Başlamak için, lipofussin yüklü RPE kültürleri ile sabit transkuyu alın. Kültürleri PBS ile beş kez yıkadıktan sonra, apikal odada az miktarda PBS bırakın. Transkuyu diseksiyon mikroskobunun altına baş aşağı yerleştirin.
Bir tıraş bıçağı kullanarak, membran ve transvelin birleşme noktasında kesme kuvvetini uygulayarak yarı gözenekli membranı transwellden kesin. Transwell membran kesildikten sonra, forseps kullanarak bir mikroskop slaydına yerleştirin. Hücrelere dokunmaktan kaçınırken fazla PBS'yi bir görev silme işlemiyle silin.
Montaj ortamı ve ardından bir kapak kayması ekleyin. Transwellin hangi tarafının sağ tarafı yukarı doğru olduğunu takip ettiğinizden emin olun. Daha sonra, yaklaşık 488 nanometrelik pik uyarım ve 500 ila 530 nanometrede emisyon tespiti ile bir florofor kullanarak ilgilenilen antijeni tespit edin.
Otofloresan algılama için 405 nanometre uyarma ve 585 ila 635 nanometre emisyon ile ayrı bir kanal kurun. OxOS tarafından indüklenen otofloresan granüller, beş beslemeye kıyasla 20 beslemeden sonra daha fazla birikim gösterdi. Oransal görüntüleme, Alexa 488 ile etiketlenmiş LC3'ten UAM otofloresansının deşifre edilmesine yardımcı oldu.
Kırmızı kanal sadece sindirilemeyen otofloresan materyal içerir ve LC3 sinyalini yeşil kanaldan ayırmaya yardımcı olur.
