Pulmoner Arter Bantlaması Kullanılarak Sağ Taraflı Kardiyak Yeniden Şekillenme ve Aritminin Sıçan Modeli

Özet

Sağ kalp yetmezliği (RHF), ventriküler ve atriyal fonksiyon bozukluğuna yol açan sağ taraflı kardiyak dilatasyon ve hipertrofi ile karakterizedir. RHF ile ilişkili kardiyopulmoner durumlara kardiyak aritmi riskinde artış eşlik eder. Bu makale, gelişmiş ventriküler ve atriyal aritmogenez ile ilişkili pulmoner arter bantlamasına bağlı RHF'nin standart bir modelini açıklamaktadır.

Özet

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı veya pulmoner arteriyel hipertansiyon (PAH) dahil olmak üzere klinik durumlar, kronik sağ ventrikül basıncının aşırı yüklenmesine ve ilerleyici sağ kalp yetmezliğine (RHF) yol açabilir. RHF, RV ve sağ atriyumu (RA) etkileyen anormal miyokardiyal fonksiyon ile ilişkili sağ taraflı kardiyak hipertrofi ve dilatasyon ile tanımlanabilir. Son zamanlarda, şiddetli RHF'ye artmış atriyal inflamasyon, atriyal fibroz ve en yaygın kardiyak aritmi (CA) türü olan atriyal fibrilasyon (AF) riskinin eşlik ettiğini gösterdik. Son yıllarda yapılan çalışmalar, RV ve RA inflamasyonunun AF de dahil olmak üzere KA aritmogenezinde önemli bir rol oynadığını göstermiştir. Bununla birlikte, RHF'de CA ve AF gelişiminde inflamasyonun etkisi tam olarak tanımlanmamıştır.

Sağ taraflı miyokard inflamasyonu ve CA arasındaki ilişkiyi daha iyi anlamak için RHF'nin deneysel modellerine ihtiyaç vardır. Monokrotalin (MCT) ile indüklenen pulmoner hipertansiyonun (PH) sıçan modeli, RHF'yi provoke etmek için iyi bilinmektedir. Bununla birlikte, MCT ciddi pnömo-toksisiteyi ve pulmoner inflamasyonu tetikler. Bu nedenle, MCT'nin neden olduğu RHF, sonraki miyokard iltihabının kendi başına RHF'den mi yoksa yaralı akciğer tarafından salgılanan dolaşımdaki enflamatuar sinyallerden mi kaynaklandığını ayırt etmeye yardımcı olmaz.

Bu makalede, sağ kardiyak aritmogeneziyi provoke etmek için pulmoner arter gövde bantlamasını (PAB) içeren mekanik bir yöntem kullanıldı. PAB, pulmoner arter gövdesinin 3 hafta boyunca kalıcı bir dikişinin gerçekleştirilmesinden oluşur. Böyle bir yaklaşım, artan sağ taraflı basınç aşırı yüklenmesine neden olur. PAB sonrası D21'de, sütür hipertrofik, dilate ve iltihaplı RV ve RA ile sonuçlanır. PAB'ın neden olduğu RHF'ye ayrıca AF dahil olmak üzere ventriküler ve atriyal aritmilere karşı savunmasızlık eşlik eder.

Giriş

Sağ kalp yetmezliği (RHF), sağ ventrikül (RV) ve atriyal (RA) hipertrofi ve dilatasyon ile karakterizedir ve pulmoner arterlerin (PA) daralmasına bağlı kronik RV basıncının aşırı yüklenmesine yanıt olarak sağ taraflı kardiyak fonksiyon bozukluğuna yol ^açar1. Bu nedenle, PA'nın daralmasına neden olan koşullar, RHF ^1,2,3,4 riskinin artmasından sorumlu olabilir. Klinik veriler, PA hipertansiyonu (PAH) olan hastalarda RHF'nin hastaneye yatışların ana nedeni (%56) olduğunu ortaya ^koymuştur2. Klinik çalışmalar, tromboembolik pulmoner hipertansiyon (PH) ve idiyopatik PAH dahil olmak üzere PAH'ın nedeninden bağımsız olarak, hastaların sıklıkla RHF'den etkilendiğini ve supraventriküler taşiaritmiler ve atriyal fibrilasyon (AF) dahil olmak üzere kardiyak aritmiler geliştirmeye %20 daha duyarlı olduğunu ^{göstermiştir2,5,6}.

PAH ve RHF arasındaki ilişkiyi daha iyi anlamak için, tek bir doz monokrotalin (MCT) modeli de dahil olmak üzere hayvan çalışmaları, ciddi akciğer iltihabını ve RHF^7,8'i provoke etmek için kullanılmıştır. Son zamanlarda MCT'nin neden olduğu RHF'nin RA inflamasyonu ve AF⁹ ile ilişkili olduğunu gözlemledik. Bununla birlikte, MCT'nin neden olduğu pulmoner inflamasyonun ve dolaşımdaki sitokinlerin önemi nedeniyle, MCT'nin neden olduğu RA inflamasyonunun^sadece RHF'nin bir sonucu olup olmadığını açıklamak zordu. Bu nedenle, RA inflamatuar durumunu incelemek için yeni bir RHF kaynaklı kardiyak aritmi modeli gerekliydi.

