İn Vitro Embriyo İmplantasyon Modelinin Kurulması

Özet

Bu protokol, embriyo implantasyon sürecini etkileyen ilgili molekülleri değerlendirmek için in vitro model olarak basit ve verimli embriyo implantasyonu oluşturmak için metodolojileri açıklar.

Özet

Embriyo implantasyonu, başarılı bir gebeliğin kurulmasında ilk adımdır. Embriyo implantasyonu için bir in vitro model, temel biyolojik araştırma, ilaç geliştirme ve tarama için kritik öneme sahiptir. Bu makale, embriyo implantasyonu için basit, hızlı ve oldukça verimli bir in vitro model sunmaktadır. Bu protokolde ilk olarak fare blastokisti edinimi ve insan endometriyal adenokarsinom hücrelerinin (Ishikawa) implantasyon için hazırlığı tanıtıldı, ardından fare embriyoları ve Ishikawa hücreleri için ko-kültür yöntemi uygulandı. Son olarak, bu modele dayalı olarak değişen 17-β-estradiol (_E2) ve progesteron (P4) konsantrasyonlarının embriyo adezyon oranları üzerindeki etkisini değerlendirmek için bir çalışma yaptık. Bulgularımız, yüksek_E2 konsantrasyonlarının embriyo adezyonunu önemli ölçüde azalttığını, progesteron ilavesinin ise adezyon oranını geri getirebileceğini ortaya koydu. Bu model, implantasyonu ve endometriyal alıcılığı kontrol eden sitokinler, ilaçlar ve transkripsiyon faktörleri gibi adezyon sürecinde yer alan molekülleri değerlendirmek ve taramak için basit ve hızlı bir platform sunar.

Giriş

Başarılı bir gebeliğin ilk adımı olan embriyo implantasyonu, biyolojik temelini anlamak ve kısırlığın zorluklarını ele almak için çok önemlidir. Bununla birlikte, etik kısıtlamalar, insan klinik embriyo örneklerinin toplanmasında önemli sınırlamalar getirmekte ve hamileliğin erken döneminde insan embriyoları ile endometriyum arasındaki karmaşık etkileşimlere ilişkin araştırmaları engellemektedir¹. Bu karmaşık mekanizmaların derinlemesine anlaşılması, temel biyolojik araştırmaları, ilaç keşfini ve üreme sağlığını ilerletmek için hayati önem taşır.

Önceki in vitro modeller, tek katmanlı insan endometriyal epitel hücrel....

Protokol

Fare işleme ve deneysel çalışmalar, Şanghay Biyomedikal ve Farmasötik Teknolojiler Enstitüsü Hayvan Komitesi tarafından onaylanan protokoller altında gerçekleştirildi. Güvenlik Prosedürlerini Sağlayın: Kimyasalları veya biyolojik malzemeleri kullanırken daima uygun kişisel koruyucu ekipman (KKD) kullanın.

1. Fare embriyolarının elde edilmesi

NOT: Bu bölümde fare embriyolarının elde edilme süreci açıklanmaktadır. Yetişkin dişi fareler (6-8 haftalık, hibrit C57BL / 6 ve DBA / 2), 20-25 ° C'de ve% 40-60 nemde 12 saat aydınlık ve 12 saat karanlık standart çevre koşulları altında tutuldu.

<....

Tartışmalar

Embriyo implantasyonu için önerilen in vitro modelin basitliği ve hızlılığı, erken evre ilaç taraması ve diğer araştırma uygulamaları için dikkate değer avantajlar sunmaktadır. Basit protokol, Ishikawa hücre hatlarının yüksek verimli doğası ile birleştiğinde, özellikle ilaç keşfinin erken aşamalarında büyük ölçekli ekranlar için ideal bir aday haline getirir. Liang¹³, TAGLN2 yıkımının trofoblast hücrelerinin istila kabiliyetini azalttığını buldu.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
17-β-estradiol	SIGMA	3301	Most potent mammalian estrogenic hormone
BD Falcon	BD	353001	Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Culture plate	Corning	3506	Cell culture
DMEM/F12	Gibco	1133032	DMEM/F12 (1x), liquid 1:1,Contains L-glutamine and 15 mM HEPES buffer
Fetal Bovine Serum	Gibco	10099141	Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin
Gelatin	SIGMA	G9391	Type B, powder, BioReagent, suitable for cell culture
HCG	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Hyaluronidase	SIGMA	V900833	Reagent grade, powder
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
L-glutamine	Gibco	25030081	L-glutamine-200 mM (100x), liquid
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications
Penicillin-Streptomycin, liquid	Gibco	15140122	10,000 Units penicillin (base) and 10,000 units streptomycin (base), utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline
PMSG	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent ,intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Progesterone	SIGMA	5341	Steroid hormone secreted by the corpus luteum during the latter half of the menstrual cycle
Sodium pyruvate	Gibco	11360070	Sodium pyruvate is commonly added to cell culture media as a carbon source in addition to glucose
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Embryo retrieval and observation of embryo development