Site Özel Recombinase (SSR) Teknoloji İlkeleri

Özet

Siteye özgü recombinase (SSR) teknolojisi ve Cre / lox sistemi gelişi, moleküler biyoloji alanındaki birçok gelişmeler açmıştır ve transgenik hayvanların gen fonksiyonunu değerlendirmek için değerli bir araç olarak kendini kanıtlamıştır. Bu röportaj, halka kapanması recombinase (Cre) ve bu enzim kullanımı geleneksel vuruş stratejileri üzerinde önemli avantajlara sahiptir koşullu mutagenez, gelişmesine yol açmıştır sahaya özgü rekombinasyon mekanizması tartışıyor.

Özet

Site özel recombinase (SSR) teknolojisi, gen yapısı manipülasyon gen fonksiyonu keşfetmek için izin verir ve moleküler biyoloji ayrılmaz bir aracı haline gelmiştir. Site özel recombinases farklı DNA hedef dizileri bağlayan proteinlerdir. Cre / lox sistemi ilk kez 1980'li yıllarda bakteriyofajlar olarak tarif edilmiştir. Cre recombinase iki loxP (X-over P1 lokus) siteler arasında siteye özgü rekombinasyon DNA katalize Tip I topoizomeraz. Cre / lox sistemi, herhangi bir kofaktör gerektirmez. LoxP dizileri surround rekombinasyon ve yeniden düzenlenmesi yer alır yönlü bir çekirdek dizisi Cre recombinases için farklı bağlanma yerleri içerir. Hücreleri loxP siteleri içeren ve Cre recombinase ifade, bir rekombinasyon olayı oluşur. Çift iplikli DNA, Cre recombinase tarafından iki loxP sitelerde kesilmiş, yeniden düzenlenmiş ve ("makas ve tutkal") bağlandı. Rekombinasyon olayı Ürünler asimetrik dizilerinin göreli yönü bağlıdır.

SSR teknolojisi, gen fonksiyonu keşfetmek için bir araç olarak sık sık kullanılır. Burada ilgi gen Cre hedef siteleri loxP ("floxed") ile çevrili. Hayvanlar daha sonra özel bir doku organizatörü kontrol altında Cre recombinase ifade hayvanlarla geçti. Cre recombinase ifade dokularda hedef dizileri bağlanır ve floxed gen maktu vergileri. Kontrollü gen delesyonu ve farklı zaman noktalarında özel dokularda gen fonksiyon soruşturma sağlar. SSR teknolojisi --- mutagenez koşullu istihdam gen fonksiyon Analizi - gen delesyonu sık sık ölümcül geleneksel knock-çıkışları üzerinde önemli avantajları vardır.