PA gövde bantlama (PAB) deneysel modeli, obstrüktif PA hastalıklarını taklit etmek ve kalbin sağ tarafını etkileyen ilişkili patolojik kardiyak yeniden şekillenmeyi incelemek için çeşitli hayvan türlerinde kullanılmıştır¹⁰. PAB,^RV aşırı yüklenmesini taklit eden çeşitli çalışmalarda sağ RV disfonksiyonu ve başarısızlığını indüklemek için etkili bir yöntem olarak bildirilmiştir 10,11,12,13,14,15,16. Teknik olarak PAB, PA gövde çapının¹⁰ mekanik olarak küçültülmesine neden olan PA gövdesine kalıcı bir sütürün yerleştirilmesidir. PAB, RV^10'a artan bir aşırı basınç yükü oluşturur. İlk olarak, RV art yükündeki ani artışa telafi edici bir adaptasyon olarak, RV boşluğu genişler ve kronik RV hipertrofisine^{yol açar 10,13}. RV genişlemesi ve hipertrofi, sızdıran triküspit kapakları etkiler¹³. Daha spesifik olarak, yüksek RV art yükü ile birlikte RV'nin belirgin genişlemesi, RV ile RA^13,17 arasında bulunan triküspit kapak halkasını germe etkisine sahiptir. Kapağın tam olmayan tıkanması nedeniyle, sistol sırasında RV'den dışarı atılan kanın bir kısmı RA boşluğuna¹⁷ yönlendirilecektir. Triküspit kapakta sızıntı ekokardiyografi ile gözlenebilir ve triküspit yetersizliği^{olarak adlandırılır 17}. Daha sonra, RA uygun olmayan şekilde yüksek tansiyon alır ve bu da RA genişlemesinin artmasına ve hipertrofiye^{katkıda bulunur 13}. Kronik RV ve RA yeniden şekillenmesine, RV ve RA fibrozuna ve fonksiyon kaybına yol açan lokal miyokardiyal inflamatuar reaksiyonlar eşlik eder ^9,13. Kardiyak fibroz, ventriküler fibrilasyon ve AF^18,19 dahil olmak üzere kardiyak aritmilerin gelişiminde rol oynayan iletim bloğu ve yeniden giriş devrelerini provoke etmeye daha duyarlı ve daha az kasılmalı düşük voltajlı bölgelerin gelişimi ile karakterizedir.

Bu makalenin özgünlüğü, PAB'den sonraki 3 hafta içinde kardiyak aritmi indüklenebilirliğini provoke etmek ve incelemek için PAB'ın neden olduğu sağ taraflı kardiyak yeniden şekillenmenin standart bir yönteminin kullanılmasında yatmaktadır. Bu cerrahi yaklaşımın başlıca avantajları şunlardır: i) PA gövde çapının azaltılması üzerinde doğrudan kontrol ve ii) AF dahil kardiyak aritmileri incelemek için RHF'nin neden olduğu miyokard iltihabına odaklanmak için pulmoner inflamasyondan kaçınma.

Burada açıklanan yaklaşım, PAB'yi oluşturmak için hassas bir mikrocerrahi prosedürü, artmış RV son yükünün değerlendirilmesini, PAB'ın neden olduğu miyokardiyal yapısal ve fonksiyonel yeniden şekillenmeyi gözlemlemek için ekokardiyografiyi ve AF dahil olmak üzere kardiyak aritmilere karşı savunmasızlığı değerlendirmek için elektrofizyolojik çalışmayı içerir.

Protokol

Aşağıda açıklanan tüm prosedürler Montreal Kalp Enstitüsü etik komitesi tarafından onaylanmıştır (protokol numaraları: 2021-2938-2021-47-01 ve 2024-3412-2024-48-01) ve Kanada Hayvan Bakımı Konseyi (CCAC) yönergelerine sıkı sıkıya uyulmuştur. İşlemler için 6-8 haftalık erkek Wistar cinsi sıçanlar (225-275 g) kullanıldı. Tüm hayvanlar, su ve yiyeceğe ücretsiz erişim sağlayan Montreal Kalp Enstitüsü'nün hayvan bakım tesisine yerleştirildi.

