Stria vascularis'i fareden diseke ederek immün boyamaya hazırlanın ve dokuyu 1X PBS'de 200 mikrolitre% 4 paraformaldehit içeren 24 delikli bir plakaya ekleyin. Dokuyu oda sıcaklığında 20 dakika boyunca inkübe edin. Düşük RPM'de bir yörüngesel çalkalayıcıda iki kısa 1X PBS yıkama gerçekleştirin.
PBS'yi çıkarın, ardından 300 mikrolitre PBST çözeltisinde oda sıcaklığında en az bir saat boyunca geçirgenlik ve blokaj yapın. Daha sonra, dokuyu bir gecede dört santigrat derecede birincil antikorla boyayın. Daha sonra ikincil bir antikor ekleyin ve düşük RPM'de bir orbital çalkalayıcı üzerinde oda sıcaklığında iki saat boyunca inkübe edin.
Floresan etiketli ikincil antikoru ışıktan korumak için plakayı örtün. Daha sonra, 25 mm eksen boyunca, 18 x 18 milimetrelik cam kapak kaymasından sadece daha küçük iki küçük yapıştırıcı çizgisi yerleştirerek daha büyük bir mikro slayt hazırlayın. Tutkal çizgileri arasına bir damla montaj reaktifi yerleştirin.
55 numaralı forseps kullanarak, SV'nin bir ucunda mümkün olduğunca az doku toplayın ve PBS'den montaj reaktifine aktarın. Kapak kaymasının bir ucunu, bir yapıştırıcı çizgisinin yerleştirildiği slayta yerleştirin. Ardından, hava kabarcıkları oluşturmamak için kapak kayışını yavaşça serbest bırakın.
Montajın her köşesine bir damla şeffaf oje sürerek montajı kapatın. Numuneyi cam kapak kayması üzerinde, görselleştirme alanından uzakta etiketleyin. SV dokusunu diseksiyon mikroskobu altında görselleştirerek düz bir şekilde yattığından ve herhangi bir hava kabarcığının yakınında olmadığından emin olun.
SV dokusu doğru yönlendirilmemişse, hava kabarcıklarını dışarı itmeye çalışın veya daha küçük cam kapak kaymasını dikkatlice çıkarın ve SV'yi yeniden konumlandırın. P30 fareden bütün bir SV montajı hazırlandı ve konfokal görüntüleme yapıldı. Ara hücrelerde ZsGreen ekspresyonu gözlendi, GSIB4 etiketli endotel hücreleri ve DAPI çekirdekleri etiketledi.
