Ötanize farenin enüklee göz küresini sabitledikten sonra, bir cam slayda aktarın ve diseksiyon mikroskobunun altına yerleştirin. Forseps kullanarak, göz küresi hareketini önlemek için korneanın kenar boşluğunu sıkıştırın. Diseksiyon makası ile, korneanın etrafını kornea skleral limbusu boyunca yaklaşık bir milimetre derinlikte kesin ve ardından lensi ve vitreus gövdesini çıkarın.
Optik diski merkezde tutarak, retinayı dört kadran boyunca radyal olarak kesin ve retina yarıçapının yaklaşık 2 / 3'üne ulaşın. Skleral kenarlardan birini dişli forseps kullanarak kelepçeleyin. Sklera kenarını dişsiz forsepslerle tutun ve dişli forsepslerden sklera tabanına doğru hareket edin.
Retinayı dikkatlice soyun. Bir pipet kullanarak retinayı 200 mikrolitre PBS ile ıslatın. Emici kağıt kullanarak fazla PBS'yi çıkarın ve gerekirse retinayı küçük kıllı bir fırçayla düzleştirin.
Tamamen kaplanana kadar retinanın iç yüzeyine yavaşça damla damla soğuk metanol ekleyin. Retina beyaza döndüğünde ve artan bir dayanıklılık geliştirdiğinde, retinayı nazikçe düzleştirin ve artık pigment zarları ve vitreus gövdesi gibi safsızlıkları küçük kıllı bir fırça ile giderin. Retinayı ters çevirdikten sonra, daha önce gösterildiği gibi metanol ile tedavi edin ve 24 kuyucuklu bir plakaya aktarın, Metanole batırın ve anında immün boyama için bir ila iki saat boyunca 20 santigrat derecede saklayın.
Daha sonra metanolü plakadan çıkardıktan sonra retinayı PBS ile durulayın. Metanol tedavisinden önce ve sonra retinaların retinol ganglion hücreleri, 12 aylık metanol korumasının RGC immün boyamasını etkilemediğini gösteren konfokal mikroskopi kullanılarak görselleştirildi.