1. Ameliyat öncesi hazırlık

1. Ameliyattan önce tüm cerrahi aletleri ve malzemeleri, 121 °C ile 134 °C arasındaki sıcaklıklarda, 15-30 psi'nin altında 30-40 dakika boyunca yüksek basınçlı doymuş buhardan oluşan bir otoklav kullanarak sterilize edin ve ardından 25 dakikalık bir kurutma döngüsü izleyin.
2. Ameliyat için gerekli tüm ilaç hacimlerini hazırlayın. Ameliyattan 30 dakika önce deri altına enjekte edilen ve ameliyattan 6 saat (buprenorfin) ve 24 saat sonra (buprenorfin ve ketoprofen) tekrarlanan buprenorfin (0.05 mg / kg) ve ketoprofen (5 mg / kg) içeren multimodal bir analjezik yaklaşım kullanın. Ek olarak, insizyon bölgesinde lokal bir analjezi yapın (lidokain 5 mg / mL).
3. PA çapını belirlemek için ameliyattan önce başlangıç transtorasik ekokardiyografi yapın (adım 6.1-6.13'teki transtorasik ekokardiyografi için ayrıntılı prosedüre bakın.) ve PAB sırasında PA çapında beklenen% 60'lık azalmayı sağlamak için kurşun olarak kullanılacak uygun ölçü iğnesini seçin.
   NOT: Bu yazıda, 225-275 g'lık erkek Wistar sıçanları kullanıldı ve PA çapında böyle bir %60'lık bir azalma sağlamak için 19 G'lik bir iğnenin kullanılması uygun oldu.
4. Sıçan kalbinin ciddi şekilde yeniden şekillenmesine neden olan optimal bir PA gövde daralması elde etmek için kurşun olarak kullanılacak 19 G'lik bir iğne (veya adım 1.3'te belirlenen uygun kalibre) hazırlayın (aşağıya bakınız: adım 4.18 ve 4.19). Bir forseps kullanarak 19 G'yi 90-110°'ye bükün (Şekil 1A).
   NOT: 19 G'nin bükülmesi, i) PA gövdesinin yakınında konumlandırmayı ve ii) prosedür sırasında ligasyonun uygulanmasını kolaylaştırır. 19 G, PA'nın çapını 1.0 mm'ye düşürmek için sütürün etrafına yerleştirileceği bir uç olarak kullanılır (225-275 g ağırlığındaki sıçanlar için %60 azalma), bu da 3 hafta içinde ciddi RV yeniden şekillenmesinden sorumlu önemli bir RV basınç aşırı yüklenmesine neden olur.

2. Anestezi indüksiyonu ve hayvan hazırlığı

NOT: Analizler 6-8 haftalık erkek Wistar sıçanları (225-275 g) üzerinde yapılmıştır. Hayvanın vücut ısısını 37 °C civarında tutmak için aşağıdaki prosedürlerin tüm adımlarında bir ısıtma yastığı kullanın. Vücut ısısını izlemek için rektal bir prob uygulayın.

1. Hayvanı sürekli solunan izofluran %3 ve %100 oksijen 2-3 L / dk ile uyuşturun.
2. Korneanın kurumasını önlemek için göz yağlama jeli uygulayın.
3. Ayak parmağını sıkıştırma refleksini kullanarak anestezi seviyesini doğrulayın.

3. Entübasyon

NOT: Entübasyon daha önce tarif edildiği gibi^{yapıldı 20}.

1. Hayvanı sırtüstü pozisyonda eğimli bir entübasyon istasyonuna aktarın. Boğazın daha iyi görüntülenmesini sağlamak için vücudu 45 ° C'de asılı bir pozisyonda tutmak için bir iplik halkası kullanarak fareyi üst kesici dişlerinden tutun.
2. Faringoepiglottik bölgeden geçmek için esnek bir ışık kaynağını boyun yüzeyine yönlendirin.
3. Dili pamuklu bir bez kullanarak uzatın ve dil bastırıcı olarak kavisli bir tartı spatulası ile üst çene üzerinde sabitleyin.
4. Soluk borusunu ve ses tellerini gözünüzde canlandırın.
5. Entübasyonu gerçekleştirmek için 16 G anjiyokateter kullanın. Kateteri trakeal tüp olarak kullanın ve introdüser olarak kullanmak için eğimli uçlu iğneyi köreltin.
6. İndükleyiciye (eğimli uçlu iğne) monte edilmiş endotrakeal tüpü (16 G anjiyokateter) trakeaya ilerletin ve yerleştirildikten sonra introdüseri çıkarın (Şekil 1B).
7. Normal bir solunum paterni (225 g ağırlığındaki sıçanlar için yaklaşık 80 nefes / dak ve 275 g ağırlığındaki sıçanlar için yaklaşık 70 nefes / dak) ve metal spatula yüzeyinde sis varlığını gözlemleyerek tüpün doğru konumunu onaylayın (veya küçük ayna) kanül göbeğinin flanşına yerleştirildiğinde.
8. Doğru şekilde entübe edildikten sonra, hayvanı homeotermik bir ısıtma yastığı üzerinden sırtüstü cerrahi istasyona hızla aktarın.
9. Ventilatörün tidal hacmini ve hızını farenin vücut ağırlığına göre ayarlayın. 225-275 g civarındaki sıçanlar, ventilatör ile 2.0-2.5 mL tidal hacim ve 70-80 nefes / dakika alır.
10. Mekanik ventilasyonu başlatmak için endotrakeal tüpü ventilatöre bağlayın. Vantilatörün çıkış ucunu bir su silindirine yerleştirin. Her solunumdan sonra dışarı çıkan hava kabarcıkları başarılı bir entübasyona işaret eder.
11. Sabit solunum sağlandıktan sonra, endotrakeal tüpü cerrahi bantla sabitleyin ve vücut ısısını izlemek için rektal probu kuyruk boyunca sabitleyin.

Şekil 1: PAB'ın mikrocerrahi prosedürünün hazırlanması için gerekli temel aletler. (A) PAB'den sonra PA gövdesinin 1 mm çapında bir çap elde etmek için kurşun olarak kullanılan modifiye edilmiş 19 G iğne. (B) Kullanılan endotrakeal aletler veya sıçanların başarılı entübasyonu. 1. Spatula, trakeayı açığa çıkarmak için anestezi uygulanmış sıçanlarda dil bastırıcı olarak kullanılır. 2. 16G kateter, kaleminin ucunu körelttikten sonra bir endotrakeal tüp görevi görür. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

4. PAB cerrahisi (Şekil 2)

NOT: Tüm prosedürler sıkı aseptik cerrahi tekniklerine göre yapılmalıdır.

