet

Bu protokol, anne diyetinin yavru sağlığı sonuçları üzerindeki etkisini araştırmak amacıyla hamilelikten önce dişi farelerde diyetle folik asit veya kolin alımını azaltma yöntemini açıklar.

Özet

Hamilelik ve emzirme döneminde annenin beslenmesi, yavruların nörogelişiminde önemli bir rol oynar. Folik asit ve kolinin yanı sıra diğer B vitaminlerini merkeze alan tek karbonlu (1C) metabolizma, gelişmekte olan fetüsün nöral tüpünün kapanması sırasında anahtar bir rol oynar. Bununla birlikte, hamilelik sırasındaki bu maternal beslenme yetersizliklerinin doğumdan sonra yavru sağlığı sonuçları üzerindeki etkisi nispeten tanımlanmamıştır. Ayrıca, folik asit veya kolindeki maternal diyet eksiklikleri, yavrulardaki diğer sağlık sonuçlarını etkileyebilir - bu da bunu değerli bir model haline getirir. Bu protokol, diyet değişiklikleri yoluyla dişi farelerde 1C metabolizmasında bir eksikliğe neden olma prosedürünü ana hatlarıyla belirtmeyi amaçlamaktadır. Dişiler sütten kesimde, 2 aylık olana kadar, çiftleşmeden 4-6 hafta önce diyetlere yerleştirilir ve hamilelik ve emzirme boyunca diyette kalırlar. Bu dişilerden elde edilen yavrular sağlık sonuçları açısından değerlendirilebilir. Dişiler yavru üretmek için birden çok kez kullanılabilir ve 1C metabolit ölçümlerini ölçmek için dişilerden dokular toplanabilir. Bu protokol, yavru sağlığı sonuçlarını incelemek için folik asit veya kolindeki maternal diyet eksikliklerinin nasıl indükleneceğine dair bir genel bakış sağlar.

Giriş

Hamilelik ve emzirme döneminde annenin beslenmesi, yavru gelişiminde hayati bir rol oynar. Tek karbonlu (1C) metabolizma, beslenme sinyallerini biyosentez, redoks homeostazı ve epigenetik ile bütünleştiren önemli bir metabolik ağdır. Folik asit ve kolin, nöral tüpün kapanmasında önemli bir rol oynayan 1C'nin merkezi bileşenleridir. Kadınların doğurganlık yıllarında folik asit ve kolin takviyesi yapmaları yaygın olarak tavsiye edilir¹. Folik asidin fetal gelişimdeki kritik rolü açıkça belirlenmiş olsa da, ilgili altta yatan mekanizmalar belirsizliğini korumaktadır. Çocuk doğuran kadınların hamile kalmadan önce folik asit almaları önerilir, çünkü....

Protokol

Bu protokol onaylandı ve tüm hayvan denekler Midwestern Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin yönergelerine uygun olarak kullanıldı (Protokol 2983). Bu çalışmada 2 aylık (vücut ağırlığı, ~ 20 g) dişi C57BL / 6J fareleri kullanıldı. Genel olarak, üreme çağındaki dişi fareler kullanılabilir¹⁰. Çöp etkilerinden kaçınılmasını sağlamak için, her diyet için birden fazla dişi kullanılması gerekir¹¹. Çalışmada kullanılan reaktiflerin ve ekipmanların detayları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Deney hazırlığı

1. Ticari kemirgen gıda ü....

Tartışmalar

Bu protokolün araştırma laboratuvarlarında uygulanması sırasında, araştırmacıların deneylere başlamadan önce göz önünde bulundurmaları gereken birkaç önemli not vardır. İlk olarak, diyet üretiminde, deneysel çalışmanın başlamasından önce diyetin üretilmesi için yeterli teslim süresinin verilmesi gerekir. Teslim süreleri şirketten şirkete değişebilir ve diyet sevkiyatının da hesaba katılması gerekir. Üreme çağındaki (~ 2-2.5 aylık) dişi fareler çiftleşmeden 4-6 hafta önce .......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.5 mL tubes	Eppendorf
C57BL/6 Female Mice	Charles River	27	Mice can be bred in house as well.
Choline Deficient Diet	Envigo	TD.06119
Control Diet	Envigo	TD.190790
EDTA tubes
Folic Acid Deficient Diet	Envigo	TD.01546
GraphPad prism			https://www.graphpad.com/features
Housing for rodents	Lab Products, LLC	One CageVentilated Racks & Cages
Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS)	SCIEX, Framingham, MA	5500 QTrap
Ultra-performance liquid chromatography (UPLC)	Shimadzu, Columbia, MD, USA	Nexera