İn Vivo Yaprak Aşılaması: Kök Pamukçuk Hastalığının Kavak Yetiştiriciliğinde Hibrit Klonların Hastalık Direncini Değerlendirmek İçin Alternatif Bir Yöntem

Özet

Bir in vivo yaprak aşılama yöntemi kullanarak kavağın kök pamukçuk patojenlerine karşı direncini değerlendirmek için adım adım bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem özellikle Çin'deki kavak damızlık döllerde Cytospora chrysosperma ve Botryosphaeria dothidea pamukçuk hastalığı direncinin büyük ölçekli değerlendirmesi için uygundur.

Özet

Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr.) ve Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. Çin'deki kavak plantasyonlarında bulunan ve bazen tüm kavak fidelerini yok edebilen veya olgun kavak ormanlarına ciddi şekilde zarar verebilen iki büyük orman hastalığıdır. Hibrit ıslah, ağaç hastalıklarını kontrol etmenin ve yönetmenin en doğrudan ve etkili yöntemidir. Bununla birlikte, in vitro kök inokülasyonuna dayalı olarak hastalık direncinin değerlendirilmesi veya hastalığa dirençli klonların seçilmesi verimsiz, zaman alıcı ve pahalıdır ve kavak sapı pamukçuk hastalığının melez üremesinin gelişimini sınırlar. Bu çalışmada, in vivo yaprak aşılaması yoluyla kök pamukçuk patojenlerine karşı hastalık direncini değerlendirmek için alternatif bir yöntem önerdik. Bu yöntemde kullanılan test malzemeleri, 1 yaşındaki kavak fidanları üzerinde olabileceği gibi, serada veya tarlada bulunan çok yıllık kavakların tek yıllık dalları üzerinde de olabilir. Bu alternatif yöntemin kritik adımı, aşılayıcı yaprakların seçimidir: 5-7^{. yeni} olgunlaşmış yapraklar en uygun olanı olabilir. Yaprak aşılama yönteminin ikinci kritik adımı, iğne delikleri yoluyla bitki yapraklarında yaralar açmak ve hastalık şiddetini ölçmek için yeterli lezyonları sağlamaktır. Kavak ıslahının erken aşamasında üretilen yeterli sayıda yaprak için, bu in vivo yaprak aşılaması, hastalığa dirençli kavak klonlarının pamukçuk patojenlerini köklendirmek için hızlı, doğru ve büyük ölçekli taramasına katkıda bulunur. Ayrıca, bu yaprak aşılama yöntemi, kök pamukçuk hastalığı patojeni C. chrysosperma, B. dothidea veya diğer kavak sapı pamukçuk patojenlerinin patotiplerinin taranması için de etkili bir yöntem olarak hizmet edecektir.

Giriş

Esas olarak iki nekrotrofik patojenin neden olduğu kavak sapı pamukçuk hastalıkları, Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr. ve Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. Çin'in Kuzeydoğu, Kuzey ve Kuzeybatı (Üç Kuzey) bölgelerindeki kavak tarlalarının gelişimini ve hayatta kalmasını ciddi şekilde tehdit ediyor. Hibrit ıslah, ağaç hastalıklarını kontrol etmek ve yönetmek için en doğrudan ve verimli yöntemdir; Bununla birlikte, yüksek verimli, hızlı büyüyen veya diğer kavak melezi klonları için ıslahtaki ilerleme ile karşılaştırıldığında, kavak pamukçuk hastalığı için direnç ıslahı üzerine araştırmalar azdır. Hastalığa di....

Protokol

1. Aft patojeni için mantar kültürü

1. Mantar suşları için patates dekstroz agar (PDA; patates ekstraksiyonu 6.0 g, dekstroz 20.0 g, agar 20.0 g) kültür ortamını hazırlayın; Yukarıdaki malzemeleri 1000 mL'ye kadar suda çözün, ortamı 100 ° C'de 10 dakika boyunca tamamen çözün.
2. PDA ortamını 25 mL'lik tüplere dökün (her biri 15.0 mL içerir); Tüm tüpleri 121.1 °C'de 30 dakika sterilize edin. Ortamı kültür plakalarına (9.0 cm çapında) dökün ve plakaları oda sıcaklığında (RT) soğutun.
3. PDA ortamında 28 ° C'de 7 gün boyunca kültürlenen mantar patojeninin miselyumunu ~ 0,5 cm kare küpler halinde kesi....

Tartışmalar

Bu protokol, kavak kanserine dirençli patojenler için hızlı ve etkili bir aşılama yöntemi sağlar ve kavak kanserine dirençli patojenlerin hibrit ıslahı ve kök pamukçuk patojenlerinin patojenite taraması gibi büyük ölçekli hastalık direnci taraması gerektiren araştırma alanları için uygundur.

Yöntemin ilk kilit noktası, olgunlaşmış gövde/dallar yerine yeni olgunlaşmış yaprak aşılaması ile hastalık direncinin değerlendirilm.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aluminum foil	Biosharp	BS-QT-027B
C. chrysosperma isolate	China Forestry Culture Collection Center	CFCC86775	Separation and preservation by our laboratory
Cytospora chrysosperma	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry	NCBI accession number: MK994101 for rRNA-ITS and MN025273 for EF1α gene   CGMCC number:40575	Separation and preservation by our laboratory
Epson Perfection V370 Photo	Epson	V370	Scanner; Scan the leaves into image
PDA (Potato Dextrose Agar)	Solarbio	P8931	Provide nutrition for fungal growth
PE plastic film			To fix fungi on the leaves
Populus alba var. Pyramidalis	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry		Cultivated by our laboratory
SPSS	IBM		Data analysis software
Thermostatic incubator	Shanghai Kuntian Laboratory Instrument Co., Ltd	KTD-6000	Provide an environment for fungal growth
Tough TG-6 camera	OLYMPUS		To take photos of diseased leaves