1. Göğüs kafesinin sol tarafını bir kesme makinesi ve tüy dökücü krem kullanarak tıraş edin ve cildi %2 klorheksidin ve ardından %70 alkol peelingi (üç kez tekrarlayın) ile hazırlayın.
2. Solunumu etkilememek için uzuvları aşırı uzatmamaya dikkat ederek ön ayakları tıbbi bantla açık pozisyonda hareketsiz hale getirin.
3. Sağ arka uzuvu hafifçe aşağı doğru çekin ve kuyruk boyunca sabitleyin.
4. Sol arka uzuvu uzatın ve yapıştırın ve göğsün sol tarafını açığa çıkararak hafif bir sağ yanal pozisyon oluşturmak için hayvanın sağ tarafına sabitleyin.
5. Ameliyatın kalan kısmı için bu adımda steril eldiven kullanın.
6. Hayvanın üzerine steril bir örtü yerleştirin ve göğüs kafesinin sol tarafında, ksifoid sürecin yaklaşık 2 cm yukarısından başlayarak ve farenin sol ön ayağının tabanına çapraz olarak yönlendirilen 2-3 cm'lik bir cilt kesisi yapın.
7. Derinin altında, daha sonra göğüs kaslarını ayırın (pektoralis minör ve majör) ve yuvarlak uçlu makas kullanarak künt diseksiyonla kenara çekin. Altında bulunan göğüs kafesinin düzgün bir şekilde görüntülenmesini sağlamak için kasları tutmak için manyetik ekartörler kullanın.
8. Çıkış tüpünü (ventilatöre bağlı) su silindirinden çıkararak akciğerleri şişirin (bkz. adım 3.10). Çıkış borusunun sudan çıkarılması, akciğerlere giden basıncı düşürür ve bu da lobların şişirilmesine neden olur.
9. Kavisli diseksiyon forsepsleri ile sol taraf torakotomi yapın. 3^{. ve 4.} kaburgalar arasında bulunan kasın orta klaviküler hattında küçük bir delik açın.
10. Kavisli forsepsleri açıklığa sokun ve sol göğüs duvarını hafifçe kaldırmak ve kası keserken akciğerlere dokunmaktan kaçınmak için kasın sol iç duvarı boyunca iki kaburga arasında kaydırın.
11. Tanıtılan forsepsleri kılavuz olarak kullanın ve iris makası ile yaklaşık 1 cm'lik kaburgalara uzunlamasına bir kesi yapın. Sol göğüs duvarını yukarıda tutun ve doğrudan altındaki sol akciğer loblarına zarar vermemek için makası dikkatli bir şekilde hareket ettirin.
12. Yuvarlak uçlu makas kullanarak interkostal insizyonu hayvanın soluna 1-2 cm kadar genişletin.
13. Yarayı açık tutmak için ekartörleri kaburgaların altına yeniden yerleştirin.
14. Timusun alt kısmını ve akciğerin sol lobunun bir kısmını gözlemleyin.
15. Bu organların kapladığı önemli alan göz önüne alındığında, timusu ve akciğerleri bu seviyede bir kenara itin. Forseps ile künt diseksiyon kullanarak timus loblarını ayırın ve ıslak gazlı bez kullanarak akciğeri sol tarafta tutun. Ardından, kalbin üst kısmını, sol atriyumu (LA), pulmoner gövdeyi ve aort arkını ortaya çıkarın.
16. Aort ve pulmoner gövdenin hala bağlı olduğu kısmı bulmaya yardımcı olmak için, bu bölgedeki kalbi kaplayan ince perikard tabakasını, herhangi bir bağlı yağ dokusuyla birlikte dikkatlice künt bir şekilde inceleyin. Perikardı minimal olarak inceleyin ve plevral membrana dokunmaktan kaçının.
17. Kavisli forsepsleri, damarın diğer tarafına ulaşmak için LA eki ile pulmoner gövde arasındaki boşluğa, damarın görünür kısmının ortasına kapalı bir pozisyonda yerleştirin (Şekil 2A).
    DİKKAT: Damar yırtılması ve kanama riskini önlemek için kalbin aort köküne çok yakın çalışmaktan kaçının.
18. Forsepsin ucunu konjonktiv membrandan kraniyal olarak pulmoner gövdeye kadar görselleştirin. Ucun üzerinden incelemek için ikinci forsepsleri kullanın ve küçük bir açıklık oluşturmak için zarı dikkatlice delin. Akciğer gövdesinin altına yerleştirilen kavisli forsepsler daha sonra 5-0 İpek ipliği kapmak için hafifçe açılır. İpliği pulmoner gövdenin bir tarafından diğer tarafına getirmek için forsepsleri geri çekin (Şekil 2B, C).
19. Pulmoner gövdenin daralmasını gerçekleştirin. İlk olarak, artere yakın 5-0 İpek'in gevşek bir çift düğümünü uygulayın. 19 G iğneyi damar boyunca ve ipliğin altına yerleştirin. Bu ilk düğümü sıkın ve 19 G'yi çıkarmadan önce ikinci bir basit düğümle sabitleyin (Şekil 2D).
    DİKKAT: Akciğer gövdesinin tam tıkanıklık süresini en aza indirmek için hızlı ve dikkatli bir şekilde çalışın.
20. Son bir basit düğüm yapın ve kalan 5-0 İpek ipliği düğümden yaklaşık 0,5-1 cm uzakta kesin (Şekil 2D).
21. Timus loblarını yeniden konumlandırın ve göğüs ekartörlerini çıkarın.
22. Ventilatörün çıkışını 2 saniye boyunca sıkıştırarak akciğerleri yeniden şişirin.
23. Sentetik, emilebilir 5-0 dikiş ipliği ile kanaviçe deseni yaparak göğüs kafesini kapatın.
24. Yara bölgesine birkaç damla% 0.9 salin uygulayın ve hava kabarcıklarını gidermek ve torasik negatif basıncı yeniden oluşturmak için göğüs duvarının her iki tarafını sıkıştırın.
25. Göğüs kaslarını yeniden konumlandırın ve kalan salini steril bir gazlı bezle silin.
26. Yaranın yüzeyine ve çevresine bir lidokain sıçrama bloğu uygulamak için bir şırınga kullanın.
27. Sentetik, emilebilir 5-0 sütür ipliği kullanarak iğne ile sürekli subkutiküler desende cildi kapatın.
    NOT: Sahte sıçanlar, 4.18 ve 4.19 adımları olmadan aynı prosedürü alır.

