Steril PBS'de Anofel sivrisineklerinin pupalarından en az 20 testis çıkararak başlayın. Testisleri taze bir PBS damlası içeren temiz bir mikroskop lamına aktarın. P1000 boarded filtreli uçlar veya bir diseksiyon iğnesinin ucunu kullanarak, testisleri PBST'de% 3.7 formaldehit içeren bir embriyo kabına aktarın.
Oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin. Daha sonra, testisleri PBST'de oda sıcaklığında beş dakika yıkayın. Testisleri RNase A içeren embriyo kabına aktarın ve 37 santigrat derecede yarım saat inkübe edin.
RNA çözeltisini çıkarın ve nüfuz eden çözeltiden bir mililitre ekleyin. Testisleri nüfuz eden çözelti içinde oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin. Daha sonra testisleri ve PBST'yi her biri beş dakika boyunca iki kez yıkayın.
Testisleri, etiketli DNA probu ile 20 ila 30 mikrolitre hibridizasyon çözeltisi içeren 1.5 mililitrelik bir tüpe aktarın. Hibridizasyona izin vermek için karışımı gece boyunca karanlıkta 37 santigrat derecede inkübe edin. AP 1000 beyaz delikli filtreli uç yardımıyla, testisleri bir embriyo kabına aktarın, ardından beş dakika boyunca iki XSSC'de yıkayın.
SSC'yi çıkarın, ardından testisleri DAPI içeren ticari olarak temin edilebilen bir montaj ortamı kullanarak buzlu bir cam kızağa monte edin. Slaytı bir kapak kayma dolgu macunu ile kapatın ve oda sıcaklığında karanlıkta iki saat inkübe edin. İyi bir hibridizasyon seviyesi, spermatogenez boyunca hedeflenen kromozomların görselleştirilmesine izin verdi.
Etiketli cinsiyet kromozomlarının eşleşmesi prebiyotik ve miyotik aşamalarda görülebilir. X veya Y taşıyan spermatidler, ok şeklindeki olgun spermatozoanın son basamağına kadar farklı seviyelerde DNA yoğunlaşması ile işaretlenmiş spermiyogenez boyunca takip edilebilir.
