Başlamak için, anestezi uygulanmış fareleri cerrahi platforma yerleştirin. Saçları kestikten sonra, kurumasını önlemek için her iki göze de göz merhemi sürün. Ardından fareleri immobilizasyon için stereotaksik bir aparata sabitleyin.
Kafatasını tamamen ortaya çıkarmak için mikroskop altında küçük bir kesi yapın. Biri AAV2/5-adenosin 2A reseptörü shRNA, diğeri AAV2/5 karıştırma içeren iki adet 10 mikrolitrelik şırınga hazırlayın. Daha sonra bregma ve lambda'yı bulmak için mikroskobu kullanın ve fare beyni stereotaksik atlasına dayalı olarak 10 mikrolitrelik şırıngadaki koordinat noktasını ayarlayın.
Belirlenen koordinat noktasında kafatasında küçük bir delik açın. İki mikrolitre AAV2 / 5-Adenozin 2A reseptörü shRNA virüsünü, dakikada 100 nanolitre sabit bir hızda lateral enjeksiyon yoluyla beyin ventrikülüne enjekte edin. Geri çekmeden önce iğneyi 10 dakika yerinde tutun.
Virüs kaybını önlemek için tıbbi biyo fibrin yapıştırıcı kullanarak yaralı cildi derhal kapatın. Fareyi, iyileşmeyi kolaylaştırmak için vücut ısısını yaklaşık 37 santigrat derecede tutarak bir ısıtma yastığına yerleştirin. Deney grubu için Arosa L-D-L-T-D domates faresinin her bir lateral ventrikülüne iki mikrolitre CRE-TAT Rekombinaz ve kontrol grubu için iki mikrolitre steril PBS enjekte edin.
CRE-TAT Rekombinaz enjeksiyonundan iki hafta sonra, donmuş doku kesitleri hazırlayın, nükleer boyama yapın ve görüntüleme için slaydı hazırlayın Homozigot adenosin 2A reseptörü eritilmiş farede koroid pleksustaki adenozin 2A reseptörünün CRE-TAT kullanılarak yıkılması, EAE klinik skorlarının düşmesine neden oldu. Benzer şekilde, AAV2/5 shRNA kullanılarak adenozin 2A reseptörü vahşi tip farelerde koroid pleksusun yıkılması EAE klinik skorlarını azalttı. QPCR analizi, adenozin 2A reseptörünün mRNA seviyelerinin AAV2/5 shRNA ve CRE-TAT gruplarında her bir kontrole kıyasla azaldığını gösterdi.
Adenozin 2A reseptörünün, özellikle koroid pleksustaki susturulması, omuriliğe bağışıklık hücresi infiltrasyonunu azalttı.