Şekil 2: PAB prosedürü ve metal klipslere karşı 5.0 İpek sütürün validasyonu. (A) PA gövdesinin açığa çıkmasını ve izolasyonunu, (B) sütürün (5.0 ipek) PA gövdesi etrafındaki konumunu, (C) PA'nın (PAB) bağlanmasını (kurşun olarak 19 G'lik bir iğne kullanarak) gösteren PA gövdesinin adım adım izolasyonu ve ligasyonunun fotoğrafı; (D) PAB'yi takiben kalp hareketinin ve PA-kök ve RV aşırı yükünün doğrulanması; (E) ipek sütür ile yapılan PAB'ın metal klips ile karşılaştırılması; ve (F) PA gövdesi etrafında 1 mm'lik daha tekrarlanabilir bir çap oluşturmak için PAB için ipek sütür seçiminin doğrulanması. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

5. Ameliyat sonrası iyileşme

1. Sıçanı sadece oksijen akışı ile mekanik ventilasyon altında tutarken izofluranı çıkarın. Nefes almayı kolaylaştırmak için fareyi sağ tarafına veya ventraline çevirin.
2. Sıvı geri kazanımını desteklemek için dorsal boyun bölgesine deri altına %0.9'luk bir hacimce salin enjekte edin (10 mL / kg / saat anestezi olarak hesaplanmıştır).
3. Otonom solunum onaylandıktan sonra, endotrakeal tüpü düzgün bir şekilde çıkarın.
4. Sıçanın kendi kendine hareket etmeye başladığını gözlemleyin ve hayvanı ısıtma yastığından kurtarma için yeni bir steril kafese aktarın. Su ve ıslak mama ad libitum sağlayın.
5. Ameliyat sonrası dönemde (4-6 saat), vücut ısısının korunmasına yardımcı olmak ve hayvanı yakından izlemek için kafesi bir ısıtma yastığının (kafesin yarısı) üzerine yerleştirin.
6. Herhangi bir ağrı, nefes alma güçlüğü veya anormal davranış belirtisini derhal yönetin.
7. Ameliyat sonrası bakımda, ameliyattan 6 saat sonra, ikinci bir doz 0.05 mg / kg buprenorfin enjekte edin. Ertesi gün, ameliyattan 24 saat sonra, üçüncü doz 0.05 mg / kg buprenorfin ve ikinci doz 5 mg / kg ketoprofen enjekte edin.
8. Sıçanları sağlıkları tamamen iyileşene kadar izleyin.

6. Transtorasik ekokardiyografi

NOT: Bu makale, sıçanlara transtorasik ekokardiyografi uygulandığında, ameliyat sonrası 21. günde elde edilen verileri göstermektedir. Bununla birlikte, araştırma hedeflerine ve çalışma tasarımının gereksinimlerine bağlı olarak, araştırmacılar PAB öncesi ve sonrası transtorasik ekokardiyografi için diğer zaman noktalarını tanımlayabilirler.

1. PA çapını belirlemek ve PAB sırasında PA çapında beklenen% 60 azalmayı sağlamak için kurşun olarak kullanılan uygun gauge iğneyi seçmek için ameliyattan önce bir başlangıç transtorasik ekokardiyografi yapın.
   NOT: Bu çalışmada, 225-275 g'lık erkek Wistar sıçanları kullanıldı ve PA çapında böyle bir %60'lık bir azalma sağlamak için 19 G'lık bir iğnenin kullanılması uygun bulundu.
2. Sıçanları sürekli inhale edilen izofluran (% 3 ve 2 L / dak O₂) ile tartın ve uyuşturun.
3. 12S sektör/çok elemanlı prob (4.5-11.5 MHz) ve bir görüntü elde etme sistemi kullanarak her hayvanda transtorasik ekokardiyografi yapın.
4. 12S probunu aort kapak seviyesinde konumlandırarak iki boyutlu (2D) parasternal kısa eksen görünümünde renk eşlemeyi kullanın. Pulmoner gövdedeki pulmoner arter bantlama (PAB) alanından geçen kan akış modelini görselleştirmek için yankı makinesindeki Renkli Doppler düğmesine tıklayın.
5. Tepe hızı (cm/s) ve ortalama basınç gradyanı (mmHg) dahil olmak üzere PAB alanından geçen kan akışının özelliklerini kaydetmek için 2B parasternal kısa eksen görünümünde renk haritalama tarafından yönlendirilen PAB'yi geçerek sürekli dalga Doppler (CW) gerçekleştirin. Doppler eğrilerini elde etmek için, numune hacmini pulmoner arter bantlama seviyesinde ayarlayın.
6. Ameliyattan sonra RA ve RV'nin genişlemesini göstermek için 12S probunu kalbin tepe noktasına yerleştirerek 2D apikal 4 odacıklı bir görünüm uygulayın ve milimetre (mm) cinsinden ifade edilen uç kardiyak sistoldeki (RAD'ler) RA yatay boyutunu belirleyin.
7. Yankı makinesinde sine-döngüler alarak PAB'a bağlı triküspit yetersizliğini ortaya çıkarmak için 2D apikal 4 odacıklı görünümde renk haritalaması uygulayın.
8. Mm cinsinden ifade edilen triküspit annulus düzlemi sistolik gezisini (TAPSE) incelemek için triküspit annulus ve RV lateral duvarının birleşimini geçerek apikal 4 odacıklı görünümde M-Mod ekokardiyografi gerçekleştirin.
9. RV sistolik performansını değerlendirmek için saniyede santimetre (cm/s) olarak ifade edilen RV yan duvar sistolik kasılma (Sr) ölçümü için triküspit anulus ve RV yan duvarının birleşme seviyesinde apikal 4 odacıklı görünümde Doku Doppler Görüntülemeyi (TDI) kullanın.
10. Erken doldurma (E) dalgasındaki tepe hızı, atriyal doldurma (A) dalgası ve TTF'deki E / A oranı dahil olmak üzere RV diyastolik özelliklerini incelemek için apikal 4 odacıklı görünümde darbeli dalga Doppler kullanarak diyastolik trans-triküspit akışını (TTF) kaydedin.
11. Kardiyal diyastol sonundaki RV çıkış yolunu (milimetre cinsinden ifade edilen RVOT) ve kardiyak sistolün sonundaki sol atriyum boyutunu (milimetre cinsinden ifade edilen LAD'ler) ölçmek için aort kapak seviyesinde parasternal uzun eksen görünümünde M-Mode ekokardiyografi yapın.
12. Sistol sonu ve diyastolde (LVD'ler ve LVDd) LV boyutlarını değerlendirmek için papiller kaslar seviyesinde parasternal kısa eksen görünümünde 2D M-Mod ekokardiyografi gerçekleştirin; ve diyastol sonunda (LVAWd) LV ön duvar kalınlığı, tümü milimetre cinsinden ifade edilir.
13. LV fraksiyonel kısalmasını (LVFS, yüzde olarak ifade edilir) ve LV ejeksiyon fraksiyonunu (LVEF, yüzde olarak ifade edilir) belirlemek için kısa eksenli parasternal görünümde 2D M modunu gerçekleştirin.

7. Elektrofizyolojik çalışma (Şekil 3)

1. İn vivo transözofageal elektrofizyolojik çalışma (EPS) için in vivo ekokardiyografiden sonra sıçanları anestezi altında tutun.
2. EKG elektrotlarını sıçanların derisinin altına yerleştirin (1 sol ön ayağın yakınına, 1'i sağ arka uzuvun yanına ve 1'i sol arka uzuvun yakınına).
3. Kutuplar arası mesafesi 5 mm olan 4F-quadripolar kateteri yemek borusuna nazikçe yerleştirin (Şekil 3A).
4. Yüzey EKG'sinde atriyal kasılmaları temsil eden P dalgasının, transözofageal kateterin EKG'si ile elde edilen P dalgası ile ne zaman eşleştiğini kesin olarak belirleyerek RA'ya yakın transözofageal kateter pozisyonunu ayarlayın (Şekil 3A, B).
5. Her hayvan için stimülasyon eşiğini belirleyin. Bu eşik, stimülatörün kalp atış hızını doğrudan etkilediği minimum voltajdır.
6. Her biri 50 Hz'de 3 saniye süren ve ardından 2 saniye dinlenme (1 dakika/set) izleyen 3 set 12 stimülasyon patlamasından oluşan bir protokolü izleyerek eşik voltajının 4 katına eşdeğer bir voltaj patlaması uygulayarak AF güvenlik açığını değerlendirin. Her set arasında, sıçanların 1 dakikalık bir dinlenme periyodu^{vardı 9,13,21}.
7. Her patlamadan sonra, AF veya atriyal çarpıntı dahil olmak üzere kardiyak taşiaritmilerin oluşumunu tanımlayın ve ölçün.
   NOT: AF, düzensiz ve ultra hızlı atriyal atımlar (>800 bpm) olarak tanımlanır. Atriyal flutter, P dalgasının yokluğu veya düzenli olarak ardışık R-R aralıkları arasında düzenli bir çoklu P dalgası paterninin varlığı ile ilişkili düzenli ancak hızlı bir atriyal ritim olarak tanımlanır. Sadece 1 saniyeden uzun süren aritmik ataklar dikkate alınır.
8. İki ardışık stimülasyon arasındaki dinlenme süresi içinde sinüs ritmi kendi kendine düzelmezse, bir sonraki stimülasyon setini durdurarak devam eden AF veya atriyal çarpıntı ataklarını kesintiye uğratmaktan kaçının.

Şekil 3: İn vivo elektrofizyolojik çalışma için istirahatte kalp atışlarının ve transözofageal kateterin uygun pozisyonunun gösterimi. (A) P dalgasını, PR aralığını, QRS kompleksini, QT aralığını ve R-R aralığını gösteren istirahatte iki ardışık kalp atışının temsili EKG'si. (B) Atriyal EKG'yi uyarmak ve elde etmek için bir kuadripli kateterin (3) sokulduğu kalbin (1) ve yemek borusunun (2) uzunlamasına bir bölümünün şeması. (C) Yüzey EKG'sinden (üst izler) gelen atriyal sinyal (kırmızı çizgi) kateter EKG'sinin atriyal sinyali (alt izler) ile çakıştığında transözofageal kateterin tercih edilen pozisyonunu gösteren temsili EKG sinyalleri. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

8. EKG analizi

NOT: EKG kayıtları ve stimülasyonları bir EKG edinme yazılımı kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Analizler bir EKG analiz yazılımı kullanılarak gerçekleştirildi (Şekil 3A).

1. Milisaniye (ms) cinsinden ifade edilen atriyal kasılmaya karşılık gelen P dalgası süresini ölçün.
2. Atriyoventriküler (AV) düğümü boyunca elektriksel iletimin süresine karşılık gelen PR aralığını (milisaniye cinsinden ifade edilir) belirleyin.
3. Ventriküler depolarizasyona karşılık gelen QRS kompleksinin süresini (milisaniye cinsinden ifade edilir) bildirin.
4. Ventriküler depolarizasyon ve repolarizasyonun toplam süresini yansıtan QT aralığı (milisaniye cinsinden ifade edilir) değerlendirildi.
5. Ardışık iki kalp atışı arasındaki süreyi gösteren ve kalp atış hızını belirleyen RR aralığını (milisaniye cinsinden ifade edilir) ölçün.

9. Histolojik analizler

1. PAB sonrası 21. günde izofluran anestezisi altında (% 5, 2 L / dak O₂) sıçanları kan durumuna geçirerek ötenazi yapın.
2. RHF ve kardiyak aritmilerle ilişkili olup olmadığını analiz etmek için RA ve LA'yı izole edin.
3. RHF ve kardiyak aritmilerle ilişkili olup olmadığını değerlendirmek için yeni eksize edilmiş kalplerin apeksten 5 mm uzakta enine bir kesitini gerçekleştirin.
4. Miyokardiyal örnekleri formalin içinde sabitleyin ve PAB sonrası D21'de ventriküler duvar kalınlığını ve dilatasyonu ve atriyal fibrozu ölçmek için histolojik slaytları Masson'un trikrom solüsyonu²² ile boyayın.

10. İstatistiksel analizler

1. Shapiro-Wilk testi ile dağılımların normalliğini değerlendirin. Normal dağılım gösteren verileri Student t-testini kullanarak karşılaştırın.
2. Veriler parametrik dağılım göstermiyorsa, bir Mann-Whitney testi gerçekleştirin. Fisher'ın kesin testini kullanarak AF indüklenebilirliği gibi kategorik değişkenleri analiz edin.
3. Sonuçları ortalama ± standart hata olarak ortalamaya (S.E.M.) ifade edin. 0.05 < iki kuyruklu P değerlerinde istatistiksel olarak anlamlı farklılıkları düşünün.

Sonuçlar

Ameliyat sırasında PA gövdesinin uygun ligasyonunun görsel olarak doğrulanması
PAB prosedürü sırasında, sütürün iyi konumlandırılmasının bir göstergesi, kan basıncının hemen artması ve RV'nin ve PA gövdesinin kökünün RV ile birleşim noktasında hızlı bir şekilde genişlemesidir. 3 hafta boyunca sürekli ve kalıcı bir aşırı basınç yükü sağlamak için dikiş hareket etmemelidir. Bu çalışmada, 5-0 İpek kullanımının metal bir...

Tartışmalar

PAB'ın başarılı performansı bu protokolün en önemli parçasıdır. Aort ve PA gövdesini doğru bir şekilde ayırt etmek önemlidir. İşlem sırasında yırtılma, kanama ve ölümü önlemek için PA'nın izolasyonu titizlikle yapılmalıdır. Sütürün 19G derivasyonunun etrafına uygulanması hızlı bir şekilde yapılmalı ve ardından kurşunun varlığı nedeniyle PA'nın çok uzun süre 'tamamen tıkanmasını' önlemek için kurşunun hemen çıkarılması gerekir.

...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.9% Sodium Chlorine Injection USB (100 ml)	Baxter	JB1302P	Solution used for drugs (analgesic and anti-inflammatory) dilution and for preparing saline water syringes dedicated to rehydrating the animal after the surgery
19 G x 1 1/2 PrecisionGlide Needle	BD	305187	Needle modified (bent and blunted) to be used as a spacer during for the partial constriction of the pulmonary trunk
2" x 2" Non Woven Non-Sterile Ritmed Gauze Sponge, 4-Ply	AMD-Ritmed	A2101-CH	Gauze sponges used to absorb blood from the wound or to gently push organs (ex: thymus) aside.
4" x 4" Non Woven Non-Sterile Ritmed Gauze Sponge, 4-Ply (x200)	AMD-Ritmed	A2100-CH	Gauze sponges used to absorb blood from the wound or to gently push organs (ex: thymus) aside.
5-0 Vicryl Violet Suture RB-1 1/2 Circle Needle 17mm 27"	Ethicon	J303H	Synthetic absorbable sterile surgical suture with a taperpoint needle used for muscle and skin wounds closure.
Anafen (100 mg/mL)	Merial Canada, Inc.	1938126	Diluted injectable solution of ketoprofen administered as a nonsteroidal anti-inflammatory, analgesic and antipyretic drug.
AutoClip System	FST	12020-00	Can be used to close the skin wound. Includes a clip applier, wound clips (9 mm) and a clip remover.
Dumont #5/45 Forceps	FST	11251-35	Dumoxel forceps with tips angled at 45°. Used to tighten the knots around the spacer placed on the pulmonary trunk.
Fine Scissors - Sharp	FST	14060-10	Stainless steel iris scissors dedicated to intercostal muscles incision and suture cutting.
Forane (Isoflurane) 100 mL	Baxter Canada	BAXCA2L9100	Inhalation anesthetic used for rodents during their PAB surgery.
IV Catheter 16 G x 1.77 " (Straight)	BD Insyte	381257	Catheter used as an endotracheal tube with its metal stylet blunted.
Light  LED 130 F - DrMach	Eickemeyer	M130300	LED wall mounted light.
Magnetic Fixator Retraction System: Base plate	FST	18200-50	Metal plate on which the associated fixtures are installed. It is placed around the heating plate.
Magnetic Fixator Retraction System: Elastomer (2 m Roll)	FST	18200-07	Used to attach the retractors to the fixators.
Magnetic Fixator Retraction System: Fixators	FST	18200-02	Movable anchors that can be placed on the base plate.
Magnetic Fixator Retraction System: Retractors	FST	18200-11	Retractors allowing to maintain the surgical wound with the desired opening
Metzenbaum Scissors (Curved)	FST	14017-14	Stainless steel blunt scissors used for blunt dissection of the skin and muscles.
Micro-Adson Forceps	FST	11018-12	Stainless steel serrated forceps used to grasp skin and other tissues.
Oster Golden A5 2-Speed Clipper	Oster Professional	34264416949	Pet grooming clipper used to prepare the surgical field. Since it's meant to be used with large animals, the user needs to be careful with rats.
Rodent heating plate or warming system	Custom made	N/A	Plate connected to a unit equipped with a LED screen displaying the temperature detected by the rectal probe as well as the target temperature.
Rodent Ventilator Model 683	Harvard Apparatus	74240-2	Mechanical ventilator used for small laboratory animals (max 5 kg).
Semken Forceps with Serrations (Curved)	FST	11009-13	Stainless steel forceps used for tissue dissection.
Semken Forceps with Serrations (Straight)	FST	11008-13	Stainless steel forceps used for tissue dissection.
Silky Fresh Hair removal Cream	Veet	62200825036	Hair removal product used to prepare the surgical site after shaving.
Soluprep	3M	103.26	Bottled antiseptic solution tinted with 2% chlorhexidine and 70 % alcohol 225 mL.
Stainless steel spatula 195 mm	Heathrow Scientific	HS15907	Spatula used as a tongue depressor during rat intubation.
Stereomicroscope System SZ61TR	Olympus	88-126	Microscope equipped with binoculars and a built-in camera allowing for video filming.
Sterile Sodium Chloride 0.9% Irrigation Bottle (60 mL)	Saline H2O	25-6048SA-L	Solution used to keep the wound moist throughout the surgery.
Surgical Scissors - Sharp-Blunt (Straight)	FST	14001-12	Stainless steel scissors used to make the initial skin incision.
Suture 5-0 Silk No Needle	Henry Schein	102-6344	Silk thread used to do the constriction of the pulmonary trunk
Systane Ointment	Alcon	2444062	Eyes lubricant providing a temporary relief of burning and irritation caused by the dryness of the eyes during surgery.
SZ2-STU2 stereomicroscope stand	Olympus	N1198900	The arm attached to the base provides a great freedom of movement to the microscope head.
Tissue forceps - 1X2 Teeth	FST	11021-15	Stainless steel forceps allowing to grasp, hold and manipulate tissues (skin and muscles).
Transpore Surgical Tape	3M	1527-1	Medical tape used to immobilized the rats' forelimbs and hindlimbs.
Vetbond Tissue Adhesive (3 mL)	3M	1469SB	Surgical glue that can be applied in small amounts on the skin It can be used as a complement to subcutaneous sutures.
Vetergesic Multidose (0.3 mg/mL) 10 mL	Ceva Canada	2342510	Diluted injectable solution of buprenorphine administered as an analgesic drug.
Veterinary anesthesia evaporator Tec 4	Dispomed	34001 Iso	Enables vaporization of isoflurane and concentration at 0–5%.